离子色谱检测全血中的亚硝酸盐及其代谢产物

李晓莹 辽阳市疾病预防控制中心 检验科 （辽宁 辽阳 111000）

亚硝酸盐是一种致毒性、致死性很强的物质，它进入人体在血中代谢的游离与血红蛋白高效结合夺取血液中的氧，使中毒者很快窒息死亡[1]。亚硝酸盐的致死剂量一般为3g，而可引起中毒症状的最低剂量为0.3g。血液是检测亚硝酸盐及其代谢产物最为敏感的指标，对于血液亚硝酸盐含量检测方法也有很多种，常见的一般使用的是化学分光光度、极谱法以及离子色谱法[2]。本文主要探究离子色谱法检测全血中的亚硝酸盐以及代谢产物浓度的实验效力，评价这种方法的灵敏度和准确性是否可用于临床辅助诊断，现报告如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

ICS-5000+型离子色谱仪（配备KOH淋洗液自动发生器、AS自动进样器，美国ThermoFisher公司），entrifuge 5430型高速离心机（德国艾本德公司）[3]，SK-1型快速混匀器（金坛市顺华仪器有限公司），Milli-pore Direct Q-5超纯水仪（美国密理博公司）。乙睛（色谱纯，德国Merck公司），标准品（水剂，以N计100mg/L，国家标准物质研究中心）[4]，实验用水为超纯水。

1.2 方法

将Dionex OnGuard Ⅱ Ag柱和Na柱分别用10mL去离子水活化，Dionex OnGuard Ⅱ RP柱分别用5mL二甲醇、10mL二去离子水活化，流速均为2mL/min，活化时间均为30min[5]。静脉抽取5mL中毒患者血液，置于15mL塑料离心管中，加入2mL乙睛沉淀蛋白，加入去离子水7mL，振荡、混匀，5min后置于高速离心机以7800r/min的转速离心10min，取上清液分别经过活化的Dionex OnGuardⅡRP柱、Dionex OnGuardⅡAg/Na柱及有机相性针式滤器，弃去前而3mL，流出液后开始收集滤液。

1.3 统计学分析

采用SPSS 22.0对所得资料进行统计学分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，两组比较P＜0.05表示有显著统计学差异。

2.结果

血中蛋白的沉淀选择乙腈更好，因为乙腈介电常数较乙醇、甲醇等更小，所以沉淀更快，用2mL的乙腈就可以将95%蛋白质从1mL血液中沉淀析出，对样品的pH值几乎无干扰。

血中成分复杂，需要梯度分离。使用不同物质去除不同离子，C18柱很好地去除有机物、Na柱很好地去除银离子、Ag柱很好地去除Cl-。

色谱测定结果显示，当NO2-的浓度在0.256～20.31mL/h，线性关系最为良好，线性方程为Y=0.0312X+0.4892，相关系数r为0.9871。测的的检出限为0.16μg/mL，总回收率为96.3%～104.5%。

3.讨论

亚硝酸盐中毒在生活、公安案例中出现率不低。法医人员对尸体的鉴定首先需要测定血中亚硝酸盐的浓度[6]。口服亚硝酸盐中毒的患者在清洗胃内容物时，需将胃内容物过C18柱，留取有效检验成分，去除油脂、有机代谢消化干扰物[7]。对于检测样品的淋洗剂的选择也有所将就，本次实验在比较了10余种洗剂后，首选了Na柱来清除干扰离子，充分淋洗待检测离子，使其成为最佳流动相，Na柱清洗后的游离子干扰因素最少，检测准确程度最佳。当患者亚硝酸盐中毒后一段时间，患者可能排除分泌物，而尿液可将部分排出而检测不到，但不能因此判断患者没有中毒，需要进一步进行血常规的化验来检测血中是否含有中毒物，使用离子色谱法检测血中的含量[8,9]。

综上所述，离子色谱法高效、便捷、重复性良好、回收率优、安全性高，适合较大批量样品的检测工作。在食品检测中，离子色谱法也常被应用于检测食物、水等亚硝酸盐含量，所耗费用并不高，结果准确率高，可靠性好，为临床检验提供科学准确的诊断依据。

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