高效液相色谱法测定0.06%甾烯醇微乳剂中有效成分含量方法研究

曹磊+顾爱国+王莉

摘要 本文采用高效液相色谱法建立了0.06%甾烯醇微乳剂中有效成分含量测定方法，结果表明，该方法能够快速准确测定该样品中有效成分甾烯醇含量，符合对其进行质量控制的要求。

关键词 高效液相色谱法；0.06%甾烯醇微乳剂；含量测定

中图分类号 S481+.8 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）02-0125-02

Determination of Active Component Content in 0.06% β-sitosterol ME by HPLC

CAO Lei GU Ai-guo WANG Li

（Jiangsu Product Quality Testing & Inspection Institute，Nanjing Jiangsu 210007）

Abstract Content determination method of active comonpent in 0.06% β-sitosterol ME by HPLC was evaluated.The results showed that the method could determine the content quickly and accurately.This study could provide scientific basis for the laboratory quality management and control.

Key words HPLC；0.06% β-sitosterol ME；content determination

甾烯醇，化学名称为2，4 R-乙基胆甾-5烯-3β-醇，具有杀菌活性功能，不溶于水，常温下微溶于丙酮和乙醇，可溶于苯、氯仿、乙酸乙酯、二硫化碳等有机溶剂，0.06%甾烯醇微乳剂为由甾烯醇原药、水和适宜助剂制成的半透明均相液体[1-3]。目前仅查得采用薄层扫描法测得其含量[4]，暂无相关文献报道采用高效液相色谱法对其质量分析方面的研究，本文旨在建立高效液相色谱法（HPLC）测定该产品中有效成分甾烯醇含量的方法，便于进行快速准确的定性及定量检测。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器设备。Agilent 1260高效液相色谱仪（由美国安捷伦公司生产）；250.0 mm×4.6 mm（i.d）不锈钢柱，内装ODS-C18，粒径5 μm的填料；电子分析天平（XS105DU型，METTLER TOLEDO）；超声清洗仪（KQ-300E，昆山市超声仪器有限公司）。

1.1.2 供试药剂。甲醇（含量99.9%，色谱纯，德国Merck）；新蒸二次蒸馏水（18.2MΩ·cm，Milli-Q）；甾烯醇标样（纯度98.5%，企业提供）；0.06%甾烯醇微乳剂（企业提供）。

1.2 色谱条件

流动相为甲醇∶水=98∶2（v/v）；流速1.2 mL/min；柱温25 ℃；检测波长205 nm；进样体积 10 μL。

1.3 试验方法

1.3.1 标样溶液的配制。精密称取0.02 g甾烯醇标样（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，加甲醇后进行超声溶解，冷却至室温后再用甲醇稀释至刻度，摇匀并过滤即得标样溶液。

1.3.2 样品溶液的配制。准确称取含甾烯醇的试样0.02 g（精确至0.000 1 g），置于100 mL容量瓶中，加甲醇后进行超声溶解，冷却至室温后用甲醇稀释至刻度，摇匀并过滤即得样品溶液。

1.3.3 测定。在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入數针标样溶液，直至相邻2针有效成分峰面积相对变化小于1.5%后，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

甾烯醇的质量分数ω（%）按下式计算：

式中：A2—试样溶液中甾烯醇峰面积的平均值；A1—标样溶液中甾烯醇峰面积的平均值；m1—标样的质量（g）；m2—试样的质量（g）；w—甾烯醇标样的质量分数（%）。

1.4 方法学验证

1.4.1 检出限及定量限。按照1.3.1所述，配置成0.2 mg/mL的标样溶液进行测定，按3倍信噪比和10倍信噪比分别计算检出限和定量限[5-6]。

1.4.2 线性关系。分别精密称取甾烯醇标样0.05 g（精确至0.000 1 g）置于50 mL容量瓶中，加入甲醇后超声溶解并稀释得到刻度即得浓度为1.0 mg/mL的工作标准溶液，再分别稀释得到浓度为0.05、0.10、0.20、0.50 mg/mL的工作标准溶液，将上述5个不同浓度点的供试液的浓度（mg/mL）作为横坐标，进样后相应的峰面积为纵坐标做工作曲线，拟合回归线性方程[5-6]。

1.4.3 精密度。将1.3.1所述配置的标样溶液连续进样5次，计算平均峰面积及相对标准偏差（RSD）[5-6]。

1.4.4 回收率。在空白样品中分别添加0.05、0.20、1.00 mg/mL 3个不同浓度水平的标样溶液，按照上述试验步骤进行加标回收率测定，每个添加水平各配置3份供试品溶液（n=9），计算平均回收率及相对标准偏差（RSD）[5-6]。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

参考甾烯醇的溶解性特点得出其极性偏弱，并结合研究采用的色谱体系为反相体系，故考察了不同混合比例的甲醇-水及乙腈-水作为流动相。

经过摸索优化，得出当流动相为甲醇与水混合比例为98∶2，且流速为1.2 mL/min时，能较好地实现样品中各组分的有效分离，排除了与甾烯醇相邻峰的干扰，且峰型良好，可作为理想条件。endprint

2.2 检出限及定量限

将标样溶液经过多步稀释后逐一浓度进样，最终得出甾烯醇的检出限为1.79 μg/mL，定量限为5.96 μg/mL。

2.3 线性关系

由图1可知，甾烯醇的线性方程Y=369.62X+700.99（n=5），相关系数为0.999 4，线性范围为50～1 000 μg/mL。

2.4 精密度

精密度验证结果如表1所示，结果表明该方法精密度良好，满足检测要求。

2.5 回收率

该检测方法加标回收率试验结果如表2所示，结果表明，在添加设计的低、中、高3个浓度标准溶液后，回收率及相对标准偏差均符合检测要求。

2.6 样品测定

选取企业提供0.06%甾烯醇微乳剂作为供试样品，按照本文所述试验方法对其有效成分进行检测，标样及样品的液相图谱如图2、3所示。结果表明，该检测方法具有操作简便及快速准确的特点。

3 结论

本文通过试验研究建立了0.06%甾烯醇微乳剂含量的高效液相色谱检测方法，并据此对样品进行了检测。结果表明，该方法完全适用于该产品有效成分的含量测定，对于严格控制该产品质量具有积极意义。

4 参考文献

[1] 刘焕梅，李立军，孙晓然，等.孕甾烯醇酮吡咯化合物的制备[J].精细石油化工，2013，30（3）：32-34.

[2] 申向荣，张德志.枳椇子石油醚部位的化学成分研究[J].廣东药学院学报，2006（6）：594-595.

[3] 韩富根，卢叶，姬小明，等.新型吡咯类衍生物的合成[J].有机化学，2010（7）：1080-1083.

[4] 陆蕴如，杨晓云，沙德智.五种党参中△～7-豆甾烯醇、果糖的含量测定[J].中国中药杂志，1989（8）：36-38.

[5] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典》2015版二部附录[M].北京：中国医药科技出版社，2016.

[6] 农药产品质量分析方法确认指南：NY/T 2887-2016[S/OL].[2017-09-20].http：//www.safehoo.com/Standard/Trade/Chemical/201705/483465.shtml.endprint