乙型肝炎病毒感染患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ、OPN水平变化及意义

鲁晓娟，黄贺梅，彭旭阳，闫灿

(1郑州铁路职业技术学院，郑州451460；2郑州大学第二附属医院)

乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围严重的公共卫生问题，每年约100万人死于该病[1]。乙型肝炎发病转归同免疫机制关联，相关细胞因子水平可直接影响乙型肝炎预后。HBV慢性感染是由病毒本身、宿主免疫决定，而宿主免疫状态为HBV转归的关键[2]。急性HBV感染患者T细胞介导免疫反应强，可有效清除病毒，避免宿主再次感染；慢性HBV感染患者T细胞功能下降，为引起感染慢性化的关键因素。经HBV感染的乙型肝炎患者病情迁延、难以治愈，这主要是由于机体免疫系统抑制Th1/Th2细胞功能所致。研究表明，白细胞介素12(IL-12)、IL-21、干扰素γ(INF-γ)具有免疫调节作用。IL-12为异源二聚体糖蛋白，促进Th1应答，抑制Th2应答，发挥抗病毒效果；IL-21由CD4+T细胞分泌，促进CD8+T细胞增殖和应答，CD4+T细胞辅助CD8+T细胞在控制HBV慢性感染中十分重要[3]。文献[4]报道，骨桥蛋白(OPN)可启动Th1反应，导致Th1/Th2功能紊乱，引起肝坏死。本研究观察了137例HBV感染患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平变化，并探讨其临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年2月～2017年3月在郑州大学第二附属医院就诊的HBV感染患者。纳入标准：①诊断符合中华医学会肝病学分会制定的标准；②患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：①合并感染甲肝、丙肝等其他肝炎病毒；②有遗传性肝病、胆汁淤积性肝病和自身免疫性肝炎；③入院前6个月接受过抗乙肝和免疫调节治疗。共收集患者137例(HBV组)，其中乙肝携带33例[男20例、女13例，年龄(39.84±4.41)岁]、急性乙肝37例[男21例、女16例，年龄(40.25±5.13)岁]、慢性乙肝42例[男27例、女15例，年龄(39.89±3.82)岁]、乙肝肝硬化25例[男14例、女11例，年龄(40.01±5.11)岁]。同时选取60例健康志愿者作为对照组，男35例、女25例，年龄(40.23±4.39)岁。HBV组不同感染状态者与对照组性别、年龄比较差异无统计学意义(P均>0.05)。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN检测方法 所有研究对象取空腹静脉血5 mL，以3 500 r/min离心10 min，将分离的血清-20 ℃保存。用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN，试剂盒购自上海恒远生物公司，按照说明书操作。

2 结果

2.1 两组血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较 HBV组中急性乙肝患者血清IL-12、IL-21和IFN-γ水平均高于乙肝携带、慢性乙肝和乙肝肝硬化患者及对照组(P均<0.05)，乙肝肝硬化患者血清OPN水平均高于乙肝携带、急性乙肝、慢性乙肝患者及对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 两组血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较

注：与对照组比较，aP<0.05；与乙肝携带比较，bP<0.05；与急性乙肝比较，cP<0.05；与慢性乙肝比较，dP<0.05。

2.2 HBV组不同HBeAg表达患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较 HBV组中，HBeAg阴性表达者血清IL-12水平高于HBeAg阳性表达者(P<0.05)，两者血清IL-21、IFN-γ和OPN水平比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 HBV组不同HBeAg表达患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较

2.3 HBV组不同HBV-DNA复制程度患者血清L-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较 HBV组中，HBV-DNA≤103copies/mL者血清IL-12水平高于104～106copies/mL和≥107copies/mL者(P均<0.05)，两者血清IL-21、IFN-γ和OPN水平比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

3 讨论

表3 HBV组不同HBV-DNA复制程度患者血清L-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比较

注：与≤103copies/mL者比较，aP<0.05；与104～106copies/mL者比较,bP<0.05。

WHO估计，全世界至少3.5亿人为HBV携带者，每年有大量患者死于乙型肝炎引发的相关疾病。乙型肝炎严重威胁患者生命安全，在临床已得到广泛关注[5]。乙型肝炎患者在HBV感染后病情延长、难以治愈，直接影响患者正常生活。目前研究[6]认为，乙型肝炎的发生、转归同细胞免疫密切相关，细胞因子对HBV产生复杂作用。HBV感染患者的免疫因素在肝细胞损伤、病毒清除中十分重要，但目前相关的机制尚未完全明确。目前多数研究[7]认为，CD4+T细胞和CD8+T细胞参与免疫抑制，导致肝损伤，直接影响疾病进展和转归。

CD8+T细胞为HBV感染后清除病毒的T细胞，感染早期刺激产生CD8+T细胞，产生抗病毒效果。CD8+T细胞的产生需要CD4+T细胞辅助，慢性HBV患者体内CD4+T细胞功能耗竭。研究[8]显示，HBV合并HCV感染患者CD4+T细胞和CD8+T细胞可通过相互作用而清除病毒，增加患者体内CD4+T细胞和CD8+T细胞数量可以提高HBV病毒的清除效果。

IL-12由B细胞、巨噬细胞分泌，可促进Th1增殖，抑制Th2分化，增加血清中IL-15、IL-18、IFN-γ水平，而IFN-γ可促进IL-12产生。因此，IFN-γ和IL-12在调节Th分化上具有协同作用，促进Th2增殖，使Th1和Th2互相协同。IL-21是由CD4+T细胞分泌的细胞因子，在肿瘤、自身免疫病、控制病毒中十分重要[9]。研究[10]指出，IL-21可促进CD3抗体活化和外周T细胞增殖，促进CD8+T细胞活化和对病毒的清除，提高CD8+T细胞的免疫功能。Th17为IL-21的重要分泌细胞，在HBV感染中具有重要的作用。肝功能衰竭患者血清IL-21水平较高，可活化B细胞、T细胞，进而清除病毒感染或释放炎性因子导致肝细胞损伤。IFN-γ为抗病毒免疫调节因子，可调节免疫功能，抑制HBV合成，同时可经非溶细胞机制抑制HBV复制[11]。在动物试验中，CD8+T细胞、NK细胞、Th细胞识别HBV抗原，分泌IFN-γ可有效抑制肝脏HBV复制[12]。

OPN为带负电荷的分泌型磷酸蛋白，参与多种病理和生理过程，为细胞免疫和Th细胞免疫的主要因子。研究[13]发现,OPN可刺激巨噬细胞分泌IL-12。近年来，OPN水平改变在肝硬化发生发展和慢性肝炎中的作用逐渐受到重视。OPN可加速肝纤维化，肝癌组织OPN表达明显高于正常肝组织。研究[14]指出，正常肝细胞内基本不表达OPN，原发性肝癌组织中OPN表达升高。在临床中，OPN可作为原发性肝细胞癌术后肝转移复发和预后的指标[15]。本研究显示，乙肝肝硬化者OPN高于对照组、乙肝携带者、急性乙肝者和慢性乙肝者，考虑这可能与OPN可促进肝纤维化的发生，而肝硬化患者纤维化程度较重有关。

综上所述，不同HBV感染状况患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平有所差异，其中IL-12与患者HBeAg表达和HBV-DNA病毒载量有一定关系。在临床诊断和治疗过程中可检测IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平，用以辅助制定治疗方案并评估预后。

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