福林酚法测定闽产盐肤木根茎中总酚酸的含量

叶永华 ，张 双 ，游立群 ，江颖倩 ，许 文 ，2，叶 淼 ，2，徐 伟 ，2*

（1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学生物医药研发中心，福建 福州 350122）

盐肤木Rhus chinensis Mill.为漆树科盐肤木属落叶小乔木［1］，据《开宝本草》记载盐肤木根茎功能利水消肿、活血散瘀、行气止痛［2］。现代药理学研究表明：盐肤木根茎具有改善冠状动脉循环和血液流变性的作用［3］。其有效成分为酚酸、鞣质、黄酮、三萜及这几大类型化合物的苷类［2］，酚酸是一类结构复杂的多元酚化合物，它是盐肤木的主要成分，也是其主要的药效物质基础［3］。用紫外分光光度法测定中药中的酚酸、黄酮含量［4，5］比较常见，而目前未见盐肤木根茎质量评价报道，因此本研究建立盐肤木根茎中总酚酸含量的测定方法，为盐肤木质量标准奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-1800型可见分光光度计（日本岛津公司）；Sartorius CPA225D十万分之一天平［赛多利斯（上海）科学仪器有限公司］；IKA RV10型旋转蒸发仪（德国IKA公司）；SHB-III型循环水多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；LX-07A型多功能粉碎机（上海江信科技有限公司）；HH-Z型数显恒温水浴锅（常州国华电器公司）。

1.2 试药 盐肤木产于福建，盐肤木根茎于2015年12月20日购自安徽协和成药业饮片有限公司，批号15122201，经福建中医药大学范世明高级实验师鉴定为盐肤木根茎Rhus chinensis Mill.，样品均采用自然阴干的方法干燥。没食子酸对照品（纯度≥98.0%，中国食品药品检定研究院，批号：110831-201204）；碳酸钠、磷钼钨酸试剂、乙醇等试剂均为分析纯；实验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备 精密称定没食子酸25 mg放置于50 mL棕色量瓶中，加适量水超声溶解，稀释至刻度，摇匀；再从中精密移取5 mL至25 mL量瓶并加水定容，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液制备 取切成块的盐肤木根茎，粉碎，过40目筛，取粉末0.5 g，置50 mL具塞锥形瓶中，加入10倍量60%乙醇，精密称定；水浴回流提取1.5 h，精密称定，用60%乙醇补足减失重量，滤过，即得。

2.3 总酚酸含量测定

2.3.1 总酚酸显色方法及波长测定 依据参考文献［6］测定总酚酸的方法，分别精密移取没食子酸对照品溶液、供试品溶液1 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，再加水至12 mL，按照下述总酚显色方法显色：加入磷钼钨酸试剂1 mL，最后用29%碳酸钠溶液定容，摇匀后在30℃水中保温35 min；再将供试品以及对照品显色溶液分别以同样处理的空白显色体系为空白对照，在400～800 nm波长处进行扫描，它们的最大吸收波长都在760 nm左右，因此将760 nm作为总酚酸含量测定波长。如图1所示。

图1 盐肤木中总酚酸全波长扫描图

2.3.2 标准曲线绘制 精密吸取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL， 分别置 25 mL 量瓶中，加水至12 mL，即得不同浓度的对照品溶液。按“2.3.1项”总酚酸显色的方法，按照相同处理的空白显色体系为空白对照，在760 nm波长处测定其吸光度。以吸光度A对浓度C建立标准曲线，得线性回归方程：A＝89.874C＋0.0223，r＝0.999。 结果表明：没食子酸在1.0～10.0 μg／mL范围内，线性关系良好。

2.3.3 总酚酸含量测定 按2.2项制备供试品溶液，取供试液 1 mL置 25 mL瓶中，按 2.3.1项的方法测其吸光度，代入标准曲线计算，并按下式计算总酚酸得率：

总酚酸得率／%＝（总酚酸含量／药材质量）×100%。

2.3.4 精密度试验 分别精密移取供试品溶液和对照品溶液1 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照“2.3.1项”显色方法进行显色，用紫外分光光度计连续测定6次吸光度。结果：对照品和供试品显色吸光度RSD分别为0.11%和0.13%。

2.3.5 重复性试验 精密称取同批盐肤木样品0.5 g，6份，按“2.2项”制成供试品溶液；精密移取1 mL，按照“2.3.1项”显色，测定其吸光度并代入标准曲线计算，得该批次盐肤木根茎中总酚酸平均含量为3.58%，RSD为2.29%。

2.3.6 稳定性试验 分别精密移取供试品溶液和对照品溶液1 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照“2.3.1 项”显色，分别在 35、50、70、90、130、150 min，测定样品吸光度。从表1中可知：随着显色时间变化，样品吸光度逐渐下降，而在130 min内样品吸光度RSD为1.34%，表明样品显色后在130 min内稳定。

2.3.7 回收率试验 取与重复性试验同批盐肤木样品0.5 g 6份，分别置于50 mL具塞锥形瓶中，加入近似样品总酚酸含有量的对照品量（没食子酸17.8 mg），按照“2.2项”制成供试品溶液；精密移取1 mL，按照“2.3.1项”显色方法显色，测定其吸光度并代入标准曲线计算，测得平均回收率为98.93%，RSD为2.82%。

表1 加样回收实验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定 精密称取与重复性试验同批盐肤木样品0.5 g，平行测定3份，按“2.2项”制成供试品溶液；精密移取1 mL，按“2.3.1项”显色，以相应的空白显色体系试剂为空白对照，测定吸光度并代入标准曲线，计算总酚酸含量。见表2。

表2 盐肤木根茎中总酚酸含量测定（x±s）

3 讨论

3.1 根据前期预实验结果，福林酚法具有所用的试剂量少、测定时间短、且在显色过程相比于三氯化铁-铁氰化钾显色法更稳定的特点，因此本实验采用福林酚法测定闽产盐肤木根茎中总酚酸的含量。福林酚法经过方法学验证，符合各项分析要求，且该方法准确、简便、快速，可用于盐肤木根茎中总酚酸的含量测定，为制定盐肤木质量标准奠定基础。

3.2 本实验在供试品溶液进行显色时候，最后是用29%碳酸钠溶液进行定容。因为乙醇浓度过高会导致碳酸钠析出，故本实验采用少量供试品溶液进行测定或者将乙醇提取溶液进行浓缩，再重新用水去复溶。

3.3 采用福林酚法测定总酚酸时的显色时间为35 min后，经稳定性考察，显色后总酚酸吸光度在130 min内样品吸光度RSD为1.34%，表明样品显色后在130 min内稳定。因此为了更加精确测定盐肤木根茎中总酚酸的含量，应该在样品显色完之后，快速测定。

参考文献：

［1］ 陈存武，张莉，何晓梅，等.盐肤木总黄酮的提取研究［J］.湖南农业科学，2010（13）：119-122.

［2］ 高洁莹，龚力民，刘平安，等.盐肤木属植物研究进展［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21（8）：215-218.

［3］ DJAKPO O，YAO W.Rhus chinensis and Galla Chinensis-folklore to modern evidence：review ［J］.Phytother Res.2010，24（12）：1739-1747.

［4］ 范世明，陈琳，林婧，等.福建不同产地三叶青叶中总黄酮含量比较［J］.福建中医药，2015，46（3）：38-40.

［5］ 张秀才，吴岩斌，吴锦玉，等.金线莲总黄酮回流提取工艺研究［J］.福建中医药，2013，44（4）：53-55.

［6］ 牛雪.福林酚法测定葡萄酒总酚的优化研究［D］.银川：宁夏大学，2015.