张 河,张 竹,张嘉胜
(江苏华为医药物流有限公司,江苏 泰州 225300)
果蝇细胞在代谢途径、生理功能、发育、衰老等方面与哺乳动物基本相似。摩尔根[1]等从研究黑腹果蝇中发现了“伴性遗传”、“连锁与互换”等现象和规律,从而发展了染色体遗传学说的。果蝇又具有高度纯种性,繁殖快,管理方便,生存期短,所以果蝇生存试验是国内外常用的检验药物延寿效应的可靠方法。
枸杞子含有胡萝卜素,硫胺素、核黄素、盐酸、抗坏血酸等多种有益人体的维生素。研究证明,枸杞具有抑制脂肪在纤维内蓄积、促进肝细胞的新生、降低血糖、降低胆固醇等作用。赵琦等[2]研究表明枸杞子具有一定的延缓衰老作用。陶大勇等[3]用半乳糖对小鼠制造衰老模型,发现灌胃黑果枸杞色素小鼠的血清和各器官组织中SOD活性皆高于衰老模型组,MDA含量显著低于衰老模型组。陶少武等[4]发现:含有枸杞子的培养基对果蝇性活力无有效作用,但能有效延长果蝇寿命。
铅是一种积累性毒物。人类通过食物链摄取铅,也能从被污染的空气中摄取铅。过量接触、吸入铅化合物或含铅中药,如樟丹、黑锡丹、羊癫疯丸等,以及使用含铅化妆品等也可引起中毒。孟金萍等[5]指出:铅对生物体具有多方面的毒性,可导致智力低下、造血机能障碍、高血压、肾病等并介绍了铅对各个系统如神经系统、心血管系统、泌尿系统、生殖系统以及个体发育的毒性效应。
本文基于果蝇试验系统,为科学地了解枸杞的药物作用提供参考。
野生型红眼黑腹长翅果蝇由南京晓庄学院生命科学系遗传实验室提供。收集8 d内羽化未交配的成虫,雌雄分开,用普通培养基在温度为(25±1)℃,相对湿度在50%~70%的环境中培养备用。
果蝇培养基:蔗糖、琼脂、蒸馏水、玉米粉、酵母粉、丙酸。中草药:枸杞购自当地中药房。试剂:乙酸铅(pb(CH3COO)2·3H2O)分析纯、丙酸。实验仪器:恒温生化培养箱(25±1)℃;相对湿度50%~70%;平底培养瓶。
1.2.1 实验分组
果蝇随机分成四组,分别为:枸杞、枸杞+铅、铅、对照组。
1.2.2 制中药煎剂
煎药用具:沙罐。(1)先用冷水浸泡一小时左右,水高过药面;(2)煮沸后火减小煎15 min;(3)头煎药汁倒下;(4)药渣再加冷水煎15 min(文火)[6]。
1.2.3 果蝇培养基的配制。普通玉米粉培养基的配方[6]如下。A:糖6.2,琼脂0.62 g,水38 ml煮沸溶解;B:玉米粉8.25 g,水38 ml,酵母粉0.7 g。A和B混合加热后成糊粉状,加0.5 ml丙酸,按比例配制,分装到不同的培养基中。本实验中用中草药煎剂代替以上配方中的水。
1.2.4 果蝇寿命的测定
收集8 h内羽化的果蝇成虫,乙醚麻醉后雌雄分管培养,对照组用基础培养基,实验组为用不同中草药煎剂及铅配制的培养基,每组雌雄各75只,每管可放25只,于温度25℃,湿度65%培养箱内培养。每组全部果蝇死亡天数的算术平均数为该组的平均寿命,每组最后死亡的5只果蝇存活天数的平均数为该组的最高寿命。
1.2.5 果蝇生殖力的测定
收集8 h内羽化的果蝇成虫,乙醚麻醉后雌雄分管培养,对照组用基础培养基,实验组为用中草药煎剂及铅配制的培养基,每组雌雄各20只,共分四管,每管放入5对果蝇,观察产生的F1代个数。
采用单因素方差分析[7]。
表1 不同处理对雌性果蝇寿命的影响
表2 不同处理对雄性果蝇寿命的影响
表3 不同处理对果蝇生殖力的影响
对照组雌果蝇的平均寿命为57.7±1.2天;铅组雌果蝇的平均寿命最低,为50.4±3.9天;说明铅的存在会显著降低雌果蝇的平均寿命。枸杞+铅组雌果蝇的平均寿命为52.2±3.9天;表明枸杞可小幅度缓解铅对雌果蝇的平均寿命的影响。枸杞组雌果蝇的平均寿命为61.0±3.0天,为各组最高,表明枸杞可延长雌果蝇的平均寿命、最高寿命。
对照组雄果蝇的平均寿命为63.4±6.2天;铅组雄果蝇的平均寿命最低,为52.1±5.5天;说明铅的存在会显著降低雄果蝇的平均寿命。枸杞+铅组雄果蝇的平均寿命为53.7±1.9天;表明枸杞可小幅度缓解铅对雄果蝇的平均寿命的影响。枸杞组雄果蝇的平均寿命为63.9±2.1天,为各组最高,表明枸杞可延长雄果蝇的平均寿命、最高寿命。
对照组F1代果蝇数目为326.3±51.9;铅组F1代果蝇数目最低,为55.7±11.7只;说明铅的存在会显著降低F1代果蝇数。枸杞+铅组果蝇的F1代果蝇数目为77.9±3.4只;表明枸杞可小幅度缓解铅对果蝇的生殖力的影响。枸杞组果蝇的F1代果蝇数目为382.0±26.7只,为各组最高,表明枸杞可显著促进果蝇生殖力。铅组的生殖高峰明显推迟,出现于第3次统计;其它的组生殖高峰都出现于第2次统计。
综上所述,铅会显著降低果蝇的平均寿命、生殖力;枸杞会显著延长果蝇的平均寿命、生殖力;枸杞可缓解铅对生物体的毒性影响。
[1] 刘祖洞,江绍慧.遗传学实验[M].北京:高等教育出版社,1987.
[2] 赵 琦.枸杞子对果蝇生存期的影响[J].陕西中医,2005, 26(11):123.
[3] 陶大勇,陈佳娟,陈 瑛,白红进.黑果枸杞色素对小鼠抗衰老作用的研究[J].中兽医医药杂志,2008,(1):11-13.
[4] 陶少武.枸杞子对果蝇性活力及寿命影响的实验研究[J].江西中医学院学报,2005,17(4):46-47.
[5] 孟金萍,孙淑华,王艳蓉,等.铅的生物学毒性效应[J].中国比较医学杂志,2007,17(1):58-61.
[6] 王俊林,宋高臣.黄芪对果蝇寿命影响的实验研究[J].中医药学报,2005,33(4):34~35.
[7] 杜荣骞.生物统计学[M].北京:高等教育出版社,1985.