激活素A及激活素结合蛋白用于脑血管病治疗前后的变化

王 敏 李岩松 郑 军

激活素A及激活素结合蛋白用于脑血管病治疗前后的变化

王 敏 李岩松 郑 军

目的探讨激活素A及激活素结合蛋白用于脑血管病患者治疗前后的变化。方法选取中国人民解放军第四六三医院2015年2月至2017年4月60例脑血管病患者作为研究对象，平均分为两组，A组为30例脑梗死患者，B组为30例脑出血患者，另外同期抽取30名健康志愿者作为对照组（C组）。A、B两组均根据患者个体情况给予相应对症治疗，两组患者治疗前后和C组健康志愿者均于晨起空腹抽取外周静脉血，离心处理后进行放射免疫法测定激活素A水平，双抗体夹心酶法联合免疫吸附试验测定激活素结合蛋白水平，并进行比较分析。结果B组患者治疗前外周血激活素A和激活素结合蛋白与C组比较均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01），治疗后与C组相比均明显下降，差异无统计学意义（P＞0.05）；A组患者治疗前外周血激活素A与C组对比明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01），但外周血激活素结合蛋白与C组相比较升高不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），治疗后外周血激活素A及外周血激活素结合蛋白水平与C组对比均显著下降，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论外周血激活素A及激活素结合蛋白在脑出血患者中表达均处于明显升高状态，治疗后均恢复正常，而脑梗死患者仅外周血激活素A显著升高，治疗后可恢复正常。

激活素A；激活素结合蛋白；脑出血；脑梗死

激活素是一种双链糖蛋白，能够促进垂体前叶腺细胞促性腺激素分泌，且对胚胎发育和细胞分化具有较大功效[1]。激活素结合蛋白则是一种从猪和牛卵泡液中分离出来的单恋糖蛋白，其大面积分布着分泌性腺激素的抑制因子，不但可以抑制垂体前叶腺细胞促性腺激素，还能与激活素发生特异性结合，阻断与其受体作用，达到抑制激活素所有的生物学作用效果。据相关研究显示[2-3]，激活素与其进行特异结合在丘脑、胎盘、肾上腺以及卵巢等中均有表达，外周血上也可检测到有关蛋白。还有研究指出[4]，脑血管患者具有明显的内分泌和免疫功能的变化，但这些变化与激活素A及其结合蛋白有无联系至今未能清楚阐明。本研究结合60例脑血管病患者和30名志愿者参与激活素A及激活素结合蛋白水平变化进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2015年2月至2017年4月中国人民解放军第四六三医院收治的60例脑血管病患者作为研究对象。其中，30例脑梗死患者列为A组，男16例，女14例，平均年龄（50.4±2.6）岁，梗死部位：腔隙性梗死12例，丘脑梗死11例，双侧额叶梗死7例；30例脑出血患者列为B组，男17例，女13例，平均年龄（51.6±3.1）岁，出血部位：脑叶出血13例，丘脑出血11例，脑桥出血6例；同期选取该院30例健康志愿者为C组，男15例，女15例，平均年龄（50.9±2.8）岁。三组性别、年龄构成资料差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法脑梗死患者需戒烟限酒，调整不良的生活饮食方式；控制血压、血糖，调脂；还需给予溶栓、抗血小板聚集及抗凝药物治疗，必要时给予血管内介入和手术等特殊治疗。脑出血患者需安静卧床、保证呼吸道通畅；脱水降颅压，调整血压、血糖；维持水电解质平衡，给予营养支持和康复治疗；同时依据患者的具体症状给予镇静、止痛处理，必要时行手术治疗。A、B两组患者治疗前后及C组健康志愿者均于晨起空腹抽取外周静脉血4 ml，经过10 min的离心后，置于-20 ℃保存待测，放射免疫法测定激活素A水平，双抗体夹心酶法联合免疫吸附试验测定激活素结合蛋白水平。

1.2.1 外周血激活素A免疫测定取pH 8.0硼酸盐缓冲液1:1000倍稀释兔抗激活素A多克隆抗体（0.05 mol/L），置于免测定管中加入稀释的抗激活素A抗体100 ml/管以及125Ⅰ标记激活素A（10 000 cpm/管），再加入4 ℃孵育过夜的待测血清或标准激活素A（0～6400 ng/L）100 ml/管，每孔加入200 ml/管羊抗兔IgG抗体（1:100），需6 h继续孵育，加入6%聚乙二醇（PEG）500 ml/管，离心30 min，弃上清。

1.2.2 外周血激活素结合蛋白免疫吸附试验取pH 9.6碳酸盐缓冲液稀释鼠抗激活素结合蛋白单克隆抗体至2.5 mg/L（0.05 mol/L），每孔100 ml包被酶标板，4 ℃过夜，洗液洗板1次，再加入血清蛋白（BSA）于40 ℃封闭1 h（20 g/L），且洗板1次；每孔加入0.25～16 ng/ml标准激活素结合蛋白100 ml或血清样本，40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加100 ml兔抗激活素结合蛋白多克隆抗体（1:800），40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加入100 ml辣根过氧化物酶（HRP）标记羊抗兔IgG抗体（1:1000），40 ℃孵育1 h；洗板3次，每孔加入邻苯二胺（OPD）底物缓冲液100 ml，需室温避光显色5 min，每孔加2 mol/L H2SO4中止反应。

1.3 观察指标观察三组研究对象治疗前后外周血激活素A水平和外周血激活素结合蛋白水平。

1.4 统计学分析采用SPSS 18.0统计软件处理研究所得数据，计数资料（例数）用百分率表示，进行χ2检验，用±s表示计量资料（平均年龄、外周血激活素A水平、外周血激活素结合蛋白水平），并实施t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血激活素A水平比较A、B两组患者治疗前外周血激活素A与C组相比明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01），治疗后外周血激活素A水平均明显下降，与C组相比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 各组患者外周血激活素A水平比较(μg/L,±s)

表1 各组患者外周血激活素A水平比较(μg/L,±s)

组别 例数治疗前 治疗后 t值 P值C组 301.86±0.21 1.86±0.21 - -B组 305.81±1.37 1.97±0.31 14.9740.000 A组 303.28±0.61 2.01±0.31 10.1660.000 tCB/CA/AB值 15.610/12.056/9.240 1.609/2.194/0.500 PCB/CA/AB值 0.000/0.000/0.000 0.113/0.032/0.619

2.2 外周血激活素结合蛋白水平比较B组患者治疗前外周血激活素结合蛋白与C组相比明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01），而A组患者外周血激活素结合蛋白与C组相比升高不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组患者治疗后外周血激活素结合蛋白水平与C组相比均明显下降，差异无统计学意义（P＞0.05）；见表2。

3 讨论

激活素于1986年首次从猪卵泡液中成功分离出来，其具有双链糖蛋白，可以刺激垂体前叶腺细胞，从而促进性腺激素分泌，其具有调节胚胎发育、细胞分化等作用。针对激活素结合蛋白而言，于1987年成功得到分离（猪与牛卵泡液中），是一种促性腺激素分泌抑制因子，有着广泛的组织分布，此蛋白除了对垂体前叶腺细胞分泌促性腺激素具有直接抑制作用外，还能特异性结合激活素，具有阻断激活素的效能，进而与激活素的生物学活性形成中和效应[5]。既往研究可知[6]，激活素及其所持有的特异性结合蛋白，能够表达于多种组织中，比如卵巢、肾上腺、下丘脑、胎盘、垂体等，而在机体外周血中，同样能够检测出相关蛋白。前期试验指出[7]，脑梗死患者与脑出血患者的内分泌变化明显，而且还存在显著的免疫功能改变，此种变化与激活素A、激活素结合蛋白有关。

表2 各组患者外周血激活素结合蛋白水平比较(μg/L,±s)

表2 各组患者外周血激活素结合蛋白水平比较(μg/L,±s)

组别 例数 治疗前 治疗后 t值 P值C组 30 5.03±0.41 5.03±0.41 - -B组 30 8.19±1.22 5.01±0.17 14.1400.000 A组 30 5.19±0.20 4.98±0.13 4.8220.000 tCB/CA/AB值 13.448/1.921/8.609 0.247/0.637/0.768 PCB/CA/AB值 0.000/0.060/0.000 0.806/0.527/0.446

激活素属于多功能生长、分化因子，乃是转化生长因子b（TGF-b）超家族成员之一，由二硫键链接的bA、bB两个亚基构成，分子形式包括激活素B（bBbB）、激活素A（bAbA）与激活素AB（由同源二聚体构聚体bA、bB组成）三种。激活素A为其中一种分子形式，也称为免疫抑制因子P，与激活素B及激活素AB有着相似的生物学活性，都具有促进垂体前叶腺细胞分泌促性腺激素作用，但由于激活素B活性较弱，一般临床研究采用激活素A比较多；激活素A不仅具有诱导B淋巴细胞凋亡的作用，而且还具有抑制巨噬细胞活性的作用。以往研究显示[8]，激活素A与激活素结合蛋白在人体外周血存在表达，但两者脑血管疾病中产生的作用及规律尚无明确指示，其是否能够帮助脑血管疾病患者增进免疫功能还有待研究。本研究为更好地观察激活素A及其结合蛋白在脑血管疾病中的变化状态，采用放射免疫检测法对脑出血、脑梗死患者以及健康志愿者作出对比研究。王敬磊等[4]曾在研究中提到，激活素A对冠状动脉粥样硬化性心脏病具有一定预测意义，可能与斑块稳定与否有关，笔者主要针对此观点展开激活素A对脑血管疾病的研究，结果显示，脑出血患者治疗前外周血激活素A及其结合蛋白与健康志愿者相比均明显升高，治疗后与C组对比明显下降；而脑梗死患者治疗前外周血激活素A与健康志愿者相比明显升高，但外周血激活素结合蛋白升高不明显，治疗后外周血激活素A及激活素结合蛋白水平与健康志愿者相比均显著下降。提示，脑梗死患者外周血激活素A及其结合蛋白水平变化不如脑出血患者变化明显，而两者经过针对性治疗后激活素A与其结合蛋白均恢复正常指标。李力敏[9]等也曾在研究中提到，脑出血患者相比其他脑血管疾病患者的细胞免疫功能明显较低。与本研究结果基本相似。

综上所述，外周血激活素A及激活素结合蛋白在脑出血患者中表达均处于明显升高状态，治疗后均恢复正常，而脑梗死患者仅外周血激活素A显著升高，治疗后可恢复正常。

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10.12010/j.issn.1673-5846.2017.12.018

中国人民解放军第四六三医院，辽宁沈阳 110042

郑军，E-mail：1214393128@qq.com