龟甲胶的现代研究进展

石 萍 鲁增辉 游华建 陈仕江

重庆市中药研究院，重庆 400065

龟甲胶(Testudinis Carapacis et Plastri Colla,TCPC)为龟科动物乌龟Chinemysreevesii(Gray)的背甲和腹甲经过水煎煮、浓缩而制成的固体胶，历版《中国药典》均有收载，为中国名贵中药，始载于《本草崇源》，属甲胶范畴，龟甲胶性凉，味咸、甘，归肝、肾、心经，具有滋阴，养血止血之功效，主治阴虚潮热、骨蒸盗汗、腰膝酸软、血虚萎黄、崩漏带下等[1]。根据历代本草记载，龟甲胶为常用中药的补虚药物之一。

目前，国内对动物胶类药材的研究主要集中在阿胶及鹿角胶，对龟甲胶的研究十分匮乏，笔者通过查阅近15年有关龟甲胶研究报道，从龟甲胶的化学成分、药理作用、临床、真伪鉴定及质量控制等方面进行综述，旨在为更好地保护利用龟甲胶提供数据和参考。

1 化学成分研究

目前，文献资料显示龟甲胶主要成分为蛋白质、多肽、氨基酸及微量元素等，其有效物质基础尚不明确。1.1 蛋白质、多肽及氨基酸的含量测定 李春梅等[2]采用激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)，对龟甲胶1500～13000Da区间蛋白质、肽分布以及分子量进行分析，并得到龟甲胶的蛋白质/肽成分质量指纹图谱，该结果也可作为龟甲胶数字化质控的标准。除了对蛋白质和肽的研究，有学者[3]也对龟甲胶氨基酸的含量进行测定，并得到14种氨基酸含量(羟脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、缬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸)，其测定结果也可作为龟甲胶药材的鉴别标准，为进一步完善龟甲胶药材的质量标准提供一定的数据参考。周维等[4]对龟甲的提取物(即龟甲胶经水煎煮、滤过、浓缩、干燥后，并加辅料混合均匀后而制得的颗粒)中6种氨基酸(甘氨酸、L羟脯氨酸、L脯氨酸、瓜氨酸、丙氨酸、亮氨酸)的含量进行测定。万鸣等[5]对采自不同时间阶段，来源于同一产地(湖北荆州)的龟甲进行水煎提取处理后，测定龟甲胶的含氮量，并分析不同时间段的龟甲及不同部位(背甲和腹甲)的出胶率及含氮量，结果表明，不同时间采集龟甲对出胶得率和氮含量结果影响不大，出胶得率在11.10%～14.30%，氮含量在16.14%～17.08%；从不同部位如背甲和腹甲中提取龟甲胶，出胶率分别为13.43%和14.31%，含氮量分别为16.20%和16.31%。提示不同时间及不同部位对龟甲的出胶率及氮含量影响无统计学差异(P>0.05)。1.2 微量元素及有害元素含量的测定 曹继华等[6]对包括龟甲胶在内的6味中药进行微量元素的测定，结果显示，龟甲胶中含有钙、镁、铁、锌、磷、锰、铜、锶等多种微量元素，并且钙和铁的含量要明显高于其它两种胶类药材如鹿角胶和阿胶。有研究者对龟甲胶中有害元素的含量进行测定，袁利杰等[7]利用微波消解-电感耦合等离子质谱(ICP-MS)测定龟甲胶中6种有害元素(砷、铜、铬、铅、镉、汞)的含量，王海波等[8]采用电感耦合等离子体光谱，对9批龟甲胶样品中铬元素的含量进行测定，铬含量在0.15～1.24 mg·kg-1之间。查阅我国历版药典及相关医药法规，尚未对龟甲胶中铬元素及其它有害元素的含量及限度进行规定，因此建立有害元素检测的方法及含量的控制对安全用药具有十分重要的意义。

2 药理作用研究

2.1 促进细胞增殖 药理研究表明，龟甲胶通过上调或下调一系列基因的表达，可促进软骨细胞的增殖，抑制细胞的凋亡，从而修复受损软骨，最终延缓骨关节炎的病理进程。

林嘉辉等[9]选取3月龄豚鼠骨关节炎软骨细胞作为实验对象，分别用龟甲胶、鹿角胶、盐酸氨基葡萄糖(GHC)含药血清和生理盐水对其进行干预，比较含药血清对软骨细胞的促增殖作用情况，并且采用QPCR检测干预后软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达差异情况。结果表明，龟甲胶和鹿角胶均下调JNK及p38 MAPK基因的表达，从而减少JNK和p38 MAP在软骨细胞内的合成，进而减少基质降解，抑制细胞的凋亡，最终延缓骨关节炎病理进展，其中龟甲胶组抑制JNK和p38 MAPK基因的表达作用最强。陈泽华等[10]、陈炳艺等[11]也进行了类似的实验，区别是选取的试验对象不同，为3月龄豚鼠膝关节软骨细胞，检测干预后软骨细胞增殖情况，并采用SABC免疫组化检测干预后软骨细胞MKK的表达。结果表明，龟甲胶、鹿角胶均能显著性上调膝关节软骨细胞MKK的表达，促进软骨细胞增殖，修复受损软骨、缓解骨关节炎。2.2 抑制细胞凋亡 李楠等[12-13]通过试验研究龟鹿二仙胶及其拆方对大鼠及豚鼠软骨细胞Collagen-Ⅱ和GAG的表达，结果发现，龟鹿二仙胶全方可明显促进软骨细胞Collagen-Ⅱ和蛋白多糖的表达，抑制软骨细胞凋亡，其作用明显强于各个拆方，且君药龟甲胶和鹿角胶的作用强于臣药人参和枸杞的作用。该团队在后续试验中选取第三代4周龄SD大鼠关节软骨细胞，采用SNP诱导凋亡后，用免疫组化染色法以及实时荧光定量PCR检测研究了龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞bax、bcl-2的表达[14]，结果显示，龟鹿二仙胶及其各个拆方均能上调bcl-2表达及下调bax的表达，即龟甲、鹿角、人参、枸杞均具有抑制软骨细胞凋亡的作用，并且研究发现，君药龟甲和鹿角较臣药人参和枸杞有明显加强抑制凋亡的作用。2.3 提高血清雌二醇(E2)水平 杜江等[15]研究表明，龟甲胶与鹿角胶在提高血清雌二醇(E2)浓度及促进膝关节软骨基质Ⅱ型胶原表达方面具有显著性的作用。李楠等[16]研究龟鹿二仙胶及其各个拆方对SD大鼠膝关节软骨退变的影响，结果证实，龟甲和鹿角配伍人参可明显提高血清雌二醇(E2)浓度水平，抑制关节软骨产生炎症反应，促进软骨细胞Collagen-Ⅱ的合成及增殖。

3 临床研究

龟甲胶在临床上主要用于滋阴养血、止血补血、益肾健骨等方面。

俞红丽等[17]利用益血生胶囊(阿胶、鹿角胶、龟甲胶、白芍、当归等成分)治疗48例缺铁性贫血，治疗3个月后，治疗组复发率、不良反应均低于对照组(P<0.05)。赛汉其其格[18]利用补肾固冲(熟地黄、制首乌、山茱萸、山药、龟甲胶、生龙骨、牡蛎等)治疗268例更年期宫血，治愈164例，好转75例，总有效率达89.18%。陈淑萍[19]运用补肾基本方(熟地黄、怀山药、龟甲胶、鹿角胶等主要成分)治疗功能性子宫出血35例，痊愈21例，显效9例，好转4例，总有效率高达97%。蔡忠凤等[20]利用龟鹿补肾丸(龟甲胶、鹿角胶、菟丝子炒、淫羊藿、续断等主要成分)治疗阳萎86例，总有效率达100%。李文顺等[21]运用龟鹿二仙胶汤治疗肝肾亏虚型膝骨性关节炎60例，总有效率98.3%，临床疗效明显。

4 真伪鉴定及质量控制研究

4.1 基原动物鉴定及质量控制 中药基原鉴定是中药鉴定的基础，确保应用中药材来源及品种的准确性，对中药材的继承、研究、生产、开发利用均具有十分重要的意义[22]。

唐敏等[23]选取以巴西龟和中华草龟为来源的龟甲胶作为实验对象，采用超高效液相色谱-电喷雾四级杆飞行时间质谱法，并且以牛皮特征肽离子为检测对象对两种来源的龟甲胶进行测定，结果显示，该方法可区别巴西龟龟甲胶和掺杂牛皮成分的龟甲胶，也可用于龟甲胶的质量控制。彭婷婷等[24]采用超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS)，以不同品种龟甲为原料分别熬制成龟甲胶，并测定其牛皮源的含量，结果表明，纯草龟龟甲熬制的龟甲胶检测结果为牛皮源阴性，掺杂巴西龟龟甲的龟甲胶检测结果为牛皮源阳性，该方法可有效控制龟甲胶质量。

4.2 几种动物胶类药材鉴定及质量控制 目前，研究较多的动物胶类药材有3种，即龟甲胶、鹿角胶和阿胶。殷学毅[25]选用包括龟甲胶在内的3种动物胶类样品，分别置于热分析仪样品室，在空气气氛下，以5℃/min的速度从20℃匀速升至550℃，获得不同样品的微商热重(DTG)曲线和差热分析(DTA)曲线，根据其曲线的特征差异进行鉴别，结果显示，利用热分析方法可以将该几种动物胶类药材(龟甲胶、鹿角胶、阿胶)进行区分鉴定。钱瑛等[26]将阿胶、龟甲胶、鹿角胶3种样品，经加热、研磨粉碎后，放入同步热分析仪样品室中进行热分析鉴定，对每种样品分别做3次有效生物学重复测定，将得到的原始数据取平均值后，做DTG、DTA数据分析表，并分析该方法与感官鉴定法、水试法、圆二色谱鉴定法的成功率。结果显示，热分析法能够准确并快速鉴定区别龟甲胶、阿胶、鹿角胶这3种胶类药材，且具有直观简便、成功率高的优点，能够在中药材鉴定中推广并加以运用。于海英等[27]采用高效液相色谱(HPLC)，建立东阿阿胶、龟甲胶脂溶性成分的指纹图谱，为药用动物胶类药材的鉴别及质量控制提供了依据。

历版中国药典中，动物胶类药材均无专属性鉴别，且性状描述较粗略，对胶类的真伪及优劣很难做出客观、准确的判断。因此对动物胶类中药鉴定及质量控制方面应当予以加强研究，确保动物胶类中药及其制剂的质量，保证用药安全。

5 其他

林芳花等[28]将海螵鞘与龟甲胶药材提取液添加至培养基中饲养果蝇，记录果蝇产生F1代和F2代数量。结果显示，龟甲胶和海螵蛸都能显著性提高果蝇的繁殖力。

6 小结

龟甲胶为我国传统滋补类名贵中药，临床疗效明确。但其有效活性物质尚不明确，因此，应加强对龟甲胶活性物质的挖掘以及对其质量控制方法，对制备工艺的标准进行相关研究，并在龟甲胶真伪鉴定研究方面应当予以加强，以期更有效地利用该药材资源，确保用药安全。

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