晚期非小细胞肺癌中循环RNA检测对培美曲塞治疗疗效的研究

李桃

（江苏省南通市肿瘤医院肿瘤内科 江苏 南通 226001）

培美曲塞作为一种多靶点抗叶酸药，在晚期NSCLC肺腺癌中取得了较好的疗效，临床中需筛选出培美曲塞优势人群。研究发现，培美曲塞通过以下靶点发挥作用：胸苷酸合成酶（TS）、二氢叶酸还原酶（DHFR）、甘氨酸核糖核苷甲酰基转移酶（GARGT）和氨基咪唑羧酰胺核苷甲酰基转移酶（AICARFT），以上药物的作用位点，可能为本研究提供有效的疗效预后标志[1]。

1.对象与方法

1.1 研究对象

选择100例2016.7-2018.06年南通市肿瘤医院住院的接受培美曲塞治疗的初治晚期NSCLC 患者。组织类型明确，PS0-1分。

1.2 研究方法

1.2.1 化疗方案 100例患者均接受以培美曲塞联合顺铂（cisplatin， DDP）或卡铂（carboplatin，CBP）为主的方案化疗。两周期进行疗效评价，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、稳定（SD）和进展（PD）。如出现CR、PR为对化疗敏感；如为SD或PD，则对化疗不敏感。

1.2.2 基因检测 采用荧光定量PCR方法检测患者化疗前外周血中TS、DHFRmRNA的表达水平。抽取每位受试者的外周静脉血5ml，EDTA抗凝。用淋巴细胞分离液分离出白细胞。按Trizol试剂说明提取总RNA，-80℃保存备用。cDNA合成反应体系：5×逆转录buffer（含有探针）4µl、上游引物（10pmol/µl）0.4µl、下游引物（10pmol/µl）0.4µl、dNTPs（10mmol/µl）0.2µl、逆转录酶（200U/µl）1µl、DEPC 水 9µl、RNA 模板 5µl、总体积20µl。每个样本重复测量3次。分别以2种基因表达的Ct值的平均值作为分界点。另选取同期100例健康体检者外周血作对照。

1.2.3 统计学处理 使用SPSS21统计软件。TS、DHFR基因表达情况与化疗疗效的相关性分析采用卡方检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 循环TSmRNA、DHFRmRNA与NSCLC疗效的关系

NSCLC组血清TSmRNA组的表达为0.88±0.12，对照组的TSmRNA水平为2.23±0.21，血清DHFRmRNA的表达为0.25±0.16，对照组的DHFRmRNA水平为1.23±0.22，NSCLC组的TSmRNA、DHFRmRNA水平低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。100例NSCLC患者无CR，PR 25例，SD 45例，PD 30例。25例化疗敏感者的TS水平为（0.67±0.19）pmol/L，75例化疗抵抗者的TS水平为（1.59±0.18）pmol/L，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。25例化疗敏感者的DHFR 水平为（0.21±0.11）pmol/L，75例化疗抵抗者的DHFR水平为（0.71±0.18）pmol/L，组间差异有统计学意义（P＜0.05） 。

3.讨论

TS是培美曲塞治疗作用机制中的主要靶点，TS表达与培美曲塞的敏感性相关，即TS表达越高，培美曲塞的敏感性越低[2]。TS表达检测需要肺癌组织，其来源相对困难。而培美曲塞的另一个关键靶点，二氢叶酸还原酶基因（DHFR）是生物体内重要的酶，Levy等[3]回顾性研究发现，40例白血病患儿显示DGFR活性与患者预后相关，通常表达活性高的患者预后差。

本研究发现，25例化疗敏感者的DHFR水平为（0.21±0.11）pmol/L，75例化疗抵抗者的DHFR水平为（0.41±0.18）pmol/L，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示外周血循环TS可作为预测应用培美曲塞化疗晚期肺癌患者预后的分子标志，DHFR可能作为近期疗效的预测因子。因此，晚期肺腺癌外周血循环中检测TS及DHFR转录水平对培美曲塞治疗疗效的预测有一定的价值，通过可检测的临床指标，筛选优势人群，使化疗更具针对性。