河北省部分猪场送检样品的猪蓝耳病抗体水平分析

王丽娟，罗尚星，崔荣飞，左玉柱

（1. 河北农业大学动物医学院，河北保定　071001；2. 河北省动物卫生监督所，河北石家庄　050081；3. 石家庄市畜产品质量监测中心，河北石家庄　050000）

猪蓝耳病（PRRS）是由套式病毒目的猪蓝耳病毒（PRRSV）引起的猪繁殖障碍、高热，出现呼吸道症状的一种传染病。本病于20世纪80年代末首先在美国被发现[1]，后迅速蔓延至其他国家，20世纪90年代传入我国。本病具有高致死性，不仅会使仔猪成活率降低，还会导致育肥猪生长停滞[2]，对养猪业危害较大。目前PRRSV两个基因型：一个是欧洲型，通常引起经典型PRRS；另一个是美洲型，引起变异型PRRS，危害往往更严重，会引发猪的急性死亡[3]。由于PRRSV基因组有10个开放阅读框，且ORF1、ORF3、ORF5极易变异[4]，使得PRRS防治变得非常困难。

目前疫苗免疫仍是PRRS防控的重要措施之一，因此对猪群PRRS抗体水平的检测十分重要。它既可以评价免疫效果，也可以了解猪群健康状况，以便猪场及时调整免疫程序，从而减少经济损失。

本研究通过对河北省内不同规模猪场送检的血样进行PRRS抗体检测，对检测数据进行汇总分析，寻求PRRS的流行规律，为PRRS防控提供一些数据支持。

1　材料与方法

1.1　临床样品

2016—2017年来自河北省保定、石家庄、沧州、张家口、邯郸、衡水、邢台等7个地区送检的，对种群分类较为明确的猪场血样共计1 182份，其中散养户11家196份，中型猪场5家380份，大型猪场2家606份（表1）。每只猪采血2～3 mL，室温静置至血清析出，分离血清，置于4 ℃保存。

表1　不同规模猪场基本情况

1.2　主要试剂

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒（美国IDEXX）：购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；Multiskan FC型酶标仪：购自Thermo公司。

1.3　试验方法

试验前将抗体试剂盒与血样室温孵育1 h，用血清稀释板将血样进行40倍稀释（5 μL血清+195 μL样品稀释液）；将稀释好的样品转至抗原包被板中，每孔100 μL，分别加入2孔阴性对照与2孔阳性对照，每孔100 μL，阴阳性对照不稀释；室温下孵育30 min，弃去孔中液体，用配好的洗液洗涤板孔（洗液用蒸馏水10倍稀释），每孔250 μL，洗涤3～4次，最后一遍用力拍干；每孔加入100 μL酶标抗体，室温下孵育30 min，弃去孔中液体后洗涤，重复操作；每孔加入100 μL TMB底物液，在室温下孵育15 min，最后加入终止液，每孔100 μL，于酶标仪中650 nm条件下测量吸光值。

1.4　结果判定与计算

当阴性对照平均值＜0.15，阳性对照平均值-阴性对照平均值＞0.15时，试验结果有效。本试验通过S/P对结果进行判定。S/P=（样品OD值-阴性对照平均值）/（阳性对照平均值-阴性对照平均值）。当S/P＜0.4时，判定为阴性；当S/P＞0.4时，判定为阳性；当S/P＞2.5时，如果样品数据离散度较高，则可能存在感染并发病，如果度较低，则可能存在感染但处于稳定期。

离散度计算公式：

离散度=D（样品方差）/样品平均值

2　结果与分析

2.1　不同规模猪场

对送检血样按规模猪场分类后，进行检测结果分析。结果显示，大型场阳性率最高，散户阳性率最低（表2）。这可能与大型猪场有较为系统或者固定的免疫程序有关。

表2　不同规模猪场检测结果统计

2.2　不同生产猪群

2.2.1散户 对11家散户的不同种群进行分析发现，不同生产猪群阳性率均在80%左右，但21～60日龄仔猪与公猪的阳性率偏低；散户不同猪群的离散度大部分低于60%，但21～60日龄仔猪、哺乳母猪、公猪的离散度高于60%（图1）。

图1　散户不同种群PRRS抗体水平分析

2.2.2中型场 对5家中型场不同猪群检测数据分析发现，不同猪群阳性率基本在80%以上，离散度在60%以下，其中100～150日龄育肥猪与空怀母猪的阳性率高于其他阶段猪群，21～60日龄仔猪、公猪的阳性率偏低（图2）。

图2　中型场不同种群PRRS抗体水平分析

2.2.3大型场 对2家大型场的不同种群的检测结果分析发现，不同种群的抗体阳性率基本在90%以上，但21～60日龄仔猪相对偏低，离散度大部分在40%左右，仅哺乳母猪与空怀母猪离散度稍高（图3）。

图3　大型场不同种群PRRS抗体水平分析

2.3　不同地区

对来自保定、石家庄、沧州等7个地区送检的血样，按照地区进行分类统计发现，各地区的抗体阳性率在80%左右，地域差异不大，其中大于2.5抗体值的猪场基本在15%左右，说明PRRS在河北省普遍存在（表3）。

表3　不同地区PRRS抗体检测结果分析

3　讨论

PRRS是猪场危害较重的传染病之一，多发于夏秋季节[8]。由于其具有传播途径广、病死率高、致病力强、仔猪与育肥猪极其易感的特点[9-10]，使得PRRS的预防与控制一直是我国养猪业以及动物疫病研究的热点。在美洲型PRRSV流行以前，该病通过免疫接种就可取得较好的防控效果，但在2008年以后，由于PRRSV变异株的流行，使得该病防控出现了病毒不断变异；毒力持续增强[11]的新问题，使得原本较为稳定的猪场大规模发病。鉴于以上问题的出现，对猪群免疫情况、猪群健康情况、猪群感染情况的监测显得尤为重要。对猪群做好抗体水平检测已经成为现阶段猪场科学养殖的重要手段。

本研究对2016—2017年河北省送检的1 182份血样进行了PRRS抗体检测。对检测结果进行统计分析发现：大型场阳性率（93%）高于中型场（87%）和散户（80%），抗体整齐度也较好。其原因可能与大型场免疫程序较为规范，饲养水平较为科学有关。21～60日龄断奶仔猪抗体阳性率偏低，说明此阶段猪群易感染PRRSV，此外母猪的抗体整齐度也较差，需要加强对这些猪群的监管和免疫。7个地区的抗体阳性率基本在80%左右，地域差异不大，说明送检样品猪场的PRRS免疫情况相似。因此，在PRRS防控中，应对抗体水平进行定期检测，根据整个猪群的健康状况、免疫情况及感染情况，合理制定疫苗免疫程序。这样才能降低PRRS发病率，减少经济损失。

此外由于目前的抗体检测并不能区分野毒抗体和疫苗抗体，需要根据样本数据的离散度和阳性率并结合猪场实际情况进行推测，所以分析结果具有一定的主观性，只能作为参考。

4　结论

本研究对2016—2017年河北省保定、石家庄、沧州等7个地区送检的1 182份血样进行了PRRS抗体检测，发现整体免疫效果较好，平均阳性率均在80%以上，尤其是大型规模化猪场，免疫效果更好。地区差异不大，各地阳性率在75%～92%之间。散养和断奶仔猪群的阳性率相对偏低，是发生PRRS的威险猪群，应对其加强防控；母猪与育肥猪的整齐度较差，可能与其本身易感染PRRSV有关。PRRS的免疫程序需要根据抗体检测情况进行合理制定，只有这样，才能取得好的免疫效果。

参考文献：

[1] 张青娴，王克领，张立宪，等. 高致病性蓝耳病的研究进展[J]. 中国畜牧兽医，2008，35（9）：105-107.

[2] EMANUELA P，ENRIC M，王学强. 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）传播的研究进展及其对免疫程序的影响[J]. 中国猪业，2017（4）.

[3] 陈泽芳，赵爱莉. 猪蓝耳病的研究进展[J]. 畜禽业，2017，28（3）：1-3.

[4] 杨晓花，张其艳，艾军，等. 高致病性蓝耳病的研究进展[J]. 今日畜牧兽医，2010（7）：24-26.

[5] 黄哲新. 一例规模猪场蓝耳病抗体监测分析[J]. 南方农业，2016，10（15）：168-169.

[6] 于桂芳，王国良，温富勇. 高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测分析报告[J]. 当代畜牧，2011（4）：14-15.

[7] 权玉先，张洪智. 猪蓝耳病的综合防控措施[J]. 中国畜牧兽医文摘，2017，33（4）：134-134.

[8] 吾际舟. 高致病性猪蓝耳病的研究进展[J]. 中国猪业，2007（8）：4-6.

[9] 李建玲，杨小亮. 高致病性猪蓝耳病的研究进展[J].中国兽医杂志，2014，50（6）：61-63.

[10] 吴增坚. 高致病性猪蓝耳病[J]. 北方牧业，2007（15）：7.

[11] 刘金彪. 猪蓝耳病的综合防控[J]. 中国动物检疫，2008，25（1）：33-34.