高效液相色谱法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果

王长琴

（南京中医药大学连云港附属医院，江苏 连云港 222000）

高效液相色谱法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果

王长琴

（南京中医药大学连云港附属医院，江苏 连云港 222000）

目的：探讨高效液相色谱法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果。方法：选用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱（规格：4.6 mm×250 mm，5 μm）对参芪麻蓉协定方中太子参环肽B的含量进行色谱分析，以乙腈－水（30∶70）作为流动相。色谱仪参数设置：流速为1.00 mL·min-1，柱温为35 ℃，检测波长为203 nm，进样量为20.0 μL。分析结束后，观察样品中太子参环肽B的含量。结果：太子参环肽B在2.074～41.48 μg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.9997），平均加样回收率为100.6%(n=5),RSD为1.1%。结论：高效液相色谱法可作为参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量的质控与评价方法。

参芪麻蓉汤；高效液相色谱法；太子参环肽B

参芪麻蓉协定方是南京中医药大学连云港附属医院的特色方剂。此方由太子参、黄芪、火麻仁、肉苁蓉等组成，具有良好的益气养血、润肠通便的功效。太子参为方中君药，其主要活性成分为太子参环肽B[1-2]。本研究采用高效液相色谱法对参芪麻蓉协定方中太子参环肽B的含量进行测定，旨在探讨该方法在测定参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量中的应用效果。

1 仪器与试剂

1.1 检测仪器

本研究所用的检测仪器主要包括：Agilent 1200液相色谱仪；Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱（规格：4.6 mm×250 mm，5 μm）；Agilent 1200紫外检测器；BP211D型电子天平（由德国赛多利斯天平有限公司生产，d=0.01 mg）；KQ-600DV型数控超声波清洗器（由昆山市超声仪器有限公司生产）。

1.2 检测试剂

本研究所用的检测试剂主要包括：太子参环肽B对照品（由武汉天植生物技术有限公司生产，批号：CFN90627，纯度：≥98%）；参芪麻蓉协定方（院内配方）；乙腈(色谱纯，由美国Fisher公司生产)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

选用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱（规格：4.6 mm×250 mm，5 μm）对参芪麻蓉协定方中太子参环肽B的含量进行色谱分析，以乙腈－水（30∶70）作为流动相。色谱仪参数设置：流速为1.00 mL·min-1，柱温为35 ℃，检测波长为203 nm，进样量为20.0 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液的制备 精密称取太子参环肽B对照品10.37 mg，置于10 mL的量瓶中，加甲醇对其进行溶解，并将其稀释至刻度线，摇匀后作为对照品储备液（浓度为1.037 mg·mL-1）待用。

2.2.2 供试品溶液的制备 取参芪麻蓉协定方235 g，加水200 mL，煎煮3次后合并滤液并浓缩至250 mL。取浓缩液20 mL，用30 mL的甲醇对其进行提取，重复提取3次后合并提取液。旋蒸回收提取液至溶剂挥发完全。用甲醇溶解残渣，并将其转移至10 mL的量瓶中，定容至刻度，摇匀即得。

2.3 线性关系的考察

精密吸取标准品溶液1 mL，置于25 mL的量瓶中，用甲醇溶液定容至刻度并将其摇匀。精密吸取1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、20 μL的标准品溶液，并将其注入液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。所得线性回归方程为：Y＝41.962X+5.957，r=0.9997。实验结果表明，太子参环肽B在2.074～41.48 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度实验

精密吸取同一份供试品溶液20 μL，重复进样5次，测得峰面积的RSD为0.74%。实验结果表明仪器的精密度良好。

2.5 重复性实验

取同一份样品5份，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，测定峰面积并计算其中太子参环肽B的含量，然后以太子参环肽B的含量计算RSD。实验结果显示：RSD为0.86%。实验结果表明本实验具有可重复性。

2.6 稳定性实验

取同一份样品，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，分别于制备后0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、32 h测定峰面积。实验结果显示：峰面积的RSD为1.68%。实验结果表明供试品溶液在制备后32 h内的稳定性良好。

2.7 加样回收率实验

精密称取同一份样品5份（各1.0 g），加入一定量的对照品溶液，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件测定太子参环肽B的回收率与RSD。实验结果显示，太子参环肽 B的平均加样回收率为100.6%(n=5),RSD为1.1%。详见表1。

表1 太子参环肽B加样回收试验结果的分析(n=5)

2.8 样品测定

精密吸取供试品溶液20.0 μL，注入液相色谱仪中，按“2.1”项下的色谱条件，采用外标法对供试品溶液中太子参环肽B的含量进行测定。根据线性关系计算样品中太子参环肽B的含量为32.663 μg/μL。详见图1。

图1：供试品溶液（参芪麻蓉协定方溶液）的HPLC图1太子参环肽B

3 讨论

参芪麻蓉协定方是南京中医药大学连云港附属医院研制的特色方剂，适用于治疗气血两亏、肠燥津亏型慢性功能性便秘。此方由太子参、黄芪、当归、火麻仁、肉苁蓉、桃仁、石斛、陈皮、枳壳等药物组成。方中的太子参味甘，微苦，性平，可入脾经肺经，具有益气健脾、生津润肺的功效；黄芪和当归味甘，性温，二者共用可气血并补；火麻仁、肉苁蓉、桃仁味甘，质润，三者共用可润肠通便；石斛可养阴生津、增水行舟；陈皮、枳壳可行气导滞。上述诸药合用可共奏益气补血、润肠通便之功。有研究表明[3-4]，太子参的主要活性成分为太子参环肽B。廖芳平[5]等在临床研究中发现，太子参在不同柱温条件下的HPLC 图谱无明显差异。在本次研究中，笔者采用高效液相色谱法对参芪麻蓉协定方中太子参环肽B的含量进行测定。研究结果显示，太子参环肽B在2.074～41.48 μg/mL范围内呈良好的线性关系（r=0.9997），平均加样回收率为100.6%(n=5),RSD为1.1%。

综上所述，高效液相色谱法具有操作简单、实验结果稳定等优点，可作为参芪麻蓉协定方中太子参环肽B含量的质控与评价方法。

[1] 徐雪琴,龙全江,赵剑.太子参化学成分、药理作用与产地加工技术研究[J].现代中药研究与实践,2014,28(4): 73-75.

[2] 王媚,宋建平,韩乐,等.太子参环肽B含量分析及其动态研究[J].中药材,2010,33(8):1225-1227.

[3] 韩怡,巢建国,谷巍,等.不同产地太子参环肽B含量测定[J].现代中药研究与实践,2012,26(5):69-71.

[4] 杨昌贵,周涛,肖承鸿,等.不同种源太子参生物量与太子参环肽B含量的分析[J].贵阳中医学院学报,2014,36(1):14-16.

[5] 廖芳平,吴锦忠,陈剑锋,等. 柘荣太子参HPLC指纹图谱的研究[J].中国野生植物资源,2006,25(5):39-43.

R917

B

2095-7629-（2017）20-0153-02

王长琴，女，1986年1月出生，汉族，江苏连云港人，本科学历，学士学位，主管中药师，主要从事中药学相关工作