一种反式脂肪酸的检测方法

一种反式脂肪酸的检测方法

反式脂肪酸是一种具有反式结构的不饱和脂肪酸，食品中的反式脂肪酸会加速动脉硬化，导致心血管病。反式脂肪酸危害性大，已经引起各国的注意。丹麦政府是世界上第一个对食品中反式脂肪酸含量进行限制的国家。2003年7月9日，美国食品药品管理局正式公布规章：自2006年1月1日起，食品营养标签中必须标注产品的饱和脂肪酸含量及反式脂肪酸的含量，建议每日反式脂肪酸摄取量在每日总摄取能量的1%以下。

目前国内外检测反式脂肪酸的方法主要有红外光谱法、毛细管电泳法、银离子高效色谱法、反相高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。其中气相色谱法最常用，例如应用在GB/T 22110-2008食品中反式脂肪酸的测定。与固体提取出来的脂肪不一样，液态的植物油含有大量的顺式饱和脂肪酸，严重干扰反式脂肪酸的测定。国内外文献报道排除顺式和反式饱和脂肪酸干扰的主要方法是银离子固相萃取法，利用Ag+与顺式脂肪酸双键间存在微弱的作用力，从而预分离顺式脂肪酸，但此操作增加了实验的复杂度。因此,建立气相色谱-质谱联用法测定反式脂肪酸的新检测方法具有重要意义。

材料、试剂、仪器与方法

材料、试剂、仪器：检测的样品为液态植物油（食用油等）。异辛烷；甲醇；氢氧化钾；标准物质十三烷酸甲酯（C13：0）、反 -9- 十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）≥99%。气相质谱仪；电子天平；旋涡混合器。

方法：气相质谱条件。色谱柱：Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)；程序升温条件：初始温度60℃，停留5min，以5℃/min升温至165℃，停留1min，再以2℃/min升温至225℃，保留17min；总运行时间：74min；载气：高纯氮气，流量1.2mL/min；进样口温度：240℃；进样量：1μL；进样方式：不分离进样。质谱条件。离子源：电子轰击源，70Ev；扫描方式：全扫描，50-1000u；离子源温度：280℃；标准物质十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）的定量离子、定性离子为：十三烷酸甲酯，228，143，87，74；反-9-十八碳烯酸甲酯，296，264，222，97；反-9,12-十八碳二烯酸甲酯，294，263，95，67；顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯，292，261，108，79。

样品处理

样品处理：准确称取约60mg植物油于10ml离心管中，加入0.5ml 100mg/L内标物质十三烷酸甲酯溶液，0.2ml 2mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，用异辛烷定容到5ml。在旋涡混合器上剧烈震荡2-3min，加入1g一水合硫酸氢钠。在旋涡混合器上剧烈震荡0.5min后取上清液待气相色谱—质谱仪测定。

标准曲线配制：称取适量标准物质十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c），用异辛烷配备成各种标准物质浓度均为10mg/ L的标准储备溶液。

结果与讨论

色谱分离：顺式，反式脂肪酸在物理和化学性质上很相似，选用常用的柱子，例如HP-5MS(30m x 0.25mm x 0.25μm)等无法将其分离。需用特殊的柱子Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)才能过获得满意的分离效果。典型的样品色谱图见图1。

图1 脂肪酸甲酯的总离子流色谱图

不同脂肪酸质谱图特征：反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）的分子量为296，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）分子量为294，顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）分子量为292，为其特征离子峰。反式十八碳二烯酸甲酯包含反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）等多种同分异构体,其分子量均为294，共同的碎片离子为m/z 263, m/z67。反式十八碳三烯酸甲酯包含多种同分异构体，其分子量与顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）相同，均为292，共同的碎片离子为m/z 261。

在气相质谱仪中按照上述离子进行离子搜索，在样品中并没有发现反式脂肪酸的存在。

定量分析：用面积归一化法测定出各反式脂肪酸的相对含量。

□ 潘金铜 浙江海洋大学

罗杰鸿 广州京诚检测技术有限公司