食品中定量检测金黄色葡萄球菌方法的比较

□ 董彦梓 烟台市食品药品检验检测中心

如何保证食品安全已经成为现阶段社会持续健康发展道路上亟待解决的问题。调查数据显示，仅在2015年第三个季度一个季度中，在所有食物中毒的案例当中，属于微生物性食物中毒的人数就高达43%，其中又有四分之一是由于金黄色葡萄球菌引起的。总而言之，为了尽可能降低食品安全事件出现的概率，就要求相关人员切实关注到金黄色葡萄球菌定量检测。本文立足于实际实验操作，对金黄色葡萄球菌的主要检测方法进行比较研究，以期能对后期检测工作起一定指导作用。

1 金黄色葡萄球菌概述

金黄色葡萄球菌隶属葡萄球菌属，是一种极为重要的病原菌，同时也是典型的革兰氏阳性菌，易产生多种毒素及酶类，使得感染的人或动物出现化脓感染等症状，易引起食物中毒[1]。这种葡萄球菌对于营养的要求不高同时耐盐性较高，肉类、水产品、乳品等常见食品极易受到这种病菌的感染。

2 定量检测方法总述

随着人们对生活质量的要求越来越高，食品质量和安全问题也得到越来越多的关注，金黄色葡萄球菌作为一种极为常见和危害较大的病原菌已经被列为我国食品卫生微生物常规检测项目之一。现阶段对食品中的金黄色葡萄球菌的定量检测常采用传统的Baird-Parker法。由于这种检测方法工序繁琐，需要耗费一定人力物力，国内外很多机构尝试研究新的检测方法以有效缩短检测方法、简化检测程序，美国3M公司的纸片法就是其中之一。而能够快速检测金黄色葡萄球菌的方法还有倾注法等。另外，还有基于分子生物学原理和免疫学原理的行之有效的检测技术，而本文主要通过比较定量检测方法以求能探索出真正适应微生物实验室要求的检测方法，从而为今后的食品快速检测打下坚实的理论基础。

3 定量检测方法比较

3.1 传统检测方法

通过比较涂布法、倾注法及纸片法对含一定浓度的金黄色葡萄球菌菌液的检测效果，可以发现三种方法测出的结果没有明显的差别，具备一致性，但三者当中纸片法测出的结果稳定性最高、有较好的再现性，而倾注法和涂布法的检测效果均略逊于纸片法[2]。在检验食品中金黄葡萄球菌时，纸片法能够检出较多该球菌，而涂布法和倾注法次于纸片法。比较三者的其他指标时不难发现，纸片法与倾注法和涂布法相比，操作更加简单、工作量更为合理、检测时间较短、技术准确性较高，但纸片法的试验成本高于另两种检测方法，这就提高了推广纸片法的难度。诚然，纸片法成本较高，但是在检测结果上，这种快速检测方法与传统的Baird-Parker平板涂布法的检测结果具有高度一致性，同时这种检测技术具有明显优势，具体表现为操作简单、实验工作量小，而这就使得纸片法具有较高的推广意义。

3.2 基于免疫学的检测方法

乳胶凝集法是在免疫学原理指导下的一种快速检测方法，这种方法主要是利用乳胶颗粒对抗体进行标记，等到复合物与待测抗原结合后出现的凝集反应较为明显，便于检测且操作简便、具有较高水平的灵敏度和特异性，且商品化程度较好。而另一种基于免疫学的检测技术——免疫磁性微球是通过磁性微球的特异性对致病菌进行吸附，这种检测法与其他检测手段同时应用能取得较好的快速检测效果，借助免疫磁珠分离结合环介导等温扩增技术检测的方法，可以发现被金黄色葡萄球菌污染的200份奶样中的检测限为5.0 CFU/mL，且检测结果与传统检测方法结果没有明显差异。另外，免疫层析也是基于免疫学原理的一种重要快速检测方法，这种检测方法使待测物在毛细作用中沿着纤维膜表面移动并且与已标记区捕获物进行特异结合、聚集显色从而对其进行定性或定量，免疫层析试纸条就是在该检测技术的基础上形成的，这种试纸条以酶、胶体金、乳胶颗粒和荧光量子点等探针为标记，具有较高实际应用价值。例如：在以胶体金作为探针作出的金葡萄球菌快速检测卡进行检测的过程中，将其与ELISA检测结果进行比较可以发现这种试纸条的检出率高达98.7%。

3.3 基于分子生物学的检测方法

聚合酶链式反应作为一种快速检测技术具备敏感度好、特异性优良、操作便利的优点，这使得其在检测金葡菌中获得了较多应用，其中在用PCR检测牛奶中的金葡菌的实验中，其检测结果证明这种检测方法的灵敏度和阳性检测特异性已经达到100%，充分保证了聚合酶链式反应的可信度。而借助聚合酶链式反应对几种食品中对金葡菌进行检测，能够将检测时间控制在24小时之内，同时检出限为10 CFU/g（mL）。

4 结语

快速检测技术在实际应用过程中具备各自的特点，在发展过程中，各种检测技术势必会不断融合，不断互相影响，从而使得检测技术和方法朝着高速度、高质量、高效率的方向发展，从而切实保证食品质量和安全。