黑果枸杞继代培养激素种类及浓度的优化

赵明++景全全

摘 要：在初代培养的黑果枸杞基础上，研究继代培养中激素种类、浓度以及茎段长度的不同因素水平下的生长状况，获得最佳组合，为黑果枸杞工厂化育苗提供理论依据与参考。试验结果表明到第30天时平均诱导芽长度以1/2MS+IAA0.05mg/L+2个芽组合最高，达到2.18cm；腋芽诱导率以1/2MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L+2个芽组合最高，达到100%；生根率以1/2MS+IAA0.05mg/L+2个芽组合最高，达到80%；平均生根根量以1/2MS+IAA0.1mg/L+3个芽组合最高，达到3.85条；3根最长根平均根长以1/2MS+IAA0.2mg/L+4个芽组合最高，达到7.84cm。结合试验结果与经济性原则1/2MS+IAA0.05mg/L+2个芽是最佳的继代组合。

关键词：黑果枸杞；继代培养；生长情况

中图分类号：S35 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20171232010

前言

黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）为茄科（Solanaceae）枸杞属多年生落叶灌木，分布于我国陕西北部黄土高原、宁夏、甘肃、青海、内蒙、新疆、西藏、中亚高加索和欧洲等地[1]，叶肉质、无柄簇生于短枝上，浆果球形，果实成熟后紫黑色，有甜味，种子褐色肾形，是一种极其重要的中药材[2]。现代科学研究认为黑果枸杞可以兴奋大脑神经、降低胆固醇、增强免疫功能、防治癌症、抗衰老和美容、对人体生命健康非常有益。黑果枸杞提取物也可促进细胞免疫功能、增强淋巴细胞的增殖能力、促进肿瘤坏死因子的生成，对白细胞介素Ⅱ有双向调解作用[3]。黑果枸杞多糖、黄酮和多酚具有抗氧化活性、对线粒体具有保护作用[4]。其果实中含有大量的紫红色素，是非常珍稀的天然花色苷类色素资源。黑果枸杞是迄今为止发现的原花青素含量最高的天然野生植物，远超蓝莓等植物，而原花青素是最有效的天然水溶性自由基清除剂，其功能效果是维生素E的50倍、维生素C的20倍[5，6]。

黑果枸杞在盐渍化和次生盐渍化土壤上大量分布，常构成盐爪爪（Kalidium foliatum）——黑果枸杞盐生植物群落[7]。野生黑果枸杞适应性很强，能忍受38.5℃高温，且在-25.6℃下无冻害[8]，为较耐旱树种，土壤水合补偿点为3.81%[9]，是一种典型的储盐植物，也是荒漠化地区特别是盐碱化土地恢复植被的备选植物之一[10] 。黑果枸杞价格昂贵，市场需求量大，在巨大经济利益驱使下，人们开始大量采集野生黑果枸杞，使得野生黑果枸杞的资源正遭受着巨大的开采压力，导致黑果枸杞野生资源的分布区域正在迅速减小，植被退化严重[11]。黑果枸杞播种育苗容易造成性状退化[12]，因此组织培养是保留优良种性，提高繁殖效率的一条重要途径。但黑果枸杞继代培养报道较少，所以本研究有重要的价值。本实验在初代培养的基础上，研究激素种类、浓度以及接种茎段长度3个因素在不同水平下黑果枸杞生长状况，通过诱导芽长度、腋芽诱导率、生根率、平均生根数量、3根最长根平均根长等指标的测定获得继代培养最佳组合，为工厂化育苗提供一定的理论依据和参考。

1 材料与方法

1.1 供试材料

实验于2015年10—12月进行，供试材料为黑果枸杞初代培养的试管苗，种源来自于甘肃民勤。选择初代培养基中长势健康良好、无玻璃化黑果枸杞茎段作为接种材料。

1.2 仪器设备

移液枪、锥形瓶、容量瓶、量筒、棉塞、玻璃棒、烧杯、超净工作台、电子天平、镊子、剪刀、高压灭菌锅等。

1.3 供试药剂

6-芐氨基嘌呤（6-BA）、吲哚-3-乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、盐酸（HCl）、琼脂、75%酒精、蔗糖、氢氧化钠（NaOH）和蒸馏水等。

1.4 试验设计

以MS培养基[13] 为基础培养基，添加蔗糖15g/L、琼脂4g/L，pH为5.8。将制作好的培养液加入到150mL三角瓶中，每瓶加入50mL，用棉塞塞紧瓶口，并置于灭菌锅中，在1.05kg/cm2、121℃下高温灭菌20min，让其自然冷至室温，第2天进行接种。每组接种10瓶，3个重复。将接种好的试管苗置与室温条件进行培养。

试验中用到的统计内容主要的计算方法为：

平均诱导芽长度=各个诱导芽长度之和/诱导芽个数；

腋芽诱导率=诱导出芽腋的个数/接种的腋芽总个数；

生根率=生根瓶数/接种瓶数；

平均生根数量=各瓶生根个数之和/生根瓶数；

3根最长根平均根长=各个生根瓶里最长3根根长之和/生根瓶数。

1.4.1 单因素试验

根据马和平等[14]已有研究，采用1/2MS培养基（与MS培养基相比大量元素含量减半，微量元素、有机成分与铁盐含量不变）。在培养基中仅以添加3种IAA、IBA、NAA激素为试验因子，激素浓度为0.05mg/L。并结合杨宁等[15]研究结果，接种茎段长度为1.5～2cm左右。30d时测得芽生长长度、生根率、生根数量及3根最长根平均根长生长指标差异，从中选出最佳激素类型。

1.4.2 正交试验

运用正交试验，采用1/2MS培养基，在培养基中添加6-BA（0、0.5、1mg/L）、单因素试验中最佳激素（0.05、0.1、0.2mg/L）及芽量（2、3、4个）为试验因子，如表1。30d时测得芽生长长度、腋芽诱导率、生根率、生根数量及3根最长根平均根长生长指标差异，从中选出最佳组合。

1.5 数据分析

用Excel 2003和正交试验II进行数据分析处理。

2 结果与分析

2.1 单因素试验与分析