老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸与LPL基因多态性相关分析

黎才丽，黄 勇，许政衡

老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸与LPL基因多态性相关分析

黎才丽，黄 勇，许政衡

目的探讨老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸(Hcy)与脂蛋白脂肪酶(LPL)基因多态性的关系。方法选取2015年1月—2016年3月在我院治疗的冠心病病人84例(观察组)，同时选取健康者53名作为对照组，检测两组LPL基因位点rs11570892多态性以及血清Hcy 、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。结果观察组Hcy和TG分别为(20.10±6.43)μmol/L和(1.81±0.93)mmol/L，明显高于对照组，而HDL-C为(0.81±0.21)mmol/L，明显低于对照组，差异有统计学意义(Plt;0.05)；观察组和对照组LPL rs11570892位点基因型及等位基因分布比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)；观察组GG型病人TG为(2.13±0.41)mmol/L，明显高于AA和GA型病人，而HDL-C为(0.71±0.18)mmol/L，明显高于AA和GA型病人，差异比较有统计学意义(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。结论LPL基因多态性与老年冠心病急性发作期血清Hcy无关，其可能与病人血脂水平有关。

冠心病；血清同型半胱氨酸；脂蛋白脂肪酶基因多态性；老年；血脂

高脂血症、吸烟及高血压等均可以促进冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的发生，我国现阶段的CHD发病率可达0.6%以上，且近三年来呈现上升趋势[1]。脂蛋白代谢紊乱可以导致冠状动脉血管内皮细胞损伤，促进泡沫细胞、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)等对于冠状动脉内皮的侵蚀。而在这一过程中，血清同型半胱氨酸(Hcy)可以促进氧化应激损伤，加剧冠状动脉粥样斑块的形成[2-3]。随着研究的深入，部分研究者发现脂蛋白脂肪酶(LPL)可以调节Hcy的活性，影响到的Hcy羧基末端的生物学功能，进而参与到CHD的发生发展过程中[4- 5]，但迄今缺乏相关的研究。本研究探讨LPL基因多态性与CHD病人血清Hcy的关系，进一步分析不同基因型LPL与血脂的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年1月—2016年3月在我院治疗的冠心病病人84例(观察组)，纳入标准：①诊断符合国际心脏病学会和协会/WHO临床命名标准化专题组联合制定的缺血性心肌病的命名及诊断[6]，或至少一支冠状动脉直径狭窄≥50%；②急性发作期，年龄≥60岁；③病人及家属知情同意并签署同意书。排除标准：①合并有先天性心脏病、心肌病等心脏疾病；②合并肝肾功能异常、恶性肿瘤等疾病者。同时选取在我院体检的健康者53名作为对照组，两组一般资料差异比较无统计学意义。详见表1。

表1 两组病人一般资料比较

1.2 生化指标测定 清晨采集空腹静脉血，分离血清后，-20℃保存待测，采集标本后1周内检测三酰甘油(TG)、TC、HDL-C、LDL-C、Hcy，相关指标测定采用电化学发光全自动免疫分析仪(美国雅培i2000)，检测试剂盒购自福建新大陆生物技术有限公司。

1.3 基因多态性检测 LPL rs11570892基因多态性检测：取冻存的血清保存液体，按照10 000 r/min的离心速度进行离心分离，每1 mL的TRIZOL试剂裂解样品中加入0.2 mL氯仿，进行裂解操作，4 ℃采用无酶的RNA冲洗液进行洗涤，再次10 000 r/min离心5 min，得到RNA。混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70 ℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5 μL，37℃水浴60 min，室温放置5 min使其完全溶解，逆转录为cDNA。以β-actin为模版，在反应体系中加入SYBR Green 1 染料、上游引物、下游引物、dNTP，总体积达20 μL，上机，反应条件为：93℃2 min，93℃ 1 min，55℃ 2 min，共40个循环。

PCR产物扩增后进行基因多态性检测：参考multiplexkit试剂盒(南京凯基生物科技有限公司)使用说明，加入各位点对应延伸引物进行单碱基测序反应。并在ABI1310( Life Technologies，美国)进行电泳，结果用GENEMAPPER软件( Life Technologies，美国)进行分析。 rs11570892上游引物：5’-3’ GGATTGTGGCCTTCTTTGAG，下游引物：5’-3’ CCAAACTGAGCAGAGTCTTC。

2 结 果

2.1 两组血清Hcy及血脂比较 观察组Hcy和TG明显高于对照组，而HDL-C明显低于对照组，差异比较有统计学意义(Plt;0.05)。详见表2。

表2 两组血清Hcy及血脂比较(±s)

2.2 两组Hardy-winberg遗传平衡定律检验 Hardy-winberg遗传平衡定律检验，LPL rs11570892位点基因型在观察组和对照组中分布符合Hardy-winberg平衡(Pgt;0.05)。两组研究对象具有群体代表性。详见表3。

2.3 两组基因型及等位基因频率比较 观察组和对照组LPL rs11570892位点基因型及等位基因分布比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。详见表4。

表3 Hardy-winberg遗传平衡定律检验

表4 两组基因型及等位基因频率比较 例(%)

2.4 观察组LPL rs11570892位点不同基因型与Hcy及血脂的关系 GG型病人TG为(2.13±0.41)mmol/L，明显高于AA和GA型病人，而HDL-C为(0.71±0.18)mmol/L，明显高于AA和GA型病人，差异比较有统计学意义(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。详见表5。

表5 观察组LPL rs11570892位点不同基因型与Hcy及血脂的关系(±s)

3 讨 论

冠状动脉内皮细胞在脂蛋白代谢紊乱的基础上，可由于局部的氧化应激障碍、自由基损伤等，导致内皮功能细胞的坏死和凋亡，单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等在此过程中通过加剧对于内皮下平滑肌层的侵蚀，促进粥样斑块的形成。CHD的发生严重影响到了生命健康，导致病死率、病残率的上升[7- 8]。对于CHD发病过程中的相关生物学机制的研究，可以为后续临床上CHD病人的临床转归及辅助治疗提供理论参考。Hcy是缺氧条件下通过脱硫氢酶作用分解的含有硫化氢的化合物，其羧基末端含有多个重复结构的糖蛋白结合区域，可以通过结合半胱氨酸酶、巯基化合物酶等，加剧下游细胞炎症因子如IL-6、IL-8及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)的释放，促进泡沫细胞在内皮下层的沉积[9- 10]。研究显示在CHD病人中存在着明显的Hcy异常表达，Hcy表达的动态变化可以作为预测CHD病人不良心血管结局事件的重要依据[11- 12]。

Hcy存在着多种调节因子，部分学者认为LPL可以通过诱导甘油三酯酶的活性，协同调节Hcy的代谢，进而参与到CHD的发生发展过程。LPL是细胞溶酶体中的一种水解酶，通过在血管内皮表面发生作用，参与体内的脂肪、胆固醇等的代谢[13]。基因多态性在恶性肿瘤、心血管疾病等的发生中发挥了重要的作用，特点位点基因的变换可以影响到转录基因的转录活性，调节蛋白的表达，发挥其生物学效应。已有的研究探讨了LPL多态性与脂质代谢的关系，但与CHD的探讨不足，本研究的创新性在于探讨不同分型的LPL与脂质代谢的联系。

血清三酰甘油可以促进脂质沉积和单核细胞等浸润，促进CHD病情进展。本研究中观察组的TG明显高于对照组，而脂蛋白保护性因素HDL-C明显下降，表明脂蛋白代谢的紊乱在CHD的冠状动脉病变中发挥了重要作用。Zvyagina 等[14- 15]回顾性分析了46例冠心病病人的血清脂蛋白资料，发现血清TG可平均上升25%，而HDL-C也可下降至0.70 mmol/L，这与本研究的结论较为一致。Hardy-winberg遗传平衡定律基因型频率的检测，可以评估所选样本是否符合遗传平衡定律，LPL rs11570892位点各组基因型的实际频数和理论频数无明显差异，符合Hardy-winberg遗传，表明本研究所选择的样本具有群体代表性。但本研究并未发现LPL rs11570892位点基因型AA、GA、GG间的差异，同时等位基因频率同样无明显差异，表明LPL rs11570892基因多态性并未参与到冠心病的发生发展过程。LPL rs11570892基因型或者基因的多态性并不影响到LPL蛋白的转录或者翻译，不会影响到血清Hcy或者冠状动脉病变的进展。但对于具体的基因型的分析可见，GG型病人的血清TG及HDL-C均明显高于AA型及GA型，表明LPL rs11570892基因的多态性可以影响到脂质的代谢，TG及HDL-C的同时上升表明体内的脂质代谢紊乱较为严重，LPL rs11570892的多态性可能影响到了甘油三酯酶、胆固醇脂酶的活性，抑制了肝脏对于TG的逆向转运，导致脂质代谢异常。但本研究并未发现LPL rs11570892与LDL-C、Hcy的关系，虽然Hcy在CHD组中存在一定程度的异常表达，但Hcy与多态性无明显关系，提示LPL rs11570892并不参与到Hcy的代谢调节过程中。

综上所述，CHD病人体内存在着明显的脂质代谢紊乱，Hcy表达明显上升，虽然LPL rs11570892基因多态性本身并不影响Hcy的表达，但可以参与到TG、HDL-C等的代谢调节过程，影响血脂水平。后续研究可以增加LPL多个位点的多态性研究分析。

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2016-07-11)

(本文编辑 王雅洁)

Correlation between Serum Homocysteine and LPL Gene Polymorphism in Elderly Patients with Acute Coronary Heart Disease

Li Caili， Huang Yong， Xu Zhengheng

Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Haikou 570216， Hainan， China

ObjectiveTo investigate the correlation between serum homocysteine (Hcy) and Lipoprotein lipase (LPL) gene polymorphism in elderly patients with acute coronary heart disease.MethodsEighty-four patients with coronary heart disease in our hospital from January 2015 to March 2016 were as observation group.Fifty-three healthy individuals were as controls.The polymorphism of LPL gene locus rs11570892 and serum Hcy， total cholesterol (TC)， triglyceride (TG)， low density lipoproteincholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels were detected.ResultsThe levels of Hcy and TG were (20.10±6.43) mmol/L and (1.81±0.93) mmol/L in observation group， which was significantly higher than that in control group (Plt;0.05).HDL-C level was (0.81±0.21) mmol/L， which was significantly lower than that in control group (Plt;0.05).There was no difference in LPL rs11570892 locus genotype and allele between two groups (Pgt;0.05).TG level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).HDL-C level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).There was no difference in serum Hcy， TC and LDL-C among patients with different genotypes (Pgt;0.05).ConclusionLPL gene polymorphism was not associated with serum Hcy in elderly patients with acute coronary heart disease， which may be related to the serum lipid level.

coronary heart disease；serum homocysteine;LPL gene polymorphism；elderly patients；blood lipid

R541.4 R256.2

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.21.028

1672-1349(2017)21-2750-04

海南省海口市中医医院 (海口 570216)，E-mail：lan86453@163.com

信息：黎才丽，黄勇，许政衡.老年冠心病急性发作期病人血清同型半胱氨酸与LPL基因多态性相关分析[J].中西医结合心脑血管病杂志，2017，15(21)：2750-2753.