永年县蛋鸡新城疫免疫抗体检测与分析

2018-04-25 01:17邢荷岩宋志芳胡孟娟
饲料博览 2018年2期
关键词:新城疫效价蛋鸡

邢荷岩,宋志芳,胡孟娟

( 1.河北农业大学 动物科技学院,河北 保定 071000;2.南京农业大学 动物医学院,南京 210095)

鸡新城疫是养禽业首要注意的疾病之一,引起鸡和多种禽类的急性、热性、高度接触性传染病,每年给我国养殖业造成巨大的经济损失[1]。目前新城疫虽然在集约化养殖场得到了很好的控制,但是在散养鸡中仍然是一个普遍存在的问题。非典型的鸡新城疫是由1型禽副黏病毒引起的一种疫病,常见于规模化的养鸡场,严重影响了雏鸡的正常生长,造成产蛋鸡产蛋效率大幅下降。当前依据非典型新城疫的临床症状和病理学变化与典型新城疫进行区别,进行新城疫的初步诊断,然而大部分非典型新城疫的发病和死亡率比典型新城疫低,可通过疫苗免疫接种方法来降低非典型的新城疫发生的风险[2-3]。对332次非典型的新城疫病例进行了数据统计分析后发现,非典型新城疫的疾病发生大多在春天5月开始逐渐地上升至春季6月,而夏天则从7月开始下降至8月,然而到秋天的9月又呈现急剧的上升趋势[4]。

1 材料与方法

检测分析永年县蛋鸡新城疫的免疫抗体水平,分别对不同批次的蛋鸡群随机选取80只,通过翼静脉采血分离血清。依据《新城疫诊断技术规范》(GB16550-2008),采用血凝抑制试验对血清样品中的新城疫免疫抗体进行检测[5]。

1.1 材料

1.1.1 待检鸡群

永年县某鸡场蛋鸡,选取7日龄、22日龄、35日龄、60日龄、120日龄的蛋鸡群各10个,每个鸡群随机选取8只。

1.1.2 器材

滤纸、试管、试管架、高压灭菌器、离心机、离心管、内径2 mm聚乙烯塑料管100 cm、三棱针、酒精灯、注射器(2.5 mL)、石蜡、0.025 mm微量吸液器、96孔V型微量凝集试验板、恒温培养箱、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。

1.1.3 药品

标准抗原(实验室提供);生理盐水(实验室提供);3.8%枸橼酸钠(实验室配制);1%的鸡红细胞悬液(实验室自制);待检血清(永年县选取的鸡群采血后制备)。

1.2 方法

1.2.1 1%红细胞悬液的配置

在鸡翅静脉或心脏采10 mL的血液,并且将其与枸橼酸钠抗凝剂混匀后,取5 mL的血样和95 mL生理盐水一起加入2个离心管中,2 000 r·min-1离心5 min,用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜,将已经沉淀的红细胞中加入稀释液(既生理盐水)中洗涤。再2 000 r·min-1离心5 min,吸去其中的上清液再把上面的操作步骤重复3~4次。结束操作后,用微量加样器吸5ul的红细胞加入495 uL理盐水中,再充分的混匀最后则制成了1%红细胞混悬液。

1.2.2 被检血清的制备

在永年县随机选取7日龄、22日龄、35日龄、60日龄、120日龄的蛋鸡群各10个,每个鸡群随机选取8只蛋鸡共400只蛋鸡,分别编好号后再登记,然后用已经消过毒的干燥的注射器采血,将血液注入干净且干燥的试管内,在室温中静置或离心等待血清彻底的析出后再使用[6]。注意不能同时把一个注射器用于俩个及以上的鸡只。

1.2.3 鸡新城疫抗体水平检测

现采用微量法来进行鸡新城疫病毒的HA试验与HI试验,再用u或v形微孔塑料板来代替经常使用的试管[7]。在其试验前需要首先检查血清有无凝集特性,如果发现其血清有凝集特性则需用鸡红细胞对血清进行吸附。

血液凝集(HA)试验具体的操作步骤:首先用移液器向每个孔加入稀释液1滴;用微量移液器取病毒抗原0.05 mL,加入第1孔,反复抽动6次后,吸出0.05 mL加入第2孔,在第2孔反复抽动6次后,吸出0.05 mL孔,如此连续稀释至第11孔后吸出0.05 mL弃去。第12孔不加病毒液为红细胞空白对照;换吸头再吸取1%鸡红细胞悬浮液依次加入到第1~12孔,每孔加入0.05 mL;放在振荡器上震荡1~2 min,在室温条件下静置(约21℃)40 min,或者恒温培养箱37℃下作用5~10 min,当对照孔的红细胞出现了明显的纽扣状时来判定[8]。

判定血凝特性:将凝集反应板倾斜,后再观察其中有没有线状流淌,完全凝集是如果孔底的红细胞铺平孔底,凝成均匀薄层,倾斜后红细胞不流动,表明红细胞被病毒所凝集。最高稀释倍数作为血凝效价,这表示1个血凝单位,然后再根据初始的稀释倍数来计算血凝的效价。也就是病毒液的HA效价以出现了完全凝集的抗原最大稀释度为准。HI试验时,病毒抗原液为0.05mL内须含4个的凝集单位,如上所说的应该将原病毒液作成64/4=16倍的稀释液[9]。

红细胞凝集抑制(HI)试验: 因为新城疫的病毒有凝集红细胞的作用,且能被特异性抗体所抑制,因此可用血凝抑制试验测定被检鸡血清中的HI抗体效价(即滴度),能用标准血清作为新分离病毒的鉴定与未知病毒的诊断测定。

具体操作如下:用移液器向每孔加0.05 mL稀释液,11孔加0.1 mL的稀释液;再用移液器吸取被检血清(或高免卵黄抗体)0.05 mL注入第1孔,抽放6次后,吸出0.05 mL,注入第2孔内,如此连续稀释至第10孔,并从第10孔吸出0.05 mL弃去,血清稀释倍数依次为1:2~1 024,11孔和12孔空白;每孔再加入已标定好的四单位病毒液0.05 mL,第11孔为红细胞对照孔,其内不加病毒液;置于振荡器上振荡上1 min,放在19~21℃静置20 min;每孔再加入0.7%红细胞悬浮液0.05 mL,放振荡器上振荡1 min,置于19~21℃下,30~60 min后再判定其结果;第11孔作为红细胞对照孔,第12孔作为抗原对照孔。

结果观察:首先将反应板倾斜成45℃,观察沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流淌者为沉淀,表明红细胞未被或不完全被病毒凝集;如果孔底的红细胞铺平孔底,凝成均匀薄层,倾斜后红细胞不流动,表明红细胞被病毒所凝集[10]。

将4单位的病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数,称为该血清的红细胞凝集抑制效价,以被检动物血清的稀释倍数或以2为底的对数来表示。第11孔仅含稀释液和红细胞为不凝集对照孔,第12孔含稀释液,病毒液和红细胞为凝集对照孔。

2 试验结果

分别对不同批次的蛋鸡群随机选择,翼静脉采血,分离血清。依据《新城疫诊断技术规范》(GB16550-2008),采用血凝抑制试验对血清样品中的新城疫免疫抗体进行检测。

表1 永年县7日龄蛋鸡新城疫的抗体水平(Log2)

2.1 7日龄各鸡群新城疫抗体效价检测结果

永年县7日龄蛋鸡新城疫的抗体水平见表1。

由表1可知,永年县7日龄的蛋鸡抗体水平大部分都集中在1~4滴度,其平均抗体水平集中在2~3,抗体水平低需要进行全方面合理的疫苗接种,加强饲养管理等方面来提高7日龄蛋鸡的抗体水平。

2.2 22日龄各鸡群新城疫抗体效价检测结果

永年县22日龄蛋鸡新城疫的抗体水平见表2。

由表2可知,永年县22日龄的蛋鸡的抗体水平大部分都集中在2~7滴度,其平均抗体水平集中在3~5,抗体水平也比较低需要进行全方面的合理的疫苗接种,并加强饲养管理等方面来提高22日龄蛋鸡的抗体水平。

2.3 35日龄各鸡群新城疫抗体效价检测结果

永年县35日龄蛋鸡新城疫的抗体水平见表3。

由表3可知,永年县35日龄的蛋鸡的抗体水平大部分都集中在4~9滴度,其平均抗体水平集中在6.25~8.37,35日龄的蛋鸡的抗体水平很明显比7日龄和22日龄的蛋鸡有了显著的提高,制定合理的饲养管理程序保持蛋鸡有较高的抗体水平。

2.4 60日龄各鸡群新城疫抗体效价检测结果

永年县60日龄蛋鸡新城疫的抗体水平见表4。由表4可知,永年县60日龄的蛋鸡的抗体水平大部分都集中在7~11滴度,其平均抗体水平集中在8~10.12,60日龄的蛋鸡的抗体水平很明显比35日龄的蛋鸡抗体水平有了显著的提高,制定合理的饲养管理程序保持蛋鸡有较高抗体水平。

表2 永年县22日龄蛋鸡新城疫的抗体水平(Log2)

表3 永年县35日龄蛋鸡新城疫的抗体水平(Log2)

表4 永年县60日龄蛋鸡新城疫的抗体水平(Log2)

2.5 120日龄各鸡群新城疫抗体效价检测结果

永年县120日龄蛋鸡新城疫的抗体水平见表5。

由表 5可知,永年县120日龄的蛋鸡的抗体水平大部分都集中在9~12滴度,其平均抗体水平集中在9.87~11.25,120日龄蛋鸡的抗体水平很明显又比60日龄的蛋鸡有了显著的提高,同时制定合理的饲养管理程序可以保持蛋鸡有较高的抗体水平。由此根据测定的结果来调整免疫接种的时间,可看出>60日龄的蛋鸡免疫程序比较合理,保持合理的饲养管理方式,可全方面的预防蛋鸡新城疫疾病。

表5 永年县120日龄蛋鸡新城疫的抗体水平(Log2)

3 结 论

试验通过对永年县蛋鸡新城疫的检测与分析的研究对鸡新城疫方面的知识有更深入的了解,鸡群接种新城疫疫苗后,再测血清中的HI抗体效价,若HI抗体效价无明显的提高,则表示其免疫失败,因此平时也应该多加注意疫苗的合理的使用即疫苗的免疫途径、疫苗的免疫接种、免疫接种的时间、免疫程序、免疫剂量等因素。为更好的预防和控制蛋鸡新城疫疾病的发生,除做好了解以上相关问题外还需要对蛋鸡新城疫疾病的本质有进一步的了解,因此需不断的研究和探讨[11-12]。

本次试验使用血凝和血凝抑制试验对邯郸市永年县某鸡场的鸡新城疫抗体检测,判断本地区新城疫免疫保护效果 ,试验结果表明,永年县7日龄和22日龄的蛋鸡抗体水平较低,35日龄和60日龄蛋鸡抗体水平稍微上升,抗体水平离散程度降低,120日龄抗体水平明显增加,其离散程度也明显降低。结果表明,现有的免疫程序完全可以保护鸡群免受新城疫病毒的侵袭。

[参考文献]

[1] 吕丽萍,曾婷婷,徐家芳,等.鸡新城疫不同免疫程序的抗体水平测定及攻毒保护试验[J].广西畜牧兽医,2011,27(1):12-15.

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