浅谈辛伐他汀对大鼠脂肪源性干细胞的增殖和成骨分化的影响

付明

目前有很多关于辛伐他汀诱导骨髓间充质干细胞成骨诱导分化及增殖的报道，但是对于辛伐他汀影响脂肪源性干细胞成骨分化的报道比较少，此次文章对辛伐他汀影响大鼠脂肪源性干细胞的增殖和成骨分化开展了研究分析，有以下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料

主要试剂：辛伐他汀（默沙东），I型胶原酶（Sigma），CCK-8（ 碧 云 天 ），RNAiso Plus（TAKARA）， PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser（TAKARA）， SYBR〇 R Premix Ex TaqTM II （TAKARA），茜素红S（Sigma），引物合成（上海introvigen），常规细胞培养器械。

1.2 方法

将大鼠用0.6%戊巴比妥钠（0.5 ml/100 g）腹腔注射麻醉，双侧腹股沟去毛，消毒铺单，取腹股沟直切口，分离皮下脂肪，操作注意无菌原则。将约1.2 g脂肪移入超净台，含2%双抗的PBS漂洗5遍，剔除结缔组织和血管，然后剪碎。PBS冲洗2编后，加入3倍体积的0.15% I型胶原酶，37℃恒温震荡（250 rpm）消化60 min，待消化液浑浊。白色液性脂肪漂浮于表层，残余组织沉淀于底层。用含10% FBS+1%双抗的低糖DMEM培养基混悬细胞，70 μm筛网过滤[1]。从第二代开始，消化后按每1×106个细胞每支冻存管的量冻存细胞，长期保存。后将细胞分为5组，前4组分别以0.01μm/L、0.1μm/L、1μm/L、10μm/L浓度辛伐他丁培养，第5组不加入任何其他干预药物，为对照组。

1.3 观察指标

将实验组和对照组ADSCs分别接种于24孔板中,接种密度为5×104个细胞/孔,并设调零孔和对照孔，运用手持式细胞计数仪计数细胞分别计算各组第1天、第7天细胞数量。

2 结果

在接种24 h后，细胞体比较小，形状为星形，存在漂浮脂肪液滴。接种48 h之后，部分细胞出现集落生长，细胞的体积不断增加。接种72 h后，细胞生长呈现纤维状，部分聚集成团。经过7天培养，梭形细胞快速生长，细胞密度达到80%，可以进行传代。辛伐他丁检测显示，7 d时0.01 μm/L组细胞个数为（2.19±0.14）×104个，0.1μm/L组的ADSCs细胞个数为（1.98±0.12）×104个，细胞个数最多。随着辛伐他汀浓度的增加，ADSCs细胞个数逐渐降低，1 μm/L组细胞个数为（1.86±0.11）×104个，与对照组的ADSCs（1.83±0.13）×104个无差异性，10 μm/L组ADCSs的细胞个数为（1.58±0.08）×104个，已出现明显的抑制作用。

3 讨论

目前临床对于干细胞的研究不断深入，脂肪源性干细胞被广泛关注[2]，对于脂肪肝细胞的研究持续了很久，没有停止过。脂肪组织是中胚层产物，在组织中广泛存在，因为中胚层来源属性，ADSCs的跨胚层多向分化能力较强[3]。ADSCs组织具有很好的相容性，可以保持良好生物相容性并且不会有免疫排斥情况出现。芬兰的一位外科医生进行了自体脂肪干细胞异位诱导修复上颌骨大面积骨缺损，其效果比较理想[4]。还有研究是将ADSCs注射到小鼠皮下，一年内没有出现瘤体[5]。

他汀类药物可以改善血管内皮功能，消除血管炎症[6-8]。他汀类药物可以影响骨髓间充质干细胞的成骨分化。我们就其是否能够影响脂肪源性干细胞的成骨能力进行了分析，结果显示，随着辛伐他汀浓度的增加，ADSCs能力降低，1μm/L组与对照组的ADSCs增殖能力无差异性，经过7天培养，梭形细胞快速生长，细胞密度达到80%，可以进行传代。

综上所述，辛伐他汀安全性高，获取容易，促成骨效果好，因此在组织工程化骨应用方面具有很高的价值。

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