注射用血栓通对2型糖尿病GK大鼠视网膜病理结构的影响*

李芮琳，孙作艳，王金鑫，王富江，贾壮壮，王少峡，胡利民

（天津中医药大学中医药研究院，天津市中药药理学重点实验室，方剂学教育部重点实验室，天津 300193）

随着中国经济水平的不断发展，国民生活质量的提高，糖尿病的发病率也有逐年提高的趋势，目前已经成为慢性非传染性疾病中继心脑血管疾病、肿瘤、呼吸道疾病之后的第4位致死性疾病。糖尿病是一种内分泌性疾病，主要是由于胰岛素分泌不足或胰岛素作用缺陷引起以血糖升高为特征的代谢性内分泌病，整个病程过程中伴随着多种急慢性的并发症，临床中最常见的有心脑血管、肾、眼及神经病变等[1-2]。糖尿病视网膜病变是糖尿病的主要并发症之一，是糖尿病最常见最严重的微血管并发症。其病理机制广泛被认为是增殖的微血管易破裂而致视网膜和玻璃体出血、视网膜脱离等从而导致失明[3]。糖尿病视网膜病变以预防为主，临床治疗中主要以改善视网膜微循环为主[4]。

三七为五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk．）F．H.Chen]的干燥根和根茎，主要产于云南、广西、四川等地，是中医施治中的常用药。《本草纲目》记载其功效为：止血，散血，定痛。现代研究表明，皂苷类是三七的主要生物活性成分，总含量高达12%，其主要成分有有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Ra、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh 等。现代化学和药理学研究发现，三七总皂苷具有钙通道阻断作用、抗自由基损害作用和增加器官血流量、扩张血管、降低动脉血压、降低心肌耗氧量、改善微循环、抑制血小板聚集、降低血黏度、降血脂作用。且三七总皂苷和部分单体皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎等方面均有较好活性，因而被广泛用于治疗缺血性心、脑血管疾病。

注射用血栓通（冻干）为采用三七主根为原料制成的注射用粉针剂，其主要成份包括多种单体皂苷成份：人参皂苷Rg1（40%）、人参皂苷Rb1（30%）、人参皂苷 Rd（10%）、人参皂苷 Re（5%）、三七皂苷R1（5%）[1-2]。注射用血栓通具有活血祛瘀，通脉活络，扩张血管，改善血液循环的功能，主要用于瘀血阻络，中风偏瘫、胸痹心痛、脑血管病后遗症、视网膜中央静脉阻塞、内眼病、眼前房出血等，临床应用广泛。但其对糖尿病视网膜病变的作用机制研究鲜见报道。因此本课题组对注射用血栓通防治糖尿病视网膜病变的作用进行了初步探索，为临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物与分组 SPF级别Goto-Kakizaki（GK）大鼠购自维通利华；8周龄GK大鼠共分为3组：GK模型组5只，腹腔注射生理盐水；血栓通50 mg组（XST-50组）5只，腹腔注射血栓通，50 mg/（kg·d）；血栓通100 mg组（XST-100组）5只，腹腔注射血栓通，100mg/（kg·d）。另设Wistar对照组6只，腹腔注射生理盐水。

1.1.2 主要试剂与设备 注射用血栓通（冻干）（批号：Z200025652，广西梧州制药集团股份有限公司）；苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（北京索莱宝）；0.9%氯化钠注射液（批号：140916YT，安徽双鹤药业有限责任公司）；20×PBS（批号：20161216，北京索莱宝生物科技有限公司）；全自动封闭脱水机（型号：ASP300S，德国LEICA公司）；生物组织包埋机（型号：BMJ-1，天津航空机电公司）；病理切片机（型号：RM2135，德国LEICA公司）

1.2 实验方法

1.2.1 血糖检测 一次性采血针扎破尾尖取血，用强生稳豪型血糖仪配合稳豪型试纸检测血糖浓度，检测后干棉球压迫止血，并清理伤口。

1.2.2 视网膜病理结构检测 血栓通治疗60 d后，取材，对部分大鼠进行心脏灌流、眼球固定、脱水、石蜡包埋、切片。选取视网膜完整的切片进行HE染色。普通光学显微镜下观察视网膜各亚层的细胞形态、排列及各亚层厚度，拍照，采用ImageJ软件进行厚度测量。

1.2.3 统计学分析 用SPSS 19.0进行数据处理，所有数据用均数±标准差（x±s）表示，多组数据间比较采用单因素方差分析，组间两两比较，若方差齐用LSD检验，方差不齐用Dunnett’s T3检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血栓通对GK大鼠体质量和血糖的影响 表1显示，GK模型组大鼠的体质量在实验前后都明显低于对照组（P＜0.01）；各治疗组与模型病组相比无统计学差异。GK模型组大鼠血糖在实验前后都明显高于对照组（P＜0.01）；经治疗后，与模型组相比，血栓通组有血糖降低的趋势，但没有统计学差异（P＞0.05）。表明尚不能认为血栓通对模型组大鼠的体质量和血糖造成影响。见表1。

图1 视网膜切片的HE染色Fig.1 HE staining of retinal slices

2.2 血栓通对GK大鼠视网膜病理结构的影响 视网膜完整切片的HE染色如图1所示。采用Image J测量视网膜整体及各亚层（感光层、内核层、外核层、内网层、外网层）的厚度，如表2所示，与对照组比较，GK模型组视网膜明显变薄，各亚层的厚度也明显变薄（P＜0.01）；与GK模型组比较，经过治疗后，血栓通组感光层、内核层、外核层和内网层的厚度显著增加，视网膜病变速度明显变慢，视网膜皱缩程度明显减轻（P＜0.01），且XST100组效果明显优于XST50组。说明血栓通可改善GK2型糖尿病大鼠视网膜病理结构。

3 讨论

糖尿病已成为影响人类生活水平的重要原因，随着糖尿病病程的延长，并发症的发生在所难免，临床中也主要以延缓疾病发展作为防治的主要方向。注射用血栓通是由三七主根为原料制成的粉针剂，主要成分为三七总皂苷。常用于治疗中风偏瘫胸痹心痛、脑血管病后遗症、视网膜中央静脉阻塞等。药理学研究表明血栓通注射液具有改善脑供血、增加脑灌注、减轻缺血所致病理损害、降低胆固醇、抑制血小板聚集、降低血黏度等多种作用[5-6]。本课题组前期研究也表明，血栓通单体成分人参皂苷Rd抑制激活的小胶质细胞产生一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（iNOS）、白介素－1（IL－1）、白介素－6（IL－6）mRNA的表达，具有神经保护作用[7]。注射用血栓通相比口服用药，药液可直接注入人体血管，无吸收过程及首过效应，因而血药浓度可迅速到达高峰发挥作用，药效迅速，作用可靠。根据现有文献及临床治疗发现，很少报道三七总皂苷对糖尿病视网膜病变的防治作用。本研究证实注射用血栓通对糖尿病视网膜病变有防治作用，为临床治疗提供理论依据，但其机制还需更进一步的深入研究。

表1 血栓通对GK大鼠体质量、血糖的影响（x±s）Tab.1 Effect of thrombosis on body weight and postprandial plasma glucose of GK rats（x±s）

表2 血栓通对GK大鼠视网膜病理结构的影响（x±s）Tab.2 Effect of thrombosis on retinal pathology of GK rats（x±s）

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