精子DNA损伤对体外受精-胚胎移植助孕结局的影响分析

孙 娟，王 磊，张小玉，刘诗雅

（山东省枣庄市妇幼保健院，山东 枣庄 277100）

精子DNA损伤对体外受精-胚胎移植助孕结局的影响分析

孙 娟，王 磊，张小玉，刘诗雅

（山东省枣庄市妇幼保健院，山东 枣庄 277100）

目的 分析精子DNA损伤对体外受精-胚胎移植助孕结局的影响。方法 选择2016年2月～2017年2月在我院接受体外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例，收集其资料进行回顾性分析，按照精子损伤是否超过25%，分成精子DNA损伤组（观察组）125例，未损伤组（对照组）230例，分析组间受精、可移植胚胎、优质胚胎、妊娠及流产情况。结果 观察组精子浓度、活力、正常形态精子率、受精率、可移植胚胎率、优质胚胎率等检测指标均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组妊娠率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），而流产率则高于对照组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 精子DNA损伤能够对体外受精-胚胎移植助孕结局造成一定负面影响，因此加强精子DNA损伤的检测，有助于预测体外受精-胚胎移植助孕结局。

精子DNA损伤；体外受精-胚胎移植；助孕结局

近年来，随着生活压力的增大，环境的污染及高龄夫妇越来越多，导致不孕不育的夫妇越来越多。因此，越来越多的夫妇采取体外受精-胚胎移植技术助孕。据文献报道，其中因男性因素引起的不孕不育症约占20%，另外大约30%与夫妻双方有关，因此和男性因素相关的不育症比例达到了50%，临床上对于男性不育也越来越重视。而传统的精液常规检查不能对精子的受精能力及男性的生育能力进行准确的评价。精子DNA损伤作为一项新的评价受精能力和生育能力的指标，从基因学的角度为男性不育症的研究做出了创新[1]。理想的精液质量评估不仅要达到预测是否能自然受孕，而且还能指导选择何种辅助生殖技术（ assisted reproductive technology，ART），并评估生殖结局[2-3]。目前临床上通过检测DNA断裂指数（DNA fracture index，DFI）评价精子DNA损伤程度。本次研究选择2016年2月-2017年2月在我院接受体外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例作为研究对象，按照精子损伤是否超过25%，分成精子DNA损伤组（观察组），未损伤组（对照组），分析关于精子常规参数等指标及体外受精-胚胎移植助孕结局等方面数据组间差异，以期用于指导临床。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究选择2016年2月～2017年2月在我院接受体外受精-胚胎移植助孕的男性患者355例作为研究对象，按照DFI是否超过25%，分成精子DNA损伤组（观察组）125例，未损伤组（对照组）230例。观察组125例，年龄22～38岁，年龄平均（30.59±6.84）岁；女方125例，年龄23～34岁，年龄平均（30.83±2.02）岁。对照组230例，年龄22-39岁，年龄平均（31.02±7.38）岁；女方230例，年龄25～34岁，年龄平均（30.54±2.93）岁。纳入标准：（1）促排卵方案为达必佳短效长方案；（2）授精方式为IVF授精；（3）新鲜周期均移植；（4）夫妇双方染色体核型正常。为排除女方的卵子质量对实验结果造成影响，本次研究女方的纳入标准为：（1）年龄＜35岁，BMI：18～25 kg/m2；（2）单纯输卵管因素行辅助生殖技术；（3）双侧卵巢窦卵泡数＞7枚。排除标准：（1）多囊卵巢综合征；（2）子宫内膜异位症；（3）子宫畸形及宫腔粘连；（4）一侧或双侧输卵管积水。男方的纳入标准为：（1）年龄＜40岁；（2）精液常规检查提示正常。排除标准：外生殖器及输精管异常者。此外，夫妇双方均无全身系统及传染性疾病及未接触有毒化学物质和放射线。

1.2 方法

1.2.1 DFI检测方法（SCD法）

PBS调整精子浓度至500～1000万/mL，将30 μL低熔点琼脂糖管加入30 μL精液样本，于37℃水浴中备用；将琼脂糖精液20 μL加到预处理载玻片上，放入4℃冰箱中5 min；然后于变性液中反应7 min；取出后于裂解液中反应20 min；取出后置于蒸馏水中5 min后，于70%，90%、100%的乙醇溶液中保持2 min后取出晾干；蒸馏水冲洗玻片晾干；最后在光学显微镜下观察200个精子的涂片形态。DFI=（小光晕精子数+无光晕精子数+退化精子数）/200×100%。

1.2.2 IVF-ET术助孕方法

所有患者均采用达必佳短效长方案促排卵，均于排卵一周后每天皮下注射短效醋酸曲普瑞林注射液（Ferring GmbH公司）0.1mg，7天后改为每天0.05mg，直至HCG日降调节，降调节14天后根据卵泡数目及激素水平给予重组促卵泡素β注射液（ N.V.Organon公司）和尿促性腺激素（HMG，丽珠集团） 至HCG日。注射HCG后34-36小时行全麻下取卵术，术后第3天移植2枚胚胎，移植后给予黄体支持（黄体酮软胶囊200mg pv tid联合地屈孕酮20mg po qd）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以百分数（%），例（n）表示，采用x2检验；计量资料以“±s”表示，采用t检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 基本资料分析

两组患者女方年龄、基础FSH、双侧卵巢窦卵泡数、获卵数比较，差异无统计学统计学意义（P＞0.05），见表1。

两组患者男方年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组精子浓度、活力、正常行态精子率均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

观察组患者受精率、可移植胚胎率，优胚率低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

观察组患者妊娠率低于对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；流产率高于对照组患者，有统计学差异，见表4。

表1 两组患者女方年龄、基础FSH、双侧卵巢窦卵泡数、获卵数（s）

表1 两组患者女方年龄、基础FSH、双侧卵巢窦卵泡数、获卵数（s）

项目 观察组（n=125） 对照组（n=230） P女方年龄 30.83±2.02 30.54±2.93 ＞0.05基础FSH 6.12±1.21 6.03±1.54 ＞0.05双侧卵巢窦卵泡数 12.03±3.65 13.12±4.91 ＞0.05获卵数 9.13±2.93 8.96±3.29 ＞0.05

表2 男方年龄，精子浓度、活力、正常行态精子率（x±s）

表3 两组患者受精率、可移植胚胎率，优胚率比较±s）

表3 两组患者受精率、可移植胚胎率，优胚率比较±s）

组别 受精率（%） 可移植胚胎率（%） 优胚率（%）观察组 77.2±32.3 55.67±32.22 32.67±23.22对照组 82.4±32.1 64.63±31.54 38.67±21.34 P 0.03 0.002 0.001

表4 两组围产儿存活及流产情况比较

3 讨 论

精液分析包括精子活性、精子浓度以及精子外在形态等方面的检测，能够大约评价受检男性的生殖能力，但检测并不全面[4]，因此近几年来，精液分析技术一直在不断发展。尤其是二胎政策的来临，对生殖医学要求的检测水平及诊疗服务逐渐提高，对精子DNA损伤及完整性的重视度日益提升。精子DNA损伤及完整性与男性生殖能力、女性受孕情况以及辅助生殖技术的助孕结局有关，现已成为相关领域的研究重点课题，比如SCD实验是目前检查精子DNA损伤的典型方法，对于精子DNA的检查效果较好[5]。

由于胚胎质量与男女双方均有关系，本次研究对象中男女患者均纳入，为突出研究DNA损伤对胚胎质量的影响，本研究对女性入选标准严格。本次研究中，观察组精子浓度、活力、正常形态精子率、可移植胚胎率、优质胚胎率等检测指标均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；且观察组妊娠率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；而观察组流产率高于对照组。造成这种情况的可能性原因是精子DNA受到损伤后，其基因编码改变，导致ATP无法正常释放能量，进而造成精子活性降低，而且观察组精子浓度、正常形体精子率均降低，提示可将精子DNA损伤作为检测男性生殖能力的指标之一；观察组受精率低于对照组的可能性原因在于精子DNA受损后导致其染色质原核形成受到阻碍，或难以穿越透明带，无法与卵子结合，或自我修复能力比较受限[6]。但精子DNA损伤与妊娠率、流产等情况的关系存在较大争议，需进一步研究。

综上所述，降低精子DNA损伤有可能提高IVF-ET术助孕成功率。因此，如何降低精子DNA损伤势在必行。生殖道炎症、睾丸部高温、精索静脉曲张、吸烟、环境因素、药物与放疗、化疗均可引起精子DNA损伤。因此，对于精子DNA损伤的治疗可通过查找病因对症治疗，同时辅助抗氧化药物[7]。此外，对于精子DNA损伤高的患者行ICSI-ET术是否有助于助孕结局尚需探讨。

[1] 江瑶瑶,曾向阳,孙建明.精子DNA损伤在男性不育症中的研究进展[J].现代泌尿外科杂志,2014,19(6):419-422.

[2] Garrido N,Remohí J,Martínez-Conejero JA,et al．Contribution of sperm molecular features to embryo quality and assisted reproduction success[J].Reprod Biomed Online,2008,17(6):855-865.

[3] 李志凌,刘容菊.精子DNA完整性及对辅助生殖技术治疗结局的影响生殖与避孕[J].2006,26(6):433－437.

[4] 孙波澜,邹红艳,彭南妮.精子DNA损伤对试管婴儿助孕结局的影响探讨[J].黑龙江医学,2014,38(6):630-631.

[5] 黄剑磊,贺 晓,吴 静,等.男性不育症患者精子畸形率及DNA完整性对辅助生殖技术助孕结局的影响[J].中国临床医生杂志,2016,44(12):86-89.

Effects of sperm DNA fragmentation on outcome of IVF-ET

SUN Juan, WANG Lei, ZHANG Xiao-yu, LIU Shi-ya
(Zaozhuang maternal and child health care hospital,Shandong Zaozhuang 277100,China)

Objective To investigate the effect of sperm DNA fragmentation index on the pregnancy outcome after in vitro fertilization (IVF) procedure.Methods We selected 355 male patients who underwent conventional IVF-ET in our hospital between 2016.2 and 2017.2.A retrospective analysis was performed with collected data. Patients were divided into sperm DNA damage group (observation group) 125 cases, non-damage group (control group) 230 cases according to the sperm DNA fragmentation index was/wasnot more than25%.Fertilization rate, the number of transferable embryos,high-quality embryo rate,pregnancy rate and abortion rate were recorded for statistics analysis.Results The observation group in sperm concentration, motility, normal sperm morphology rate, fertilization rate, detection index of embryo transfer rate and good quality embryos rate were lower than the control group, the difference was statistically significant (P＜0.05); pregnancy rate in observation group than in the control group, the difference was statistically significant (P＜0.05), while the abortion rate is higher the control group was statistically significant (P＜0.05).Conclusion Sperm DNA damage may have some negative effects on the outcome of IVF, thus the detection of sperm DNA fragmentation index is conducive to predicting the outcome of IVF.

Sperm DNA fragmentation;in vitro fertilization-embryo transfer;pregnancy outcome

R321

B

ISSN.2095-6681.2017.32.188.03

李 豆