超敏乙肝DNA检测对HBcAg阴性HBV感染者的诊治意义

杨娜　袁涛　张囡囡

【摘要】目的：比较传统PCR法与超敏乙肝DNA检测方法对HBeAg阴性HBV感染者检出率的差异，探讨超敏乙肝DNA检测在乙肝诊治中的优势。方法：收集本院HBeAg阴性HBV感染者436例，其中代偿期肝硬化组39人，慢乙肝组178例，HBcAb+查体组219例，同时用传统PCR法和超敏乙肝DNA检测方法检测其病毒含量，比较其差异。结果：代偿期肝硬化组传统PCR法及超敏乙肝PCR阳性检出率为分别为69.23%及92.31%，两组比较差异有统计学意义（X²=5.283，P=0.02%0.05）；慢乙肝组两种检测法阳性检测率分别为2.80%及11.80%，两组比较差异有统计学意义（X²=9.336，P=0.001%0.05）；HBcAb+查体组分别为0.46%和1.83%，两组比较差异无明显统计学意义（X²=1.821，P=0.177>0.05）。结论：超敏乙肝DNA检测在慢性HBV患者抗病毒指导、病毒学应答评估、核苷类药物耐药预测及隐匿性肝炎的检出方面具有重要意义。

【关键词】超敏乙肝DNA检测方法；传统PCR法；HBeAg（-）

HBeAg阴性CHB是由于HBV发生变异和（或）宿主免疫压力下形成的一种特殊的CHB临床类型，发病隐匿，临床症状不明显，病毒含量较低，相对于HBeAg阳性CHB，这类患者年龄更大，病史更长，肝脏纤维化程度较重，而且对抗病毒治疗的持久应答率更低，更易进展为肝硬化和HCC。及时有效抗病毒治疗是控制病情及预防不良预后的重要手段。HBV DNA定量检测主要用于判断慢性HBV感染的病毒复制水平，是评估乙肝感染状态、传染性强弱、病情严重程度的重要指标，可用于抗病毒治疗适应证的选择及疗效的判断，并且在乙肝病毒变异耐药预测具有重要意义，既往多项研究表明超敏法的检测灵敏度显著高于传统方法。本文作者通过比较传统PCR法与超敏乙肝DNA检测方法对HBeAg阴性HBV感染者检出率的差异，探讨超敏乙肝DNA检测在乙肝诊治中的优势，内容如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集本院2016年1月至2017年6月HBeAg阴性HBV感染者共436例，其中男性240例，女性196例，平均年龄（42±8.5）岁。所有患者（乙型肝炎肝硬化代偿期、慢性乙型病毒性肝炎）均符合《2015年慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准，肝癌、合并其它病毒感染、口服免疫抑制剂患者除外。代偿期肝硬化组患者39例，为HBeAg阴性乙型肝炎肝硬化代偿期初治患者，乙肝五项指标为HBsAg+，HBsAb-，HBeAg-，HBeAb+，HBcAb+；慢性乙型病毒性肝炎组共178例，为HBeAg阴性慢性乙型病毒性肝炎患者，口服核苷类似物疗程24～48周，乙肝五项指标为HBsAg+，HBsAb-，HgeAg-，HBeAb+或-，HBcAb+；HBcAb+查体组共219例，乙肝五项指标示HBsAg-，HBsAb-或+，HBeAg-，HBeAb-或+。HBcAb+。

1.2方法

同时采集空腹外周静脉血标本2份各4mL，常规离心分离获得血清，每份血清标本同时采用超敏法和传统外标法对血清中HBV DNA进行定量检测。

超敏法（Sensitive）：仪器包括NP968-C自动核酸提取仪和TL988-Ⅳ扩增仪，试剂使用苏州天隆生物科技有限公司的核酸定量检测试剂盒（荧光PCR法）。最低检测值低于10IU/mL。

传统PCR法（Traditional）：试剂采用中山大学达安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法），检测仪器使用中山达安DA7600PCR仪。最低检测值低于500IU/mL。

两种方法核酸提取及检测过程均按照相应试剂盒及仪器的操作说明进行。

1.3统计学方法

应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析，计数资料采用卡方检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

代偿期肝硬化组传统PCR法阳性检出率为69.23%（27/39），超敏乙肝PCR检测法阳性检出率为92.31%（36/39），两组比较差异有统计学意义（X²=5.283，P=0.02<0.05），差异有统计学意义。慢性乙肝组传统PCR法阳性率2.80%（5/178），超敏乙肝PCR检测法在阳性检出率为11.80%（21/178），两组比较差异有统计学意义（X²=9.336，P=O.001<0.05），差异有统计学意义。HBcAb+查体组传统PCR法和超敏乙肝PCR检测法在阳性检出率上分别为0.46%（1/219）和1.83%（4/219），两组比较差异无明显统计学意义（X²=1.821，P=0.177>0.05）。见表1。

3讨论

HBV DNA定量检测主要用于判断慢性HBV感染的病毒复制水平，可用于抗病毒治疗适应证的选择及疗效的判断。2015年慢性乙型肝炎防治指南建议采用灵敏度和精确度高的实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR）法。超敏HBVDNA定量检测系统采用磁珠吸附法全自动核酸提取系统对血清标本进行核酸提取纯化，回收率高，重复性好，减少了人为误差；定量方法采用内部标准品，在检测前加入每一个临床血清标本中，与标本同时提取和扩增，一方面，根据标准品的扩增曲线对乙肝病毒DNA进行定量，另一方面，消除了由于核酸提取、扩增效率不同而造成的管间差异，检测灵敏度更高，定量线性范围更宽，定量结果更准确、可靠，从而准确定量低载量HBV DNAE。

指南指出，对于存在肝硬化证据HBV DNA阳性患者，无论ALT及HBeAg情况，均建议积极抗病毒治疗。本次研究显示HBeAg肝硬化代偿期患者传统PCR法检出率为69.23%，超敏乙肝PCR检测法阳性检出率为92.31%，两组差异有统计学意义。提示：1）HBeAg阴性乙肝肝硬化患者病毒载量低；2）超敏乙肝PCR检测法可更准确指导乙肝肝硬化代偿期抗病毒治疗，进而早期控制病毒，延缓肝硬化进展，预防肝癌、肝衰竭等不良事件发生。

高效低耐药核苷（酸）类似物较干扰素副作用小，用药方便，是目前抗病毒治疗的一线用药。口服核苷类似物药物抗病毒的慢性HBV患者，于治疗过程中，需观察病毒应答情况以评估药物疗效及疾病转归，其应答不佳、突破及反弹是乙肝病毒变异、核苷类药物耐药风险评判指标。本研究显示口服核苷类药物（24～48周）HBeAg阴性慢性乙肝患者超敏乙肝PCR檢测阳性率高于传统PCR法（11.80%>2.80%），两组比较差异有统计学意义。提示：1）HBeAg慢乙肝患者口服高效低耐药核苷类似物24～48周病毒学应答率高，但仍有部分应答不佳；2）超敏乙肝PCR检测法可早期发现耐药风险，有利于病情预后评估。在进一步的随访研究中可定期监测阳性患者病毒应答情况，了解有无耐药发生及病情转归。

隐匿性CHB是血清HBsAg阴性，但血清和（或）肝组织中HBVDNA阳性，并有CHB的临床表现。除HBV DNA阳性外，患者可有血清抗-HBs、抗-HBe和（或）抗-HBc阳性，但约20%隐匿性CHB患者的血清学标志物均为阴性。诊断主要通过HBV DNA检测，尤其对抗-HBc持续阳性者。隐匿性肝炎多与HBSAg变异相关，发生率低，临床表现不明显，其检查率及检出率较低，进而耽误治疗。本研究就HB-sAg阴性及抗-HBc阳性患者同时进行传统PCR法和超敏乙肝DNA检测方法，结果显示超敏检测法检出率较高，但差异无统计学意义。原因考虑以下方面：1）样本量少；2）隐匿性肝炎发病率低；3）隐匿性肝炎病毒含量低。

综上所述，超敏乙肝DNA检测在慢性HBV患者抗病毒指导、病毒学应答评估、核苷类药物耐药预测及隐匿性肝炎的检出方面具有重要意义。