酸奶对慢性肾功能衰竭辅助治疗作用的研究

潘　蕾　高　飞　李树森　钱文涛　彭　程　李洪亮母智深

（内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司，内蒙古和林格尔　011500）

近年来，我国肾疾病的发病率呈明显上升的趋势，大部分肾病患者最后往往会发展为肾功能衰竭，肾功能衰竭的临床表现复杂，治疗困难，预后较差，死亡率极高，而且需要依赖透析或进行肾脏移植。因此，在肾病发展初期至终末期之前，采取有效的措施延缓肾病患者病程进展，具有重要的意义。

酸奶中含大量的活乳酸菌及有用的代谢产物，能促进钙、磷的吸收，水解部分蛋白质和乳糖，具有很高的营养价值。酸奶由于乳酸菌的发酵作用，在营养成分得到改善的同时，也产生了一些生理活性物质，对机体功能有显著的调节作用，达到防病治病的效果。

据国外报道，有些地区从牛乳中提取某些活性成分用于各种炎症的治疗。为进一步探索酸奶的营养功效，本试验以酸奶为研究对象，通过建立慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠病理模型，探讨酸奶配合药物对CRF病程的影响，为采用饮食疗法缓解CRF病情的研究提供试验依据。

1　材料与方法

1.1　材料

1.1.1　试验动物

Wistar大鼠，40只，雄性，体重200 g～220 g，无特定病原体（SPF）级，购于北京维通利华实验动物有限公司，合格证号：SCXK（京）2006-0009；饲养条件：室温24℃±2℃，相对湿度50%～60%，通风良好，自由进食饮水，饲料为全价颗粒。

1.1.2　主要药物与试剂

酸奶，蒙牛冠益乳，蒙牛乳业有限公司；腺嘌呤，加拿大进口，南京博尔迪生物科技有限公司销售，产品批号AD0013；尿毒清颗粒，康巨药业（内蒙古） 有限责任公司，产品批号20100204；血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶 （SOD）、血清总蛋白（TP）、钙 （Ca）、磷 （P）、尿蛋白 （UP） 和 24 h 尿量，均购于南京建成生物工程研究所，产品批号：20100914。

1.2　方法

1.2.1　动物分组、造模及给药

将40只Wistar雄性大鼠适应1周后，标记称重，随机分为4组，即正常对照组、病理模型组、尿毒清治疗组、酸奶配合药物治疗组，每组10只。正常对照组灌胃灭菌蒸馏水，灌胃剂量10 mL/kg·d。其余各组大鼠给予2%的腺嘌呤混悬液按200mg/kg·d剂量灌胃给药，造模周期24 d，第1 d～12 d每天灌胃1次，第13 d～24 d隔日灌胃1次。造模结束后，正常对照组和病理模型组每天9点和15点分别灌胃15 mL/kg·d的生理盐水；尿毒清药物治疗组和酸奶配合药物治疗组每天9点灌胃15 mL/kg·d的尿毒清颗粒，15点分别灌胃15 mL/kg·d的生理盐水和15 mL/kg·d的酸奶。

1.2.2　试验药品的配制

腺嘌呤悬浊液：蒸馏水配制，质量浓度为2%的混悬液。

尿毒清溶液：蒸馏水配制，质量浓度为25%的溶液。

1.2.3　观察指标

观察整个试验期间大鼠的体重、神态、毛发及活动的变化情况。于造模期的第8天、第16天、第24天以及治疗期的第7天、第14天、第21天、第28天，称量体重，将大鼠置于代谢笼中留取24 h尿液，测定尿量和尿蛋白，造模期第24天及治疗期第28天心脏采血留样，治疗第28天后，股动脉采血，断颈处死。

1.2.4　检测方法

Scr、BUN、TP、24 h尿蛋白、NO、SOD、Ca和P：依照试剂盒说明书检测。

1.3　统计学处理

采用Spss for windows 16.00统计软件处理，数据均以“平均值±标准偏差（X±S）”的形式表示，多组间比较采用方差分析，P＜0.05有统计学意义。

2　结果与分析

2.1　造模期间大鼠各项指标

2.1.1　大鼠的一般生理状况

造模期间，除正常对照组外，其他各组大鼠体重增长缓慢，同时出现多饮、多尿、毛发干枯、精神萎靡等现象。造模期间各组大鼠平均体重测定结果见表1。

由表1可以看出，在造模前，各组的大鼠体重均无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。造模的第16天，各模型组与正常对照组比较均有显著性差异（P＜0.05）；第24天，各模型组与正常对照组均有极显著性（P＜0.01）。

表1　造模期间各组大鼠平均体重

2.1.2　大鼠的饮食和饮水情况

造模期大鼠的平均饮食量和饮水量分别见图1和图2。

图1　各组大鼠饮食情况

图2　各组大鼠饮水情况

由图1和图2可以看出，造模前，各组大鼠的饮食量和饮水量无显著差异（P＞0.05），具有可比性。在造模过程中，正常对照组大鼠的饮食和饮水情况无明显变化，各模型组大鼠的饮食量呈显著下降趋势，饮水量呈显著上升趋势。造模结束后，各模型组大鼠的饮食量和饮水量与正常对照组比较有极显著性差 （P＜0.01）。

2.1.3　大鼠的24 h排尿液量

慢性肾功能衰竭大鼠模型制备前，各组大鼠24h排尿量无显著差异（P＞0.05），具有可比性，具体情况见图3。

图3　各组大鼠24 h尿量

在整个造模过程中，正常对照组大鼠24 h排尿量无显著变化（P＞0.05），造模结束后各模型组大鼠的24 h排尿量与正常对照组比较具有极显著差异（P＜0.01），与造模前模型组大鼠的24 h排尿量比较具有极显著性差异（P＜0.01）。

2.1.4　血清Scr和BUN

造模前后，分别测定各组大鼠的血清Scr和BUN并进行对比，以检测造模成功与否，测定结果见表2。

如表2所示，经过24天的灌胃后，各模型组大鼠与正常对照组相比较，血清Scr、BUN含量都有极显著性差异（P＜0.01），且与造模前各模型组的血清Scr、BUN含量比较有极显著性差异（P＜0.01），说明本试验造模成功。

2.1.6小结

根据CRF的西医临床诊断及肾功能分期标准，参照中华内科杂志编委会病专业组1993年拟定标准及第六版《内科学》制定，按肾功能损害的程度，一般可分为4期，其中第二期(氮质血症偿期)：血清肌酐 178 μmol/L～450 μmol/L，可有轻度贫血、多尿和夜尿。

表2　各组大鼠血清Scr、BUN含量

经过24天的造模，可以看出各模型组大鼠的体重、饮食、饮水、尿液、血液指标均与正常对照组存在极显著性差异，在一定程度上说明本试验造模成功。从大鼠的各项生理生化指标的情况可以看出，本试验所诱导的模型为氮质血症偿期的CRF模型。

2.2　治疗期大鼠的各项指标

2.2.1　大鼠一般生理状况

正常对照组：生长情况、饮食情况及二便情况均正常，反应灵敏，毛色有光泽，耳廓和口唇眼鼻粘膜红润。

病理模型组：在饲养过程中出现体毛干枯发黄不齐，易脱落，拱背，蜷缩，精神萎靡，活动减少等现象。

尿毒清药物对照组：在治疗过程中体毛逐渐变得有光泽，且体毛脱离状况明显缓解，活动量增多，脚部浮肿现象消失，尾部体温恢复。

酸奶+药物组：外部表现和症状与尿毒清药物对照组相似。

2.2.2　大鼠的体重

治疗过程中，各组大鼠的体重均呈增长状态，病理模型组大鼠的体重增长情况较其他各组缓慢。治疗过程中各组大鼠平均体重如表3所示。

由表3可以看出，治疗前，各治疗组与正常对照组比较有极显著性差异（P＜0.01），而各治疗组之间无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。

经过28天的治疗后，酸奶+药物组与正常对照组比较无显著性差异（P＞0.05），与病理模型组比较具有极显著性差异（P＜0.01）；与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

由上述分析结果可以看出，经过28天的治疗后酸奶+药物组大鼠的体重与正常组比较已无显著性差异，在一定程度上说明酸奶配合药物进行治疗对CRF缓解效果比较明显。

2.2.3　大鼠的饮食和饮水情况

治疗前，各治疗组大鼠的饮食量和饮水量与正常对照组具有极显著性差异（P＜0.01），各治疗组之间无显著差异（P＞0.05），具有可比性。治疗前后各组大鼠的饮食和饮水变化情况见图4、图5。

图4　不同阶段大鼠日进食量的差别

图5　不同阶段大鼠日饮水量的差别

结合图4和图5可以看出，病理模型组大鼠饮食和饮水情况说明，虽然大鼠自身具有一定的自愈能力，但在整个试验期间，大鼠的饮食和饮水情况无显著变化，说明了本次CRF的造模是成功的。

经过28天的治疗后，酸奶配合药物治疗组的饮食量和饮水量与病理模型组比较具有显著性差异（P＜0.05），与尿毒清药物对照组比较具无显著性差异（P＞0.05），与正常对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

2.2.4　大鼠24 h排尿量

治疗前，各治疗组大鼠与正常对照组具有极显著差异（P＜0.01），各治疗组之间大鼠24 h排尿量无显著差异（P＞0.05），具有可比性，具体情况见图6。

表3　治疗过程中各组大鼠平均体重

图6　不同阶段大鼠24 h排尿量的差别

经过28天的治疗后，酸奶配合药物治疗组与正常对照组比较无显著性差异（P＞0.05），与病理模型组比较有极显著性差异（P＜0.05），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

临床研究表明，如果肾浓缩功能损害，每天尿量对溶质荷的适应性就会受限。尿液的浓缩达不到标准时，则排尿量增加。从本研究的试验数据可以看出，酸奶配合药物治疗对于CRF大鼠的缓解作用优于单独使用药物治疗。

2.2.5　大鼠的尿蛋白含量

治疗前后，分别对各组大鼠的尿液进行了尿蛋白的定量检测，检测结果见图7。

图7　各组大鼠的尿蛋白含量

由图7可以看出，治疗前各治疗组大鼠的尿蛋白含量与正常对照组比较均有极显著的增高趋势，且各治疗组之间的尿蛋白含量无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。

经过28天治疗后，酸奶+药物组的尿蛋白含量与尿毒清药物对照组比较均具有显著性差异（P＜0.05），与病理模型组比较具有极显著性差异（P＜0.01），与正常对照组比较具有显著性差异（P＜0.05）。

国外的动物试验表明，蛋白尿的程度和肾衰发展速率密切相关。美国一组临床的前瞻性研究中也证实，蛋白尿的严重性对慢性肾衰的发生发展有预示价值。以上数据在一定程度上说明了酸奶配合药物治疗对于CRF大鼠的缓解作用优于单独使用药物治疗。

2.2.6　大鼠氮代谢产物情况

肾功能衰竭时，其排泄调节功能和内分泌代谢功能均受损害。血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN），是检测肾功能不全程度的重要标准，也是检测排泄调节功能损害的指标。

2.2.6.1　大鼠血清Scr含量

治疗前，除正常对照组外，各组大鼠的血清Scr含量与病理模型组无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。各组大鼠的血清Scr含量结果见图8。

图8　各组大鼠的血清肌酐含量

由图8可知，经过28天的治疗后，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05），与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

2.2.6.2　大鼠血清BUN含量

治疗前，除正常对照组外，各组大鼠的血清BUN含量与病理模型组无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。各组大鼠的血清BUN含量测定结果见图9。

图9　各组大鼠的血清尿素氮含量

见图9可知，经过28天的治疗后，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05），与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）两者分别为含氮有机物和蛋白质代谢的中末产物，因此血中肌酐、尿素氮在一定程度上可以反映肾小球滤过功能的损害程度，是反映慢性肾衰竭的进展重要标志之一。从上述数据可以看出，酸奶配合药物治疗对于CRF大鼠Scr、BUN水平调节优于单独使用药物治疗。

2.2.7　血清Ca和P

钙、磷代谢与肾脏有密切关系，钙、磷代谢紊乱是CRF常见的并发症。肾功能减退时，肾小球的滤过率降低，磷排泄减少，从而引起高磷血症和低钙血症。各组大鼠治疗前后血清中Ca和P的含量变化情况分别见图10和图11。

图10　各大鼠的血清Ca含量

由图10和图11可知，治疗前，各治疗组血清Ca、P含量与正常对照组具有极显著差异（P＜0.01），各治疗组之间无显著差异（P＞0.05），具有可比性。

治疗后，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05），与正常对照组比较有显著性差异 （P＜0.05）。

图11　各大鼠的血清P含量

慢性肾衰竭患者身体中往往钙磷比例失调，而驼乳中钙磷比例合适，对纠正这种失调有很大作用。本试验中病理模型组血钙较正常对照组显著降低，血磷较正常组显著升高。从试验数据中可以看出，酸奶配合药物治疗对于改善CRF引起的钙磷代谢紊乱的效果较好。

2.2.8　大鼠的SOD、TP、NO

各组大鼠的SOD、TP、NO测定结果见表4。

表4　各组大鼠SOD、TP、NO的情况

研究表明，慢性肾功能衰竭可以引起低蛋白血症，并可能抑制蛋白的合成。检测血液指标发现，经过28天的治疗后，血清TP的检测结果显示，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05），与正常对照组比较有显著性差异 （P＜0.05）。

NO可以通过对肾脏血流动力学和交感神经活性的作用，参与肾脏血流动力学、交感神经活性的调节以及肾素释放的调节。但过低或过高的NO不仅对肾脏起不到保护作用，反而对肾脏具有破坏作用。本试验研究结果表明，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组比较有显著性差异（P＜0.05），与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

临床研究发现，慢性肾功能衰竭时SOD活性显著降低并与BUN、Scr呈明显的负相关。CRF时机体抗氧化能力降低，氧自由基清除系统代谢失常或衰竭，自由基得不到清除，从而使SOD活性降低。血液生化检测结果显示，酸奶+药物组与病理模型组比较具有极显著差异（P＜0.01），与尿毒清药物对照组和正常对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

以上数据说明酸奶配合药物治疗对CRF大鼠血清TP、SOD、NO水平的调节优于单独使用药物治疗。

3　结论

通过动物试验发现，酸奶配合药物治疗可缓解肾衰大鼠的一般情况，减缓蛋白尿。

酸奶配合药物治疗可降低大鼠血肌酐、尿素氮水平，保护肾功能。

酸奶配合药物治疗可调节电解质。

酸奶配合药物治疗可调节大鼠血清TP、NO水平，提高SOD水平，加强对体内自由基的清除作用。

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