手足口病患儿血清淋巴细胞免疫分型的水平变化及临床意义

任燕

摘 要：目的 探讨手足口病患儿中血清淋巴细胞免疫分型水平变化，为诊断及治疗手足口病提供临床诊治意义。方法 选取四川省宜宾市第一人民医院2013年3月～2015年3月儿科手足口患儿 150例（分为重症组54例，轻症组96例）及行儿科保健健康儿童105例；采用流式细胞仪进行血清淋巴细胞免疫分型的水平检测，并行组间比较。结果 重症患儿血清淋巴细胞免疫分型水平较轻型低，轻型较健康儿童水平低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 手足口病患儿免疫功能较正常健康儿童呈降低趋势，其中重症患儿免疫功能更低，分析血清淋巴免疫细胞分型水平可作为手足口病患儿判断疾病病情变化及临床治疗观察的一种方法。

关键词：手足口病；血清淋巴细胞免疫分型；T淋巴细胞

中图分类号：R725.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.029

文章编号：1006-1959（2018）01-0082-03

Serum Level of Lymphocyte Immunophenotype in Children with Hand-foot-mouth Disease and its Clinical Significance

REN Yan

（Department of Pediatrics，Fourth People's Hospital of Yibin，Yibin 644000，Sichuan，China）

Abstract：Objective To investigate the changes of serum immunocytotyping in children with hand foot and mouth disease and provide clinical diagnosis and treatment of hand foot and mouth disease.Methods From Yibin First People's Hospital of Sichuan Province in March 2013～March 2015 pediatric HFMD patients in 150 cases（54 cases in severe group and 96 cases in mild group）and 105 healthy children for pediatric care；The detection of serum lymphocyte immunophenotyping by flow cytometry，parallel comparison between groups.Results Serum levels of lymphocyte subsets in children with severe light level is low，low level light compared with healthy children，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion The immune function of children with hand foot and mouth disease is lower than that of healthy children.The immune function of severe children is lower.The analysis of serum lymphoid immune cell typing level can be used as a way to diagnose the disease and to observe the clinical treatment of children with hand foot and mouth disease.

Key words：Hand foot and mouth disease；Serum lymphocyte immunophenotype；T lymphocyte

手足口病（hand foot and mouth disease，HFMD）作为丙类传染病，在学龄前期儿童发病率较高，尤其3岁儿童发病率最高，对儿童健康造成极大危害[1]，手足口病主要通过密切接触、呼吸道等途径进行传播，临床表現为手、足、口腔黏膜可见皮疹（以斑疹、疱疹常见）以及发热等症状；儿童手足口病分为普通型及重症型；重症型手足口病患儿可出现肺水肿、心肌炎、呼吸循环衰竭、神经中枢症状（如意识障碍、昏迷、脑水肿表现）等症状[2]。近年来研究表明，机体免疫系统下降在手足口病发生、发展、转归中发生重要作用；免疫功能变化表现为细胞免疫及体液免疫。T淋巴细胞是机体免疫中主要细胞免疫细胞，参与几乎所有特异性免疫，可以直接抵抗各种细菌及病毒产生抗原，同时调节宿主体液免疫[3]。T淋巴细胞亚群之间的动态平衡，对维持机体细胞免疫及体液免疫尤为重要。本文旨在研究血清中淋巴细胞免疫分型水平变化，探讨手足口患儿免疫功能变化，为临床治疗提供诊治依据。

1资料与方法

1.1一般资料 选取四川省宜宾市第一人民医院2013年3月～2015年3月儿科确诊手足口病患儿150例，其中轻型患者96例，男50例，女46例，年龄1～7岁，平均年龄（3.1±1.04）岁；重型患者54例，男28例，女26例，年龄1～7岁，平均年龄（2.0±1.14）岁。手足口病患儿轻型表现：发热体温37.5～39 ℃，咳嗽、干咳为主，体征：手足口可见疱疹及斑疹；重型表现：患者发热体温维持在39℃以上，伴有头痛、呕吐、手抖，一过性瘫痪；查体：血压下降，手足口可见斑疹及疱疹，偶有肝脾肿大，神经系统、心血管受累等表现，意识障碍、心肌酶异常等）。儿科保健健康儿童105例，其中男75例，女30例，年龄1～7岁，平均年龄（3.0±1.04）岁。各组患者一般资料差异不具有统计学意义（P>0.05），有可比性。endprint

1.2仪器与试剂 用BD（Becton-Dick-inson）公司生产的FACSCaLibur流式细胞仪检测仪器测定淋巴细胞免疫分型水平：淋巴细胞数（L）、T淋巴细胞百分比（CD3%）、CD8淋巴细胞百分比（CD8%）、CD4淋巴细胞百分比（CD4%）、CD4CD8均阳比例（CD4+CD8+%）、NK细胞百分比（CD16%）、B淋巴细胞百分比（CD19%）、T淋巴细胞计数（CD3）、CD8淋巴细胞计数（CD8）、CD4淋巴细胞计数（CD4）、CD4CD8均阳计数、NK细胞计数（CD16）、B淋巴细胞计数（CD19）、CD4/CD8。

1.3收集血清样本方法 抽取实验儿童外周静脉血2.5 ml，放置在加用肝素抗凝真空试剂管中，充分混匀抗凝。放置在室内，避光放置。抽取样本采用Multiset四色免洗淋巴细胞亚群的绝对数方法，具体方法：①每个样本取2支Trucount管，分别标号A和B管；②分别在A管中加入10 μl的CD3/CD8/CD4/CD5抗体，B管中加入10 μl的CD3/CD16+CD56/CD45/CD19抗体；③用反向加样法分别向A、B管中加入50 μl颠倒混匀的抗凝全血，然后涡旋混匀，室温下避光15 min；④分别向A、B管中加入450 μl 1×FACS溶血素，充分混匀，室温下放置10 min；⑤24 h内上述样本上机检测，用Mutiset软件检测分析。

1.4统计学处理 采用统计软件SPSS18对采集得出数据进行统计分析，计量资料采用（x±s）表示，同时对其数据行正态性检验，组间统计资料符合正态分布采用t检验，不符合正态分布采用方差分析检验，以P<0.05为差别有统计学意义。

2结果

重症组中淋巴细胞数（L）、T淋巴细胞百分比（CD3%）、CD8淋巴細胞百分比（CD8%）、CD4淋巴细胞百分比（CD4%）、CD4CD8均阳比例（CD4+CD8+%）、NK细胞百分比（CD16%）、B淋巴细胞百分比（CD19%）、T淋巴细胞计数（CD3）、CD8淋巴细胞计数（CD8）、CD4淋巴细胞计数（CD4）、CD4CD8均阳计数、NK细胞计数（CD16）、B淋巴细胞计数（CD19）、CD4/CD8值均低于轻症组，轻症组较健康组低，见表1～表4。根据方差分析得出差异有统计学意义。

3讨论

手足口病在我国处于高发状态，患儿感染如柯萨奇病毒等肠道病毒后，常见在口腔与皮肤上出现疱疹及丘疹，但是随着病情的进展可出现全身炎症反应综合征，严重可导致多器官功能衰竭。免疫低下患儿感染，常迅速发展为重型手足口病；因此检测患者免疫功能尤为重要[1，3，5]。机体免疫功能在手足口患儿疾病发生发展以及病情进展中发生常见作用，随着大量临床研究显示，淋巴细胞亚群改变导致机体免疫功能受损可能同手足口病情进展有相关性。目前研究最多是T细胞亚群[2，4，6-8]。

血清中T淋巴细胞来源骨髓，成熟器官为胸腺。T淋巴细胞的特有标志为TCR-CD3[T细胞（抗原）受体与CD3分子复合物]。T淋巴细胞根据其表面标志和功能特性，可以分为CD3+CD8+的抑制性T淋巴细胞（CTL）以及CD3+CD4+的辅助性T淋巴细胞（CD4+Th）。CTL细胞通过分泌颗粒酶、穿孔素、通过FasL途径等导致靶细胞的分解机凋亡[2，6，8-10]。CD4+Th细胞可继续分化为分泌型的Th细胞亚群：Th1细胞、Th2细胞、Th3细胞和Th17细胞。正常状态下，T淋巴细胞亚群数量处于一个动态平衡并且相互调节的状态。其值降低说明机体处于免疫抑制状态，易受细菌及病毒、原虫、真菌等因素感染[6，9，10-14]。

此临床研究显示，重症组患儿血清中L、CD3%、CD8%、CD4%、CD16%、CD19%、CD3、CD8、CD4、CD16、CD19、CD4/CD8值明显低于轻症组，较健康组低，轻症组较健康组低，说明病情随着病情加重，细胞免疫功能处于明显抑制状态。其机制为：①当机体遭受手足口病毒感染，如柯萨奇病毒等后，T淋巴细胞对病毒抗原刺激无增殖性反应，T淋巴细胞产生分裂及凋亡。使大量活化的T淋巴细胞遭到清除，并且诱导T淋巴细胞克隆无反应，机体特异性免疫受到抑制[9，11，12-15]；②T淋巴细胞分化异常，CTL及CD4+Th不处于动态平衡，从而使分泌细胞因子及炎症介质，如IL-1、6、8、10，干扰素等分泌减少，使体液免疫功能受损，结果使机体清除病原体无力，病情恶化[1，5，9，12]。本研究还显示，重症组比轻症组免疫功能障碍更严重，从而说明患者病情越严重，机体的免疫功能抑制越严重，患者的预后更差。当然，由于条件所限，未能同时进行如免疫球蛋白，补体等的检测是本研究的不足之处，如能进行，将会对患儿的免疫功能监测更客观和全面。

综上所述，尽早对血清淋巴细胞亚群检测，对患儿病情的判断、临床治疗的指导具有重要意义。

参考文献：

[1]卫生部.手足口病诊疗指南[M].北京：人民卫生出版社，2012：1-5.

[2]中华人民共和国卫生部.卫生部办公厅关于印发《手足口病诊疗指南（2010年版）》的通知[EB/OL].[2016-05-01].http：//www.moh.gov.cn/mohyzs/s3586/201004/46884.shtml.

[3]李国伟，陈巧格，王万民，等.2013-2015年郑州市重症手足口病流行特征分析[J].职业与健康，2016，32（15）：2107-2109.

[4]Stock I.Hand，foot and mouth disease more than a harmless"childhood disease"[J].Med Monatsschr Pharm，2014，37（1）：4-10.

[5]Hongyan G，Chengjie M，Qiaozhi Y，et al.Hand，foot and mouth disease caused by coxsackievirus A6，Beijing，2013[J].Pediatr Infect Dis J，2014，33（12）：1302-1303.endprint

[6]Wang XD，Huo XM，Zhang YR，et al.Clinical significance of the changes of serum inflammatory indicators in children with severe hand，foot and mouth disease[J].Chin J Nosocomiol，2015，25（24）：5694-5696.

[7]石庆生.重症手足口病早期诊断和治疗[J].临床荟萃，2012，27（5）：457-459.

[8]Li S，Mo LY，Hu B，et al.Clinical significance of N-terminal pro-brain natriuretic peptide in patients with severe hand，foot and mouth disease[J].China J Infect Chemother，2015，15（4）：354-358.

[9]Gan ZK，Jin H，Li JX，et al.Disease burden of enterovirus 71 in rural central China：A community-based survey[J].Hum Vaccin Immunother，2015，11（10）：2400-2405.

[10]杜兴媛，蒋虹.重症重型手足口病CSF、MRI、EEG检查的临床应用价值[J].广西医学，2014，36（1）：118-119.

[11]Wang ZL，Xia AM，Li YF，et al.Socioeconomic burden of hand，foot and mouth disease in children in Shanghai，China[J].Epidemiol Infect，2016，144（1）：138-143.

[12]Fan L，Sidani S，Cooper-Brathwaite A，et al.Feasibility，acceptabilityand effects of a foot self-care educational intervention on minor foot problems in adult patients with diabetes at low risk for foot ulceration：apilot study[J].Can J Diabetes，2013，37（3）：195-201.

[13]黎祖秋，潘利花，李海燕，等.南寧市2008-2014年手足口病流行病学及病原学特征[J].中国热带医学，2015，15（12）：1460-1463.

[14]Lau C，Nygard S，Fure H，et al.CD14 and complement crosstalk and largely mediate the transcriptional response to Escherichia coli in human whole blood as revealed by DNA microarray[J].PloS one，2015，10（2）：e0117261.

[15]邹小卫，蒋豪明，陈棉，等.肠道病毒71型感染的手足口病患儿免疫球蛋白及补体检测的意义[J].中华医院感染学杂志，2016，26（18）：4234-4236.

收稿日期：2017-3-29；修回日期：2017-6-18

编辑/杨倩endprint