绿茶对常见抗菌药物抑菌作用的影响

高若兮

摘要 以高中生物的微生物培养为基础，设计实验探究绿茶的抑茵作用。采用滤纸片法检测两种常见的抗菌药物阿莫西林、青霉素V钾片对肠道菌群大肠杆菌的抑菌作用，并观察绿茶浸出液联合常见抗菌药物对大肠杆菌的抗菌作用。结果表明广谱青霉素对大肠杆菌的抑菌作用比窄谱青霉素强得多，绿茶对两种药物的抑茵作用均无显著影响

关键词 微生物培养 绿茶 阿莫西林 青霉素V钾片 抑菌作用

中图分类号 Q-331 文献标志码 B

在生活中经常听到“茶水不能送服药物”的说法，然而在药物说明书的注意事项中只提及用药前详细询问药物过敏史并作青霉素皮肤试验、有哮喘和肾功能严重损害者慎用等，并未对口服药的送服水作出规定，而同时，现代科学研究表明茶叶中的茶多酚具有广谱抑菌作用，对细菌有较强的抑菌活性。20世纪90年代，日本学者研究发现：头孢唑啉、亚胺培南、氨苄西林、头孢替安、头孢美唑、头孢唑肟和拉氧头孢等抗生素和绿茶浸出液合用，能显著增强对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抗菌作用。我国研究者也通过实验得出结论：各种茶叶对MRSA均有一定的抗菌作用，其中绿茶和白茶的抗菌作用最强。因此，本探究实验基于高中基本实验操作要求以绿茶、阿莫西林与青霉素v钾片为实验材料，大肠杆菌为供试菌，初步探究绿茶浸出液对两种生活中常见抗菌药物抑菌作用的影响，并对“茶水不能送服药物”这一常识作出甄别、判断。

1材料与方法

1.1实验仪器及材料

1.1.1实验材料

江苏宜兴毛尖：大肠杆菌；阿莫西林胶囊（广谱青霉素类，杀菌作用较强）、青霉V钾片片剂（窄谱青霉素类）；LB固体培养基（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15g，1000mL蒸馏水）。

1.1.2实验仪器

培养皿、高压蒸汽灭菌锅、隔水式恒温培养箱、烧杯、玻璃棒、锥形瓶、滤纸、电子天平、刻度尺、涂布棒、移液枪、酒精灯、超净工作台。

1.2实验方法及步骤

（1）绿茶浸出液的制备：在超净工作台中称取0.5g毛尖，浸泡于10mL煮沸蒸馏水中并在超净工作台中自然冷却静置1h，用孔径0.22μm无菌滤器滤过除菌，得到5%绿茶浸出液，备用。

（2）抗菌药物悬浮液的配置：将去除胶囊壳的阿莫西林和青霉素v钾片分别研磨至粉末状，各称取0.5g；将0.5g粉末状药物分别溶解于10mL蒸馏水中，制备药物浓度为0.05g/mL的悬浮液，标号备用。

（3）菌悬液的制备：用接种环挑取3～4环在37℃恒温培养箱内培养24h的大肠杆菌，置于250mL无菌生理盐水中，在37℃下振荡培养12h，备用。

（4）绿茶浸出液对抗菌药物抑菌作用的测定：采用K-B法（Kirby-Bauertest），即滤纸片法。选用质地均匀的滤纸，用打孔机打成直径均为12mm的小圆片，灭菌后烘干；将大肠杆菌在LB培养基上涂布培养，设置4组，每组6个培养皿，每个培养皿中放置3个滤纸片，并相互间隔一定距离。滤纸片滴加阿莫西林悬浮液的记为A组，滤纸片滴加阿莫西林和绿茶悬浮液的记为B组，滤纸片滴加青霉素v钾片的记为C组，滤纸片滴加青霉素v钾片和绿茶悬浮液的记为D组。在37℃培养箱中倒置培养24h后，用游标卡尺测定抗菌药物的抑菌圈。

1.3实验数据处理

运用SPSS统计软件，对抑菌实验结果进行方差分析；用LSD法对不同抗菌药物及绿茶药物混合物之间有无显著性差异均采进行多重比较。

2实验结果及分析

2.1抗菌药物对大肠杆菌的抑制作用

抑菌圈的直径大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，抑菌圈直径增大表明所用药物对该测试菌的抑制效果增强。培养24h后，观察A、C组的培养皿（图1），可清楚观察到大肠杆菌生长良好，抑菌圈清晰，在含有阿莫西林的A组中，抑菌圈的平均直径为26.0mm；含有青霉素v钾片的c组中，抑菌圈平均直径为16.4mm。阿莫西林和青霉素V钾片对供试的大肠杆菌有较为明显的抑制作用。比较抑菌圈直径大小，阿莫西林对大肠杆菌的抑菌效果更为显著。

2.2绿茶浸出液对抗菌药物抑菌作用的影响

由表1可知，绿茶浸出液与抗菌药物混用的抑菌圈略小于单用抗菌药物形成的抑菌圈，说明绿茶浸出液对阿莫西林、青霉素V钾片两种抗菌药物没有增效作用。

2.3不同抗菌药物及绿茶药物混合物之间显著性差异分析

对实验结果采用SPSS22.0对数据进行显著性差异分析。

由表2可知，A组标准差为1.52，B组标准差为2.41，C组标准差为1.13，D组标准差为0.89，样本数据的可靠性较高。

由表3可知，组间离差平方571.78，组内离差平方和50.95，组间自由度为3，组内自由度为20，组间均方与组内均方比值F值对应的概率值<0.01，各组问的平均值无显著性差异。

根据方差齐次性检验结果，显著性概率p>0.05，说明各组方差在α=0.05水平上没有显著性差异，即方差具有齐次性。

因方差具有齐次性，运用LSD方法进行多重比较，结果见表4。并运用Duncan法进行多重比较，表格5列出在显著水平0.05上的比较结果。

根据SPSS分析结果，滴加阿莫西林悬浮液的A组（即组别1）与滴加阿莫西林和绿茶悬浮液的B组（即组别2）间的显著性为0.932，远大于0.05，不存在显著性差异。滴加青霉素v钾片的C组（即组别3）与滴加青霉素v钾片和绿茶悬浮液的D组（即组别4）间显著性为0.871，远大于0.05，不存在显著性差异。绿茶浸出液对两种抗菌药物均无显著影响。

2.4绿茶浸出液对抗菌药物抑菌作用的敏感性实验

按绿茶浸出液与抗菌药物合用形成的抑菌圈直径与单一抗菌药物的抑菌圈直径比值计算，若比值小于0.7，则属于拮抗作用；若比值大于1.0，则属于协同作用；若比值在0.7～1.0之间或两者抑菌圈均在10mm以下，则兩者互无作用。

据计算，C组与A组的比值为0.98，D组与B组的比值为0.96，说明绿茶浸出液与两种抗菌药物均互无作用。

3结论与分析

大肠杆菌是生活在人和动物肠道中的最主要菌群，对多种抗菌药物敏感，一般使用对革兰氏阴性菌有效的抗菌药物或广谱抗菌药物，但易耐药。而中医认为绿茶具有消毒杀菌的作用，因此本实验采取滤纸片法测定绿茶浸出液对两种常见抗菌药物的影响。研究发现，阿莫西林组与青霉素v钾片对大肠杆菌的抑菌效果有显著差异，添加相同浓度的阿莫西林与青霉素v钾片，青霉素v钾片组形成的抑菌圈直径仅为阿莫西林组的63.08%，说明广谱青霉素对大肠杆菌的抑菌作用比窄谱青霉素强得多。同时经过显著性差异分析，发现绿茶对两种药物的抑菌作用均无显著影响，但比较抑菌圈直径仍存在一定差异，单一添加抗菌药物时的抑菌圈直径均略高于抗菌药物和绿茶滤出液的抑菌圈直径，绿茶在一定程度上影响了抗菌药物的作用。

由于实验材料等因素的限制，本研究未对茶叶的不同成分对抗菌药物抗菌情况的影响进行探究，也未通过定量测定分析绿茶对抗菌药物的作用。此外，不同种类的抗菌药物及选取的供试菌种类可能会对实验结果产生一定的影响。目前已有研究表明，茶叶中的茶多酚是发挥抑菌作用的最主要物质，绿茶提取物中茶多糖、差皂素、茶色素、咖啡因等成分抑菌效果不明显。另有研究表明，当茶多酚的浓度大于0.8g/L甚至是1.0g/L时能够发现某些菌的抑菌圈显著变化，而本实验所得结论是绿茶对消炎药抑菌作用没有显著影响，可能原因是绿茶浓度较低，在后续实验探究中可以改变绿茶浓度或抗菌药物浓度进行进一步的实验探究。

基于高中基本实验操作水平，师生能够完成绿茶对常见抗菌药物抑菌作用的探究实验。在提高学生实验操作技能的同时，培养学生对日常生活中“常识”的批判性思维，激发学生的学习兴趣，在此基础上，学生还能够根据实验结果发散思维，灵活迁移知识切实锻炼学生的科学探究能力。