Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及意义

杨新霞

[摘要] 目的 分析Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及意义。 方法 随机抽取该院自2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相关性肝硬化患者及抽取同时段内来该院实施健康体检的受检者55名作为研究对象；将前者作为观察1组、观察2组，后者作为对照组，针对所有研究对象，均实施相对应的检查，分析血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率。结果 血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率观察1组（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%、观察2组（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%明显高于对照组（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%，差异有统计学意义（P<0.05），且血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率呈正相关性；观察2组患者中肝脏中的α-平滑肌肌动蛋白水平、IL-17mRNA表达水平明显高于对照组，故α-平滑肌肌动蛋白水平与纤维分化期、肝脏炎症水平呈正相关性，（r=0.430、0.660、0.601、0.506，P<0.05）。 结论 Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中发生与发展中发挥着作用。

[关键词] Th17细胞；乙型肝炎病毒；相关性肝病

[中图分类号] R512 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）11（a）-0030-03

[Abstract] Objective To analyze the expression and significance of Th17 cells in hepatitis B virus-associated liver disease. Methods A total of 55 patients with chronic hepatitis B and 55 patients with related cirrhosis who were admitted to the hospital from November 2012 to December 2014 were enrolled. The subjects were treated as the observation group 1 and the observation group 2， and the latter as the control group. The corresponding examinations were performed for all the subjects， and the plasma IL-17 level and the peripheral blood Th17 cell frequency were analyzed. Results Plasma IL-17 levels and peripheral blood Th17 cell frequency were observed in 1 group （21.73±4.66） pg/mL， （2.16±0.40）%， and observation group 2 （32.52±9.58） pg/mL， （2.19±0.33）%， significantly higher than the control group （11.75±3.3） pg/mL， （1.10±0.25）%，the different was statistically significant（P<0.05）， and plasma IL-17 level， peripheral blood Th17 cell frequency was positively correlated； observation group 2 of patients in the liver α - the levels of smooth muscle actin and IL-17 mRNA were significantly higher than those in the control group， so α-smooth muscle actin level was positively correlated with fibrosis stage and liver inflammation level（r=0.430， 0.660， 0.601， 0.506，P<0.05）. Conclusion Th17 cells play a role in the occurrence and development of hepatitis B virus-associated liver disease.

[Key words] Th17 cells； Hepatitis B virus； Related liver diseases

臨床研究表明，细胞介导免疫反应在乙型肝炎病毒感染中发挥着重要作用，特别是病毒特异性的T淋巴细胞反应中，其是控制乙型肝炎病毒感染的关键。而Th17细胞作为T淋巴细胞中的新成员，其以维甲酸相关的孤儿受体γt为特异性转录调节因子而存在，以分泌IL-17、IL-21、IL-22等而命名[1]。该次研究随机选取该院2012年11月—2014年12月收治的55例慢性乙型肝炎、55例相关性肝硬化患者及55名健康体检者为研究对象，分析Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机取该院收治的55例慢性乙型肝炎、55例相关性肝硬化患者及抽取同时段内来该院实施健康体检的受检者55名作为研究对象；将前者作为观察1组、观察2组，后者作为对照组。观察1组男39例、女16例，年龄19～72岁，平均（45.5±10.7）岁。观察2组男36例、女19例，年龄20～71岁，平均（45.0±11.2）岁。对照组男37名，女18名，年龄20～72岁，平均（46.0±10.5）岁。对比分析3组研究对象基线资料，差异无统计学意义（P>0.05）。经该院伦理委员会批准，患者或家属知情同意。

1.2 方法

流式细胞术检测方法：抽取患者清晨空腹静脉血3 mL，将其置入肝素抗凝真空采血管中，取300 μL全血，加入50 ng/mL十四烷酸PMA、0.7 μg/mL莫能霉素（型号BJ-0015-2016）、1 μg/mL离子霉素（美国生产、I-6800-5 mga），进行培养箱孵育5 h，24 h内检测外周血Th17细胞频率。

酶联免疫吸咐法检测方法：血液离心处离后，取离心血浆，将其保存于零下80℃的冰箱内，通过ELISA检测IL-17水平。

荧光定量法检测IL-17mRNA表达情况：取健康研究对象及乙型肝炎病毒患者的肝组织，将其放置于液痰中转移，并保存于-80℃的冰箱内备用，应用逆转录试剂合成cD-NA，待其迅速冰浴后。实施荧光定量PCR，扩增IL-17mRNA[2-3]。

取新鲜肝组织后，将其固定于甲醛溶液中，24 h内将其制作成蜡块，对蜡块连续切片后，进行常规HE染色，在光学显微镜下观察，α-平滑肌肌动蛋白表达情况采用免疫组织化学染色法检测。

1.3 分析指标

分析3组研究对象血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率、α-平滑肌肌动蛋白水平、IL-17mRNA表达水平，并对Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及意义进行分析。

1.4 统计方法

采用SPSS 22.0统计学软件分析数据，计量资料采用（x±s）表示，行t检验，计量资料采用n（%）表示，行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率、IL-17mRNA表达水平

观察1组、观察2组血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 血清学指标、外周血Th17细胞频率相关性分析

分析观察1组、观察2组患者的血浆IL-17与外周血Th17细胞频率发现，以上两个指标呈正相关性，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

乙型肝炎病毒感染在临床疾病治疗上较为常见，随着病情发展，会引起乙型肝炎病毒相关性肝病，如慢性乙型肝炎、相关性肝硬化[4]。临床研究表明[5]，乙型肝炎病毒引起的肝脏损伤与转归情况，与患者机体细胞免疫功能下降、免疫耐受有着密切关系。而淋巴细胞是免疫应答的重要组成部分，其在免疫调节中占据重要作用。目前Th17是临床新发现的一个细胞亚群，其特征为大量分泌IL-17，故Th17在肝脏疾病的发生与发展过程中发挥着重要作用。

Th17细胞会分泌IL-17、IL-21、细胞肿瘤因子等，以上因子会聚集在炎症部位，增加炎症反应，从而加重患者病情。同时IL-17还会引发其它炎细胞因子的出现，增加对组织的损伤程度。在肝脏组织中，通过对Th17、IL-17、IL-17mRNA表达水平的检测发现，在乙型肝炎病毒相关性肝病患者中，以上指标的表达水平，明显要高于健康人群，且Th17与血清学指标呈正相关性[6]。此外，肝纤维化是一种修复过程，临床特征为ECM的过度沉淀与异常增生，当肝纤维处于晚期阶段时，HCS会发挥中心作用，而α-平滑肌肌动蛋白水平又是HCS的标志物，故当肝硬化患者α-平滑肌肌动蛋白水平升高时，患者体内有肝脏炎症与纤维化程度均较高，说明患者肝脏炎症较高且肝脏损伤较严重。由此推断，Th17细胞会参与HCS的激活过程[7]。该次研究显示：血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率观察1组[（21.73±4.66）pg/mL、（2.16±0.40）%]、观察2组[（32.52±9.58）pg/mL、（2.19±0.33）%]明显高于对照组[（11.75±3.3）pg/mL、（1.10±0.25）%]（P<0.05）。是由此，Th17是最重要的效应因子，其在患者体内表达广泛，不仅是重要的促炎因子，还可诱导其它炎细胞因子等进行表达，从而加重炎症细胞的浸润及对组织损伤。该次研究血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率。其与陈梅等人[8]研究结果相似，即相关性肝硬化患者血浆IL-17水平、外周血Th17细胞频率分别为（32.51±9.57）pg/mL、（2.18±0.34）%[8]。

綜上所述，在乙型肝炎病毒相关性肝病的发生与发展过程中，Th17细胞起着重要作用，值得推广。

[参考文献]

[1] 姚思敏，刘映霞，李晓鹤，等.慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞及相关转录因子表达的检测[J].中华实验和临床病毒学杂志，2015，29（1）：2-4.

[2] 李成伟，卢丹，那妍，等.恩替卡韦治疗后e抗原阳性慢性乙型肝炎患者Treg/Th17比率的变化及其与疗效的关系[J].中国医科大学学报，2017，46（1）：33-35，40.

[3] 栗军香，王银茹，李阿静，等.Treg/TH17细胞因子的平衡作用与不同中医症候HBV宫内感染相关性研究[J].海南医学，2016，27（21）：3448-3451.

[4] 刘娇， 王川林，古雪，等.Th17/Treg细胞失衡与乙肝病毒感染相关性肝病的关系[J].川北医学院学报，2017，32（3）：479-482.

[5] 陈端.拉米夫定在慢性乙型肝炎患儿外周血Th17细胞变化的研究[J].检验医学与临床，2016，13（9）：1220-1221.

[6] 袁睿，韦嘉.IL-17/Th17细胞在感染性疾病中的作用研究进展[J].医学综述，2013，19（13）：2322-2324.

[7] 申红玉，杭双熊，钱梅云，等.抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血中Th17细胞及其相关细胞因子的影响[J].实用医学杂志，2016，32（9）：1425-1427.

[8] 陈梅，郭晓云，姜海行，等.Th17细胞在乙型肝炎病毒相关性肝病中的表达及意义[J].重庆医学，2016，45（5）：592-594，59

（收稿日期：2018-08-02）