粉针剂无菌工艺验证培养基模拟分装

李惠

摘 要：想要粉针针剂车间生产线能够对无菌注射剂进行分装，同时能够满足有关的法规和无菌生产的工艺。需要在已经经过灭菌清洗的针剂瓶中灌入3%TSB培养基，在模拟无菌分装时，可将实际物料用无菌乳糖进行代替，惰性气体保护可用压缩的洁净空气进行模拟，经过灯检、压塞及轧盖后再来培养。样品先培养7d保持在20℃～25℃环境中，再在30℃～35℃的环境中进行7d的培养，并且设置阳性、阴性的对照组。最后操作人员表面微生物和无菌分装环境的微生物都通过了检测，也符合阳性、阴性的对照，未检出试验样本有微生物。所以在分装无菌粉针时，只要操作人员通过严格的培训，也按照要求的流程来操作，就可以实现实际生产产品保证无菌。

关键词：粉针剂 无菌工艺 分装

中图分类号：R944.1+1 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）01（b）-0235-02

粉针生产线生产过程要实现无菌化，需人员、环境、设备及工艺相结合，进行定期的无菌工艺试验来模拟，才能使得无菌分装注射剂符合相关规定及生产工艺的要求。为了让无菌制剂安全性得到保障，在生产过程中，就需要对整个过程中的无菌化程度进行评价，整个流程需经过严格精心设计且需要经过验证的流程和方法来进行。通常会用无菌惰性粉末代替药品来进行培养基模拟分装试验，在其中装进培养基来促进微生物的生长，通过观察微生物培养生长情况，就可以了解整个生产的无菌化情况及存在的问题。因为培养基与实际情况相比对微生物的生长繁殖更加有利，对无菌化生产过程进行模拟，就能对整个无菌措施的有效性进行验证。

1 验证准备工作

1.1 前提条件

首先针对参与无菌区、洁净区的人员，如果进行培养基分装操作，就要进行GMP知识的培训并进行考核通过后才能得到许可，对人员所负责的工作进行职责明确和授权。相关资源需要及时安排到位，比如胶塞、培养基、西林瓶及分装器具等都进行了灭菌清洗；保证监控生产过程的设备符合规定；有关设备和仪器如果用于分装培养基，需要进行相关的认证或复核以确保正常运行；有关于分装培养基的流程及结果确保经过了审核、培训等手续并具有有效性。

1.2 乳糖的无菌处理

用大概25kGy的钴60对乳糖先进行过度辐射进行灭菌，然后测试样本抑菌、无菌及溶解情况。对微生物的滋生情况进行每天观察，在试验过程中发现，微生物在所有样本及对照物上生长很明显，表明白色念珠菌及金黄色葡萄球菌在乳糖上不能被抑制。在对乳糖进行溶解性试验时，乳糖溶解为澄清溶液，根据我国药典附录中的“无菌检验法”检查乳糖样品是否无菌，结果全部乳糖均检测为无菌状态，所以根据试验可以确认乳糖满足无菌模拟分装测试的需求。

1.3 培养基的微生物生长性能

为确保所使用的培养基在无菌模拟实验中的有效性，需对培养基进行无菌及生物性能测试，保证在模拟分装测试中使用的培养基满足要求。通过实践说明，培养基模拟分装试验使用胰酪大豆胨液体配成3%的水溶液来测试是否符合测试要求的。

2 粉针剂无菌分装模拟验证

2.1 验证方法

首先需要进行培养基水溶液的配制，此过程需根据厂商的规定来进行，配制出3%水溶液，将其放入脉动灭菌柜进行灭菌操作后，再倒入所需数目的西林瓶中，瓶中也需确保无菌。然后，将无菌乳糖分装进有无菌培养基的西林瓶内，此过程需根据无菌分装的操作规定来进行，整个分装的过程应该详细的进行记录保存。在操作完之后，对西林瓶的分装顺序给予相应的标记或者标号。将分装好的样品进行倒置培养，环境温度需满足20℃～25℃，在此条件下至少要进行7d的培养，如果有的瓶子有密封性风险问题的需要及时去除。之后在30℃～35℃的温度环境中，再进行至少7d的培养。如果在此期间内，观察微生物生长状况时，发现有污染的情况，需要及时进行记录污染的批号、瓶数及日期等信息。再对污染的样品情况进行仔细鉴别，主要包括细胞形态、菌落和革兰染色特征等信息。还需要监测分装人员及环境状况，对于所取得的样本中如果微生物有阳性的，还要鉴别其微生物属、种等信息，同时也要检测所用的材料和工具是否都是无菌状态。

2.2 单位分装体积及分装数量

在进行体积选择时，要能够让容器内表面接触到培养基，再进行旋转和翻转，让密封件的内表面也接触到培养基，使得在培养微生物之后具体情况能够被观察到。在进行分装时，需考虑到微生物能够获得充足的氧气，顶部需留1/4的空间，培养基体积需大于瓶子总容积的1/3。此次测试把6.7mL的培养基装进了20mL的试验瓶中，根据相关规定及试验需求，此次共有3台KF32型分装机来进行分装，预计每台分装5000瓶，总共15000瓶。

2.3 培养基促生长性试验

在分装后的培养基中随即选择18份，其中进行细菌阴性对比的两份，进行真菌阴性对比的两份，在其他的样本中加入环境分离菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌及黑曲霉，分别准备各两份，含菌数均小于100cfu。阴性对照组也需要同时培养，培养真菌需5d，细菌需3d，其他的接种管都是有菌生长，而阴性对照组应该保持无菌的环境。

3 讨论

3.1 验证要求

只有厂房设施等已经完成确认，才可以进行分装模拟的试验，主要包括水系统、空气净化系统、真空系统及压缩空气系统；对物料传递系统及人员更衣系统进行验证；对环境熏蒸灭菌情况和干热、湿热灭菌系统进行验证；保证仪器设备都通过了校准。

3.2 从事验证的人员

管理、组织及实施人员如要进行培养基的分装测试，必须通过验证方案、更衣验证、岗位SOP、微生物知识及分析方式等培训，并且其能力需符合参与条件。在进行验证测试时，需让人员现场活动的频次降低，动作幅度尽量减小，严格遵守规定来进行无菌生产的操作。

3.3 验证过程中环境的监测

在进行验证时，监测微生物状态需根据有关的规定来操作，和平常的生产频次数保持一致，应该把无菌工艺的各个流程都包含进去。通常包含：浮游菌、沉降菌、空气粒子数、人员监测及表面微生物，对工作人员的口罩、无菌衣及手套等地方进行取样，保证微生物的数量保持在可以接受的范围以内。

3.4 对验证全过程控制

培养基在开展验证时，需要确认分装设备已经实现了无菌化，按照要求对胶塞、铝盖及西林瓶都要灭菌清洗而且通过了检验，同时所需要的文件都通过了审核批准可以进行。为了让最差情况的干扰活动得到体现，需要对实际过程中的计划干扰进度详细制定。在进行分装时，需要对中断、人员干扰操作、空机运转和异常状况等进行完整及时的记录。为了避免验证给后面的生产产生污染，需制定完善的方法来进行防止。

3.5 建议

培养基的选择应结合生产企业的产品特点和微生物菌种库的情况，選择能够适合广泛微生物的培养基。想要培养基能够维持并捕聚微生物活性的能力时，其中工艺惰性气体可使用无菌空气来代替；如果环境中需要低于0.1%的氧气浓度时，培养基可使用适合厌氧微生物成长的类型。在设计分装模拟计划时，应对实际班次进行考虑，因为其中包含了多个班次，在计划中还应该包含第二、三个班次，其他还需照顾到像夜班人员等的实际状态。

参考文献

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 白慧良，李武臣.药品生产验证指南（2003）[M].北京：化学工业出版社现代生物技术与医药科技出版中心，2003.

[3] 国家食品药品监督管理局认证中心编写.药品GMP指南[M].北京：中国医药科技出版社，2011.