益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸对大鼠HPT轴功能的影响

赵永峰，郑凯旋，李艺丹，张婷婷，陈达，胡昌江

益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸对大鼠HPT轴功能的影响

赵永峰，郑凯旋，李艺丹，张婷婷，陈达，胡昌江

目的：观察益智仁炮制前后分别组成缩泉丸对大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPT轴）功能的影响，拟阐明缩泉丸中益智仁盐炙前后的科学内涵。方法：取SD大鼠随机分成4组。采用腺嘌呤灌胃复制肾阳虚多尿模型，造模成功后开始分别给予益智仁盐炙前后组成的缩泉丸，空白组和模型组给予等量蒸馏水。实验结束后股动脉取血同时取下丘脑，测定各组大鼠血清三碘甲酸原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）、促甲状腺激素（TSH）、血清和下丘脑促甲状腺激素释放激素（TRH）。结果：与空白组比较，模型组大鼠血清中T3、T4、TSH、TRH以及下丘脑TRH含量均显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，缩泉丸益智仁生品组以及缩泉丸益智仁盐炙品组血清T3、T4、TSH、TRH以及下丘脑TRH含量均显著升高（P＜0.05），且盐炙品组含量高于生品组含量（P＜0.05）。结论：腺嘌呤所致的肾阳虚模型存在下丘脑-垂体-甲状腺轴功能紊乱，缩泉丸中益智仁盐炙前后对肾阳虚模型的甲状腺功能均有不同程度的改善作用，尤以缩泉丸中益智仁盐炙品效果较好，说明缩泉丸中益智仁用盐炙品的合理性。

盐炙；缩泉丸；甲状腺激素；益智仁

缩泉丸出自《妇人良方》[1]，由益智仁、山药和乌药三味药组成，功效温肾驱寒，缩尿止遗，在临床上常用治小便频数或遗尿不止[2～3]。益智仁为方中君药，生品功效主要偏于温脾摄唾，盐炙后功效偏于温肾缩尿。根据“缩泉丸”的功效，方中应该用盐炙品较好，但仅仅局限在中医传统理论，缺乏科学内涵的解释。中医的肾阳虚的临床症状常常表现为畏寒肢冷，小便频数、喜静萎靡等症状。当甲状腺激素释放减少，机体则会产生怕冷等一系列症状，符合中医肾阳虚的临床表现，故本实验在前期的研究基础上[4～7]，从甲状腺功能角度[8]，以下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPT轴）为切入点，研究益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸对机体下丘脑-垂体-甲状腺轴的影响，拟阐述缩泉丸中益智仁盐炙的作用机制以及“盐炙入肾-肾主水”的炮制机理。

1 实验材料

1.1 动物

SD雄性大鼠40只，体重220-250g，由四川达硕动物实验中心提供。实验动物生产许可号：SCXK（川）2013-0024。

1.2 材料及试剂

益智仁（批号：20150312）、山药（批号：20150305）、乌药（批号：20150314）均购于荷花池药材市场，经鉴定均符合《中国药典》2010版Ⅰ部相关项下要求。大鼠促甲状腺激素（TSH）ELISA试剂盒（批号:201605-B17-2）大鼠促甲状腺激素释放激素（TRH）ELISA 试剂盒（批号:201605-B16-2）；大鼠甲状腺素（T4）ELISA 试剂盒（批号:201605-B22-2）；大鼠三碘甲腺原氨酸（T3）ELISA 试剂盒（批号:201605-B26-2）；大鼠组织促甲状腺激素释放激素（TRH）ELISA 试剂盒批号:201605-B11-2（艾博抗(上海) 贸易有限公司）。腺嘌呤（D110160）（成都贝斯特试剂有限公司）。

1.3 仪器

TG16W型微量高速离心机；GNP-9080型隔水式恒温培养箱；352型酶标仪（芬兰Labsystems Multiskan MS）；AC8型洗板机（芬兰Thermo Labsystems）。

2 方法

2.1 药液的制备

2.1.1 腺嘌呤混悬液 临用时配置成20 g﹒L-1的混悬液。

2.1.2 益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸 将生益智仁、山药、乌药分别粉碎过7号筛，按照2015版《中国药典》规定，按照1:1:1的比例混合成缩泉丸中益智仁生品，临用时配制成0.117 g﹒mL-1混悬液。盐炙益智仁按照前期工艺[9]益智仁盐炙后组成缩泉丸，其制备方法同生品。

2.2 动物模型及分组

取40只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、缩泉丸中益智仁生品组、缩泉丸中益智仁盐炙品组共4组。除正常组外，其余3组按照200 mg•kg-1的剂量灌胃腺嘌呤造模4周，造模2周后，大鼠出现体重减轻，体毛疏松，倦怠嗜卧，畏寒蜷缩，尿量增加等阳虚症状后，开始给药2周，股动脉取血，静置，4000 r﹒min-1离心10分钟，取血清，-20℃保存待用。同时在冰盘上迅速取下丘脑，称取重量。然后加入一定量的PBS缓冲液，低温离心20 min（3000 r﹒min-1）。取上清液于-20℃保存待测。

2.3 指标测定

血清T3、T4、TSH、TRH及下丘脑TRH采用酶联免疫吸附法，按照试剂盒说明书操作。

2.4 数据分析

采用SPSS20.0软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示。数据符合正态分布，使用单因素方差分析;多组间比较采用LSD检验。以P＜0. 05为有统计学意义。

3 结果

3.1 对大鼠血清中T3、T4、TSH的影响

结果表明，与空白组比较，模型组大鼠血清中T3、T4、TSH含量均显著降低（P＜0.05）。与模型组比较，缩泉丸生品组以及缩泉丸盐炙品组血清T3、T4、TSH含量均显著升高（P＜0.05），且盐炙品组含量高于生品组含量，差异有统计学意义（P＜0.05）。结果见表1。

表1 益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸对大鼠血清中T3、T4、TSH含量的影响

3.2 对大鼠血清及下丘脑TRH的影响

结果表明，与空白组比，模型组下丘脑TRH及血清TRH含量均显著降低（P＜0.05）。与模型组比，缩泉丸生品组以及缩泉丸盐炙品组下丘脑TRH及血清TRH含量均有不同程度的升高，差异有统计学意义（P＜0.05），且缩泉丸生品组和盐炙品组比较，盐炙品组含量高于生品组（P＜0.05）。结果见表2。

表2 益智仁盐炙前后分别组成缩泉丸对大鼠血清中TRH及下丘脑TRH含量的影响

4 讨论

中医认为，肾中阳气具有主持和调节机体水液代谢平衡的功能，即“肾主水”。机体的水液代谢有多个脏腑参与，但肾阳的功能最为重要，若肾阳不足，则会引起水液代谢障碍可能会出现小便清长或尿失禁、遗尿等症状。在中医临床应用中，缩泉丸是作为治疗肾阳虚所致的小便频数等症的基础方，具有温肾驱寒，缩尿止遗的功效。腺嘌呤所致的大鼠肾阳虚模型尿量明显增加，同时所伴随的症状均符合中医肾阳虚症候[10]，故选用此模型作为本实验研究对象。

甲状腺为机体能量代谢的主要腺体之一，在热量产生的过程中起着至关重要的作用。甲状腺激素的产生与分泌依赖垂体的促甲状腺激素激素的产生与分泌，而垂体激素又依靠下丘脑促甲状腺激素释放激素的分泌，从而构成下丘脑-垂体-甲状腺轴，影响机体的产热机能等。正常情况下这个四种激素处于一个相对平衡的状态，当机体出现肾阳虚的表现，其下丘脑-垂体-甲状腺轴功能出现紊乱，且黄俊山[11]等在探讨寒症热症的本质时发现甲状腺水平的降低是构成虚寒证的主要胜利病例基础之一。本实验用腺嘌呤复制的肾阳虚模型不仅在症状上表现出明显的肾阳虚症状，而且血清TRH、TSH、T3、T4水平以及下丘脑TRH水平也明显下降，提示模型组大鼠出现了HPT轴功能的紊乱；而服用的益智仁盐炙前后分别组成的缩泉丸治疗组，大鼠外表症状及体征具有不同程度的减轻，同时血清TRH、TSH、T3、T4水平以及下丘脑TRH水平也明显升高，说明了缩泉丸可以改善机体下丘脑-垂体-甲状腺轴的功能，且缩泉丸中益智仁盐炙品效果要比生品效果好，说明了益智仁炮制入药的科学内涵。

[1] 许济群.方剂学[M].上海:上海科学技术出版社,1998:133.

[2] 于冬梅,王依新.缩泉丸加味治疗小儿遗尿证[J].吉林中医药,2004,24(6):25.

[3] 高改宏.缩泉丸配以菖蒲远志治疗小儿遗尿[J].内蒙古中医药,2016(5):40.

[4] 帅小翠,胡昌江,王虎,等.益智仁盐炙前后对缩泉丸缩尿作用的影响[J].成都中医药大学学报, 2011(3):69.

[5] 吴珊珊,龚晓猛,张美,等.缩泉丸中益智仁盐炙前后对肾阳虚大鼠肾脏功能的改善作用[J]. 中国实验方剂学杂志,2016(5):1.

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[7] 李文兵.基于中医“标本兼治”研究益智仁盐炙“温肾缩尿”作用机理[D].成都中医药大学,2013.

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[9] 李兴迎,胡昌江,林辉,等.中药益智仁盐炙工艺的正交实验法研究[J].时珍国医国药,2008,19(7):1574.

[10] 肖静,何立群,高建东,等.腺嘌呤与氢化可的松大鼠肾阳虚模型造模方法比较[J].中国比较医学杂志,2008,18(3):77.

[11] 黄俊山,白介辰,黄国良,等.从检测血中 FT3、FT4、T、E2及皮质醇等指标探讨寒证热证的本质[J].中国中西医结合杂志,2002,22(2):113.

Effects of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan on the function of hypothalamus pituitary thyroid axis

/ZHAO Yong-feng, ZHENG Kai-xuan, LI Yi-dan, ZHANG Ting-ting, CHEN Da, HU Chang-jiang//( School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137,Sichuan)

Objective:To observe the effect of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan on the function of hypothalamus pituitary thyroid (HPT) axis in rats and clarify the scientific connotation Yizhiren in Suoquan Wan by stir-frying with salt-water.Method:SD rats were randomly divided into 4 groups: blank group, model group, Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group. Kidney-yang deficiency polyuria rats model was induced by adenine. Then Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group were given Suoquan Wan crude and processed product. The blank group and model group were given equal volume of distilled water. Finally, the rat femoral artery blood and the hypothalamus was collected and the contents of rat serum triiodothyronine orthoformate ammonia acid (T3), thyroxine (T4), promoting thyroid stimulating hormone(TSH), serum and hypothalamus promote thyroid hormone releasing hormone (TRH) were detected.Result:Compared with the blank group, the contents of serum T3, T4, TSH, TRH and hypothalamic TRH in the model group were significantly decreased(P＜0.05). Compared with the model group, the levels of serum T3, T4, TSH, TRH and hypothalamic TRH in Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group were significantly increased (P＜0.05) and salt-processed product group showed better effect than the Suoquan Wan crude group (P＜0.05).Conclusion:The dysfunction of HPT axis is observed in adenineinduced kidney-yang deficiency polyuria rats model. Suoquan Wan crude group and Suoquan Wan salt-processed group model both improve the thyroid function of kidney-yang deficiency rat, and the salt-processed Yizhiren has better effect. The results indicate the rationality of stir-frying with salt-water of Yizhiren in Suoquan Wan.

Stir-frying with salt-water; Suoquan Wan; thyroid hormone; Yizhiren

R 285.5

A

1674-926X(2017)05-008-03

国家自然科学基金面上项目(81473353，30973941)

成 都中医药大学药学院，四川 成都 611137

赵 永峰（1992-），男，硕士研究生，主要从事中药炮制与制剂研究Tel:15184478991 Email:625789302@qq.com

胡 昌江，男，教授，博士生导师，主要从事中药炮制原理及炮制工艺研究Tel:13980980796 Email:hhccjj@hotmail.com

2016-12-27

（责任编辑：陈思敏）