益气温阳补肾法对甲状腺功能减退症大鼠肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ影响的实验研究*

许继文 张晓昀 蔡萧君 王 涛

（黑龙江中医药大学·哈尔滨 150040）

·方药研究·

益气温阳补肾法对甲状腺功能减退症大鼠肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ影响的实验研究*

许继文 张晓昀**蔡萧君 王 涛

（黑龙江中医药大学·哈尔滨 150040）

目的：探究益气温阳补肾法对甲减模型大鼠血清TNF-α、IFN-γ的调节作用。方法：60只Wistar大鼠，随机抽取10只为空白组，雌雄各半，其余50只予0.1%PTU生理盐水溶液灌胃建造大鼠甲减模型。15天后检测甲功，FT3、FT4水平低于空白组，TSH＞10uIU/ml为造模成功。将50只甲减模型大鼠随机分为模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组，每组10只，雌雄各半，予相应药物治疗12周后，腹主动脉取血，检测血清FT3、FT4 、TSH、TNF-α、IFN-γ水平。结果：治疗后，与模型组相比，各治疗组FT3、FT4水平上升，TSH水平下降（p＜0.05），仅中药中、高剂量组TNF-α水平低于模型组（p＜0.05），西药及中药各剂量组IFN-γ水平低于模型组（p＜0.05），但中药中、高剂量组IFN-γ水平较西药组更低（p＜0.05）。结论：益气温阳补肾法可以改善甲减模型大鼠的甲状腺功能，调节TNF-α、IFN-γ水平，但需要较高剂量。

甲减 益气温阳补肾法 甲状腺激素 TNF-α IFN-γ

中医学根据甲状腺功能减退症（简称甲减）的临床表现，将其归为“虚劳”、“痰饮”“水肿”范畴，历代医家认为其病因责之先天禀赋不足、胞胎失养，或由后天积劳内伤、久病失治，加之饮食不节、情志不遂所致，其病机为心、脾、肾各脏阳气不足[1-2]，本研究团队根据临床中所遇实际病例，概括甲减的病机主要为脾肾阳虚，阳气推动、气化作用减弱，因虚致实，痰浊、瘀血等病理产物堆积，进而形成甲减本虚标实的临床症状。现代医学研究发现细胞因子广泛地参与到下丘脑-垂体-甲状腺轴的调控中，病理条件下，严密的细胞因子网络被破坏，但有关其变化方向及治疗后效应的证据较少。针对甲减脾肾阳虚的基本病机，采用益气温阳补肾，兼以活血化瘀之法，组方芪桂颗粒用于治疗甲减，在临床中取得良好的效果。本实验旨在观察益气温阳补肾法对甲减模型大鼠甲状腺功能及细胞因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）水平的影响，现报道如下。

1 材料

1.1 动物

清洁级Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重200±20g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司购入，许可证号SCXK（吉）031-0027，适应性饲养一周。

1.2 药物与试剂

芪桂颗粒由黄芪、党参、白术、肉桂、巴戟天、干姜、熟地、菟丝子、川芎、当归、丹参、龙骨、牡蛎组成，以上颗粒剂实际重量64.5g，由江阴天江药业有限公司生产；丙基硫氧嘧啶：50mg/片，由上海朝晖药业有限公司生产，批号：091206；优甲乐：50μg/片，由德国默克公司生产，批号：106226。FT3、FT4、TSH采用化学发光法检测；TNF-α，IFN-γ试剂盒由北京中杉金桥技术有限公司提供。

1.3 主要仪器

CHEMIX-180全自动生化分析仪：日本Sysmex公司；352型酶标仪：芬兰Labsystems Multiskan MS。

2 方法

2.1 分组及造模

60只Wistar大鼠随机选取10只为空白组，雌雄各半，其余50只予0.1%丙硫氧嘧啶（PTU）生理盐水溶液按1mg/100g体重灌胃建造甲减大鼠模型。15天后检测各组大鼠甲状腺功能，FT3、FT4水平低于空白组，TSH＞10uIU/ml为造模成功，治疗期间仍继续予PTU生理盐水溶液灌胃，隔日1次，空白组予等量生理盐水。将50只甲减模型大鼠随机分为5组：模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。

2.2 给药

甲减模型建立成功后，各治疗组予相应治疗药物12周，按照人与大鼠体表面积折算等效剂量比值计算大鼠用药剂量，并根据大鼠体重予以调整。西药组将25μg优甲乐溶于水制备成222.2ml混悬液，中药低、中、高剂量组分别将64.5g、129.0g、258.0g芪桂颗粒溶于水制备成222.2ml溶液，拌匀，加热3分钟致颗粒完全溶解，各治疗组均将相应药物按照20ml/Kg体重灌胃，空白组及模型组予等量生理盐水。

2.3 观察指标

治疗12周后，停食停水12h，次日清晨腹主动脉取血，测血清FT3、FT4、TSH、TNF-α，IFN-γ水平。

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 给药前各组大鼠甲功水平（见表1），与空白组相较，各组FT3、FT4水平均低于空白组（P＜0.05），TSH＞10uIV/ml且高于空白组（P＜0.05）。除空白组外其余各组之间，甲功水平的差异没有统计学意义（P＞0.05），提示造模成功。

表1 给药前各组大鼠甲功水平（±s）

表1 给药前各组大鼠甲功水平（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05

组别 N FT3（pmol/L） FT4（pmol/L） TSH（uIU/ml）空白组 10 5.46±1.71 25.64±5.13 2.64±0.73模型组 10 2.24±0.68＊ 2.16±0.86＊ 10.94±1.13＊西药组 10 2.32±0.73＊ 2.51±0.85＊ 11.60±1.02＊中药低剂量组 10 2.13±0.82＊ 2.33±0.57＊ 12.18±1.39＊中药中剂量组 10 2.17±0.76＊ 2.25±0.84＊ 11.87±1.32＊中药高剂量组 10 2.34±0.96＊ 2.36±0.71＊ 12.52±1.51＊

3.2 给药后各组大鼠甲功水平（见表2）

表2 .给药后各组大鼠甲功水平（±s）

表2 .给药后各组大鼠甲功水平（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05,△与模型组比较P＜0.05

组别 N FT3（pmol/L） FT4（pmol/L） TSH（uIU/ml）空白组 10 5.62±1.37 26.73±4.84 2.78±1.14模型组 10 2.04±0.64＊ 2.24±0.67＊ 11.05±1.74＊西药组 9 4.12±0.85△ 12.57±1.70△ 3.24±0.92△中药低剂量组 8 3.89±1.63△ 10.65±1.72△ 3.18±0.78△中药中剂量组 10 4.24±1.02△ 11.62±1.74△ 2.95±1.12△中药高剂量组 9 4.35±1.21△ 12.15±1.63△ 2.54±1.18△

治疗12周后，模型组FT3、FT4水平低于空白组（P＜0.05），TSH水平高于空白组（P＜0.05），提示甲减模型稳定。各治疗组FT3、FT4水平高于模型组（P＜0.05），TSH水平低于模型组（P＜0.05），差异具有统计学意义，提示西药及中药各剂量组对于甲减模型大鼠甲功有改善作用。

3.3 给药后各组大鼠TNF-α、IFN-γ水平（见表3）

模型组TNF-α、IFN-γ水平高于空白组（P＜0.05），提示甲减状态下两细胞因子水平升高。西药组、中药低剂量组与模型组相比，TNF-α水平的差异没有统计学意义（P＞0.05）,中药中剂量组、中药高剂量组TNF-α水平低于模型组、西药组，差异具有统计学意义（P＜0.05），提示西药优甲乐对于甲减大鼠TNF-α水平没有改善作用，中药可以改善TNF-α水平，但需要较高剂量。IFN-γ水平西药组、中药各剂量组均低于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05），但中药中、高剂量组较西药组更低，且差异具有统计学意义（P＜0.05），说明西药及中药都可以改善升高的IFN-γ水平，但中药中、高剂量组的改善作用更加明显。

表3 给药后各组大鼠TNF-α、IFN-γ水平（±s）

表3 给药后各组大鼠TNF-α、IFN-γ水平（±s）

注：与空白组比较＊P＜0.05，与模型组比较△P＜0.05，与西药组比较·P＜0.05

组别 N TNF-α（ng/L） IFN-γ（ng/L）空白组 10 30.63±5.30 723.26±80.37模型组 10 66.13±5.17＊ 1268.24±76.47＊西药组 9 57.62±4.68 1024.36±82.74△中药低剂量组 8 56.92±4.72 1013.56±98.72△中药中剂量组 10 42.63±4.10△· 842.30±87.45△·中药高剂量组 9 41.24±4.75△· 800.52±90.96△·

4 讨论

予0.1%PTU生理盐水溶液灌胃后，各造模组大鼠出现活动减少、聚堆、进食进水减少、皮毛失去光泽、反应减慢等低代谢的表现，并且在造模过程中逐渐加重，与临床上脾肾阳虚患者畏寒肢冷、食欲减退、困倦乏力、皮肤干燥的临床症状相符。针对甲减脾肾两脏阳气虚衰的病机，采用益气温阳补肾法组中药自拟方芪桂颗粒，方中以黄芪为君，健脾补气，利水消肿，党参、白术为臣，助黄芪益气升阳，党参兼有生津补血之功效，白术兼有健脾燥湿之用；肉桂、巴戟天、干姜、菟丝子加强全方补益阳气之力；佐以熟地、川芎、当归、丹参，养血活血，加强活血祛瘀的作用，龙骨、牡蛎重镇安神。中医学认为“肾，主骨生髓通于脑”，与现代医学下丘脑-垂体-甲状腺轴的功能相似，全方在补益一身阳气的同时，从整体上改善下丘脑-垂体-甲状腺轴的功能，同时注重活血化瘀，消除病理产物。

在甲状腺上皮细胞合成并释放甲状腺激素的过程中，细胞因子的过度增殖对其产生负面的影响。TNF-α、IFN-γ及多种白细胞介素可与甲状腺滤泡细胞及上皮细胞结合，抑制甲状腺激素的产生，并进一步影响细胞形态，甚至影响其mRNA的表达[3]，TNF-α、IFN-γ还可以通过抑制TSH对于甲状腺上皮细胞的刺激作用，降低其摄碘率，抑制甲状腺激素的合成[4]实验研究发现经过中药治疗后，甲减模型大鼠TNF-α、IFN-γ水平降低，甲状腺功能恢复，益气温阳补肾法对于甲功的改善效果优于单纯使用西药，其机制可能是通过抑制细胞因子的水平达到的。

[1] 莫崇念,康晓燕,邓丽莎,谢春光.谢春光教授治疗甲状腺功能减退症经验[J].湖南中医杂志,2012,01:27-2.

[2] 贾绍燕.甲状腺功能减退中医病机分析[J].中医杂志,2010,51(2):26-27.

[3] Papanas N,Papazoglou D, Papatheodorou K,Antonoglou C,Kotsiou S,Maltezos E.Thyroxine replacement dose in patients with Hashimoto disease:a potencial role for interleukin-6.Cytokine.2006;35:166-170.

[4] Caturegli P,Hejazi M,Suzuki K,et al.Hypothyroidism in transgenic mice expressing IFN-gamma in the thyroid.Proc Natl Acad Sci USA. 2000;97:1719–1724.

* 黑龙江省自然科学基金项目：项目名称：芪柱颗粒对大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴影响的代谢组学研究.项目编号：H201458.

** 通讯作者