藏酋猴类人ABO血型的鉴定与分析

杨 锋，谢晓娟，周 亮，吴奇文，余晓君，曾 雅

（四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物质量检测中心，四川 成都 610212））

发现藏酋猴与恒河猴、食蟹猴血型相比，具有显著的独特性，现将检测结果报告如下，供同行参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康藏酋猴35只，雌性22只，雄性13只；健康恒河猴10只，雌性6只，雄性4只；健康食蟹猴10只，均为雌性。以上个体均来自四川省医学科学院、四川省人民医院实验动物研究所养殖研究室，驯养繁殖许可证号“2004-驯繁-21-01”，生产许可证号“SCXK（川）2010-01”。

1.2 试剂及耗材

一次性血清采集管，批号121001，生产厂家：江苏康健医疗用品有限公司；离心机：德国Eppendorf离心机，型号：5702；正常人O型红细胞，由四川省医学科学院，四川省人民医院城东病区检验科提供；ABO血型反定型试剂盒（人血红细胞），批号20130203，生产厂家：长春博讯生物技术有限责任公司；抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体），批号20120915，生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司。

1.3 方法

1.3.1 动物准备 将藏酋猴用兽用氯胺酮（沈阳兽药厂，批号20110908）麻醉，由饲养人员保定，暴露后肢静脉，消毒后备用；

1.3.2 正定型样本准备：用一次性红头血清采集管采集静脉血2mL，3000r/min离心5min，弃去血清，吸取100μL红细胞，加入生理盐水，制成10%的红细胞悬液待用；

1.3.3 反定型样本准备：用一次性红头血清采集管采集静脉血2mL，室温静置60min，4℃冰箱内静置过夜，取出后室温静置30min，3800r/min离心10min，获得新鲜血清备用；

1.3.3.1 人O型红细胞制备 用移液器吸取新鲜人O型红细胞适量，缓慢推入一次性离心管中，按1：9的比例等量加入0.9%的生理盐水，轻微摇匀，1500转/min，离心15min，弃去上清液，反复洗涤至上清液清亮后备用；

1.3.3.2 反定型检测血清吸附处理 吸取制备好的200μL新鲜血清，与200uL洗涤后的正常人O型红细胞混匀，轻微混匀，37℃恒温孵育30min，1400r/min离心10min，取上清液备用；

1.3.4 实验猴类人ABO血型检定方法按《全国临床检验操作规程》进行；

1.3.5 利用临床已知血型的血清样本进行平行比对检测，做为方法验证对照。

2 检测结果

2.1 参考文献报道的操作 本次检测随机选取4只藏酋猴，4只恒河猴进行正定型的平行检测，用人抗A、抗B试剂与实验猴红细胞反应，无凝集反应出现，表明猴外周血红细胞不表达A、B抗原，与文献报道一致；

2.2 利用商品人ABO血型反定型盒，用标准人A、B红细胞与制备好的待测血清反应，有明显的特异性凝集现象出现，通过观察反应结果，可明确的判断藏酋猴的血型。

3 讨论

动物的血型具有种属的独特性，在相关报道中显示，各种动物均有特定的血型分类。非人灵长类猕猴属动物血型在前期研究中发现，猕猴多为B型；食蟹猴有A型、B型和AB型，少数为O型；平顶猴有O型和B型。

试管法和卡式凝胶微柱法都是利用抗原抗体特异性结合反应进行血型的判断，试管法观察时间较长，出现凝集后的判断需要一定的经验积累；卡式微柱凝胶利用专用的离心机，在重力的作用下有效的将凝集红细胞和游离红细胞分离，方便观察且利于标准化建立。

笔者认为，明确藏酋猴血型，建立非临床灵长类动物“活体血库”，在方案设计及科研试验中做到“有针对性的”使用动物资源，具有非常重要的社会和经济价值。