刘朝红 邹颜矫 陈琳 袁成良(通讯作者)
(四川省德阳市人民医院 四川 德阳 618000)
脑脊液常规检验是基础检验学的常规检测项目,对于诊断和鉴别神经系统感染性、出血性疾病以及明确恶性肿瘤的诊断等具有重要临床意义[1]。胸腹水白细胞计数和分类对于临床医师鉴别诊断漏出液及渗出液、化脓性炎症积液、结核性积液、病毒感染、系统性红斑狼疮的多发性浆膜炎等具有重要意义[2]。目前胸腹水、脑脊液标本因其特殊性,细胞学检查的自动化程度还很低[3]。传统有核细胞计数法是用改良牛鲍氏计数板耗时费力且不精密度较大、受人为主观因素影响较多[4]。近年来,随着医疗仪器的发展,血液细胞分析仪和尿沉渣分析仪也具备了进行体液细胞检测的功能,这为浆膜腔积液、脑脊液有核细胞计数创造了有利条件[5]。本文就通过对本院的XN-1000全自动血细胞分析仪、UF-1000i尿沉渣分析仪与人工计数的有核细胞计数及分类做对比性分析研究,评价其在胸腹水、脑脊液有核细胞计数和分类检测中的优缺点及可行性。
1.1.1一般资料 连续收集本院2016年门诊和住院患者送检标本478例,其中腹水212例,胸水160例,脑脊液106。采集标本均以 EDTA.K2抗凝剂抗凝,所有标本采集后均严格按照《全国临床检验操作规程》(第四版)脑脊液、胸腹水留取操作指南[6]要求立即送检,1 h内完成仪器法和镜检法细胞计数与分类。
1.1.2仪器与试剂 Sysmex XN-1000全自动血液分析仪及原装配套试剂、质控品(日本sysmex公司);Sysmex UF-1000i全自动尿沉渣分析仪及原装配套试剂、质控品(日本sysmex公司);BX43显微镜(日本Olympus公司);标准Neubauer细胞计数板。及1%的冰醋酸。
据白细胞浓度将478份标本分成高、中、低3个浓度组,低浓度细胞水平为(1~100)×106/L;中浓度细胞水平为(101~500)×106/L;高浓度细胞水平为大于501×106/L。改良牛鲍计数板计数法(手工法)和Sysmex XN-1000全自动血液分析仪法和Sysmex UF-1000i全自动尿沉渣分析仪法(仪器法)都要在采集标本后1h内完成检测,每份标本检测2次,结果取平均值。
1.2.1人工显微镜法 标本充分混匀后,同时加100μL标本和1%的冰醋酸200μL于洁净试管中,充分混匀,静置15分钟后冲池,由2名资深技师采用双盲法,严格按照《全国临床检验操作规程》中的体液细胞计数指南用光学显微镜进行计数,每份标本检测结果取两次的平均值,白细胞数过多者需以生理盐水稀释后检测。对于脑脊液有核细胞计数结果大于15×106/L以及胸腹水有核细胞计数结果大于50×106/L的标本,应用离心沉淀法收集有核细胞做瑞氏染色并进行细胞分类。
1.2.2 XN-1000分析仪检测 标本检测前要做仪器校准实验和室内质控,符合要求后才能进行标本有核细胞计数。标本充分混匀后在XN-1000血液分析仪的体液模式下进行检测。
1.2.3 UF1000i分析仪检测 分析前须检查仪器性能并进行室内质控,符合要求后才能进行标本有核细胞计数。取标本混匀后,按照UF 1000i尿沉渣分析仪操作说明,在手动模式下进行检测。
应用SPSS 18.0统计软件对所有数据进行统计分析,计量资料以±s表示,对上述三种方法所得数据进行配对t检验和线性相关回归分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 如表1结果显示,各相关系数均大于0.8。均具有较好的相关性。同时可以看出,XN-1000血细胞分析仪的相关系数r比UF-1000i尿沉渣分析仪的相关系数r更高,相关性更好。
表1 手工法和仪器法计数胸腹水白细胞的线性相关回归分析研究结果
2.2 Sysmex XN-1000血细胞分析仪与手工法细胞分类结果相比,三组标本有核细胞多个核百分比结果两两比较差异无统计学意义(P值均大于0.05)。见表2。
表2 手工法和XN-1000仪器有核细胞百分比结果比较
综上所述,使用UF-1000i尿沉渣分析仪和XN-1000全自动血液分析仪检测脑脊液和胸腹水中有核细胞数均具有可行性;而XN-1000的相关性优于UF-1000i,且XN-1000尚可用于用于有核细胞分类,所以XN-1000的临床应用价值更大!
脑脊液正常状态下各成分的含量相对稳定,当中枢神经系统发生器质性病变时,由于脉络丛上皮细胞通透性发生改变,可使脑脊液成分发生变化。所以通过脑脊液常规成分分析在中枢神经系统疾病的诊断和鉴别诊断中意义显著。胸腹水则是在浆膜出现各种病理情况下,胸腔或腹腔内液体异常增多积液。根据胸腹水成分及含量的不同可将积液分为渗出液和漏出液。明确积液的性质有利于疾病的诊断和治疗。传统的人工显微镜计数方法,操作复杂、费时、准确性和重复性低、不精密度较大、影响因素较多。不利于疾病的诊断和疗效观察。
UF-1000i尿液分析仪是目前比较先进的一款自动化尿液分析仪,它使用半导体激光流式细胞计数法和核酸荧光染色技术,从而对各个粒子进行识别,能够测量出其白细胞、红细胞和上皮细胞及细菌霉菌等[7],研究显示其有核细胞计数结果与镜检法具有较好的相关性。但是。UF-1000i尿液分析仪不能进行细胞分类,如要分类时还需手工检测。并且,应随时对仪器进行必要的改进优化[8],以得出可靠的结果。
随着新一代全自动血液分析仪的问世之后,光学法细胞检测技术为胸腹水等低细胞数标本的准确计数分群另辟了一条崭新的途径,并渐显其在该领域的应用价值和广阔前景。目前,Sysmex XN-1000全自动血液分析仪采用半导体激光原理结合流式细胞和核酸荧光染色技术可实现对白细胞的计数和分类,而且另外设有专门体液标本检测通道,可实现对胸腹水的检测与分类[9]。研究可见,其细胞计数与手工法相关性非常好,分类结果也与手工法无明显差异。
综上所述,使用UF-1000i和XN-1000检测脑脊液和胸腹水中红、白细胞数均具有可行性。且自动化程度高、干扰因素少、准确性高,可以替代传统的手工计数板法[10]。而XN-1000不仅准确度更高,相关性更好,还可用于有核细胞分类。所以临床应用价值更大,更值得推广!但是改良牛鲍计数板计数法是传统胸腹水白细胞计数方法的金标准,而且仪器的计数与分类仍存在着一定的局限性,所以在仪器有异常报警时还需显微镜进行复检,两者有效结合可以有效提高检验效率及结果的准确性,更好地为患者服务。
[1]齐杰,陈倩云,韩江,等.浆膜腔积液常规检查采用染色分类法进行细胞分类的临床重要性[J].北京医学,2012,34:(1):3840.
[2]刘成玉,罗春丽.临床检验基础[M].5版.北京:人民卫生出版社,2012.
[3]陈松立,丁磊,叶廷军,等.血液分析仪XT-4000i筛检浆膜腔恶性积液的应用[J].诊断学理论与实践,2012,11(4):391.
[4]马建党.UF-100全自动尿沉渣分析仪在胸腹水细胞检测中的意义[J].中国医疗前沿,2009,4(7):76.
[5]庞博。刘贵建.血液细胞分析技术的临床应用与研究进展[J].首都医科大学学报,2013,34(4):550-553.
[6]尚红,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社,2015:178;185.
[7]吴华军,王宇军,陈灵芝.UF-1000尿沉渣流式细胞仪在尿红细胞分析中的应用[J].浙江医学,2009,31(12):1758.
[8]K1eine TO,Nebe CT,L6wer C,et a1.Evaluation of cell counting and Ieukocvte differentiation in cerebrospinal fluid controls using hemat0109y analyzers by the German Society for Clinical Chemis— try and Laboratory Medicine[J].clin Chem Lab Med,2010,48 (6):839-848.
[9]de Jonge R,Brouwer R,de Graaf MT,et a1.Evaluation of the new body fluid mode on the Sysmex XE-5000 for counting leukocytes and erythrocytes in cerebrospinal fluid and other body fluids[J]. Clin Chem Lab Med,2010,48(5):665-675.
[10]陈朴,张立营,等.全自动血细胞分析仪在胸腹水细胞计数中的应用[J].国际检验医学杂志,2016,37(10):1400-1401.