苦参碱对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力的影响

郭永梅 曹柳 肖莉萍 杨宇秀 高建华

【摘 要】目的：探讨苦参碱对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力的影响。方法：将Morris水迷宫试验达标的18只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型组和苦参碱组（15mg·kg-1），每组6只。模型组和苦参碱组大鼠双侧海马注射凝聚态Aβ1-40，正常对照组分别给予等体积药物或生理盐水灌胃，持续 28d。采用Morris水迷宫测试行为学指标，观察大鼠学习记忆能力。结果：与正常对照组相比，模型组大鼠学习记忆能力均明显下降；与模型组相比，苦参碱组大鼠Morris水迷宫作业的错误反应次数减少，记忆能力均明显增强（P<0.05）。结论：苦参碱灌胃可以减轻阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力损伤。

【关键词】苦参碱；阿尔茨海默病；大鼠；记忆力

中图分类号： R285.5 文献标识码： A 文章编号： 2095-2457（2018）32-0075-002

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.32.034

阿尔茨海默病（Alzheimers disease，AD）是老年人常见的神经变性疾病，是起病隐匿、进行性的神经系统退行性疾病[1]。目前研究表明：β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ）的沉积及异常代谢是引发AD的关键诱因。在许多研究中均发现：Aβ与神经细胞的凋亡密切关系，Aβ可诱导神经细胞凋亡[2]。苦参碱是（matrine，MAT）由植物苦参的干燥根、茎、植株及果实等部位，经乙醇等有机溶剂提取得到的活性成分，一般为苦参总碱。该成分具有广泛的抗肿瘤、抗心率失常及抗炎等作用，临床上多用于肝炎的治疗，且毒副作用小，疗效较好[3]。但苦参碱的抗炎作用能否对AD起到记忆保护作用，目前国内外尚未见报道。本研究采用大鼠海马注射凝聚态凝聚态Aβ1-40构建AD动物模型，通过给药观察苦参碱对AD大鼠学习记忆的影响。

1 材料与方法

1.1 动物分组及实验处理

健康雄性SD大鼠（清洁级），体质量在250～300 g，购自南昌大學医学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK-2015-0004。经Morris水迷宫初筛，淘汰反应中过于灵敏、先天痴呆和游泳姿势不良者之后，将18只大鼠随机分为3组，正常对照组、模型组和苦参碱组大鼠，每组6只。大鼠自由饮食，昼夜交替饲养，饲养室温度保持为15℃～20℃。

1.2 主要试剂和实验仪器

β-淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）（购于美国Sigma公司）；苦参碱（购于上海克隆生物高技术有限公司）；ZH-DSG型Morris水迷宫（ 购于安徽淮北正华生物仪器设备有限公司）。

1.3 实验方法

（1）Aβ1-40孵育 用无菌生理盐水，将0.5mgAβ1-40稀释成浓度为10μg·μl-1的溶液，将恒温箱温度调至37 ℃，孵育1周，使其变为凝聚态Aβ1-40，采用封口膜封口，4℃冰箱保存备用。

（2）大鼠模型的构建[4]用6 %水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠，将其固定于大鼠脑立体定位仪上。采用Cushman和Pellegrino编著的《大鼠脑立体定位图谱》所设计方法，以前囟为原点，向后4.0mm，中线旁2.0～2.5mm，采用微量进样器在颅骨面下进针3.0～3.5mm，每只SD大鼠注射5μl，对照组按照AD模型组方法，注射生理盐水5μl。苦参碱组大鼠正常喂养基础从造模手术当天灌胃苦参碱组15mg·kg-1治疗，对照组及模型组灌胃等剂量生理盐水，各组共给药28d。

（3）记忆能力测试项目[5]SD大鼠造模完成后，进行Morris水迷宫作业实验：人为将用墨水染成黑色的水池分为四个象限，选择其中一个象限放入一平台，将大鼠沿壁依次从不同象限放入池中，记录大鼠的运动轨迹，并用软件处理、分析。①定向航行试验：历时5d，前4d为训练，分别从四个不同象限的池壁中点入水，每次大鼠游泳60s，训练时任意选择一入水点，测其在60s内找到平台所需的时间（逃避潜伏期），若大鼠未能寻找到平台，则记录其逃避潜伏期为60s。②空间探索试验：在第6天时撤除水平台，然后任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中，测其在120s内在原象限的游泳时间及游泳距离占总距离的百分比。

（4）统计学方法采用SPSS16.0统计分析软件，组间比较用t检验，多组间比较采用方差分析。

2 结果

行为学及记忆能力的改变苦参碱对AD大鼠定位航行能力及空间探索能力的影响研究显示，与模型组小鼠潜伏期显著增加（P<0.01），游泳距离显著增加（P<0.01），原平台象限跨越次数比显著减少（P<0.01），原平台象限游泳时间显著减少（P<0.01）；与模型组比较，苦参碱组及对照组大鼠潜伏期显著减少（P<0.01），游泳距离明显缩短（P<0.05），原平台象限跨越次数比显著增加（P<0.01），原平台象限游泳时间比显著增加（P<0.01）。见表。

3 讨论

认知记忆功能方面的减退是AD病人的重要临床表现。Morris水迷宫检测能较全面地考察动物的认知过程，可排除气味对实验结果的影响，客观的反映实验动物的认知水平，以其操作简便，数据记录准确，误差小的特点，被广泛用于认知记忆能力的测试[5]。大量老年斑、神经纤维缠结和选择性神经元及突触的丢失是AD病的重要神经病理学特征。本研究表明：苦参碱灌胃可以减轻阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力损伤。

【参考文献】

[1]雷公藤内酯醇对AD模型大鼠海马神经细胞凋亡的影响[D].南昌：南昌大学，2010.

[2]雷公藤内酯醇对阿尔茨海默病模型大鼠海马突触后致密物蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚基2B和突触后致密物质95的影响[D].南昌：南昌大学，2010.

[3]黄丹，赖玲.苦参碱剂型的研究进展[J].广西医科大学学报，2014，31（6）：1040-1042.

[4]李宜培，彭蕤蕤，柴高尚，等.促红细胞生成素对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力及其超微结构的影响[J].中国老年学杂志，2015，35（3）：1620-1623.

[5]于涛，赖世隆.补肾益智方对实验性阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆水平的影响[J].中国老年学杂志，2015，35（2）：1030-1033.