冯了性跌打风湿药酒指纹图谱的研究

●陈改敏

冯了性跌打风湿药酒指纹图谱的研究

●陈改敏

目的：本文对冯了性风湿跌打要就指纹图谱进行检测的方法进行论述。方法：对于冯了性跌打风湿药酒的指纹图谱，采用HPLC方法进行监理，厨房中的直白哦成分，用量较大的包括麻黄、桂枝、陈皮、丁公藤等，采用对比参照的方法进行研究，使用的指纹图谱分析的软件为重要色谱指纹图谱相似度的评价系统。结果：以验算盐酸伪麻黄碱、桂皮醛、柚皮苷等为参照，对冯了性跌打风湿药酒进行HPLC指纹图谱的分析，确定了独照指纹图谱的相似度，药酒的色谱图、共有峰等。结论：采用HPLC法进行冯了性跌打风湿药酒的指纹图谱的评价，具有很好的重复性、稳定性以及精密度，值得加以推广使用。

冯了性风湿跌打药酒；HPLC法、指纹图谱

1 仪器与材料

冯了性跌打风湿药酒指纹图谱进行测定的仪器，选用了高效液相色谱仪、电子天平等。对照东菪内酯、桂皮醛等，采用药品生物制品鉴定所进行鉴定的方法，对国药集团生产的冯了性跌打风湿药酒进行了检测，要药酒的规格为500ML每瓶（从S1-S10)，水位超纯水，甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2 方法和结果

(1)色谱条件采用的流动相为甲醇的醋酸磷酸，其中醋酸含量为0.1%，磷酸的含量为-0.1%，色谱柱为C18柱，流动相B采用梯度洗脱程序，按照体积进行时间的设定，12%的流动相洗脱的时间为30分钟，25%以内的体积洗脱的时间最长为50分钟，38%的流动相洗脱的时间最长为50-75分钟，60%的流动相洗脱的时间最长为95分钟，90%的流动洗脱的时间为100分钟。对波长进行检测，300 nm的检测时间为0-10分钟，210 nm的检测时间为10-20分钟，800 nm的检测时间20-100分钟，进行色谱测试的柱温度为30摄氏度，流速为1ML/m in[2]。

冯了性风湿跌打风湿药酒指纹图谱

1-15 分别为盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、东莨菪苷、绿原酸、东莨菪内酯、柚皮苷、新橙皮苷、桂皮醛等，其余峰号未能归属

(2)取冯了性风湿跌打药酒。10 m L作为续滤液进行供试品溶液的制备，加甲醇稀释至刻度过 0．45 μm 微孔滤膜，置 20 m L量瓶中，按照精密量进行摇匀。

精密称取质量浓度、体积分数 80%甲醇水溶液溶解，包含了盐酸伪麻黄碱( 40 μg /m L ）东莨菪内酯( 40 μg /m L) 、盐酸麻黄碱( 40 μg /m L)、绿原酸 ( 40 μg /m L) 、桂皮醛( 10 μg /m L)、新橙皮苷 ( 80μg /m L)、盐酸伪麻黄碱、柚皮苷( 80 μg /m L) 、东莨菪苷( 212μg /m L) 对照品[3]。

(3)精密度试验。将结果导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，按“2．1”项下的色谱条件，取冯了性风湿跌打药酒 ，平行进样 6 次，按“2．2”项下方法进行色谱峰匹配并制备供试品溶液，结果 15 个共有峰的相对峰面积 R SD 均 ＜ 5%，相对保留时间SD 均＜1%。

(4)稳定性试验。按“2．1”项下色谱条件，取冯了性风湿跌打药酒，分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样测定，相对峰面积 R SD 均 ＜ 5%，供试品溶液在24 h 内进行制备供试品溶液，结果 15 个共有峰的相对保留时间 R SD 均＜ 1%[4]。

(5)重复性试验。按“2．2”项下方法，取冯了性风湿跌打药酒 ，分别进行色谱条件下的进样，平行制备供试品溶液6 份，按“2．1”项下的结果 15 个共有峰的相对峰面积R SD 均＜5%，相对保留时间 R SD均＜1%，重复性良好[5]。

以冯了性风湿跌打药酒对东莨菪内酯进行的加样回收率的实验为例，按照色谱条件进行含量的测定，操作进行了重复的六次，按照供试品进行了操作和制备，并进行了回收率的计算。得到的结果如下：

加样回收率实验结果

（6）指纹图谱的建立与评价。按上述色谱条件进行测定以及自动匹配，供试品的 HPLC指纹图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，选取“时间窗宽度”为 0．5 m in，对照指纹图谱( R) 的相似度分别为 0．988、0．945、0．988、0．944、0．992、0．941、0．973、0． 987、0． 945、0． 983，生成冯了性风湿跌打药酒对照指纹图谱，得到 S1 ～ S10 供试品的HPLC 指纹图谱，设定 S10 为参照图谱并计算相似度，将 S1 ～ S10 10 批冯了性风湿跌打药酒 样 品 进行了HPLC 指纹图谱的对照，确定了 15 个共有峰。其中8 个色谱峰，分别为东莨菪苷、柚皮苷、东莨菪内酯、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、新橙皮苷、绿原酸、桂皮醛，根据色谱图中各色谱峰的相对保留时间，对应峰2、3、4、5、7、11、12、14，峰面积较大且稳定，出峰时间适中，经过采用紫外光谱比较以及对照品对照的方式，指认出因图谱中绿原酸分离度好，保留时间长，因此将其作为色谱参照峰[6]。

3 讨论

比较了 Ecosil、Kromasil、Merck 3 种不同品牌型号的色谱柱，确定 210、300 nm 作为检测波长。在用 DAD 检测器对供试品溶液进行检测时，优选了 Kromasil C18柱( 4．6 mm×250 mm，5 μm) 为试验色谱柱。结果显示在 300 nm 条件下酒中药材用量较大的麻黄的指标成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱出峰最丰富，故从色谱峰峰形、分离度等方面比较先后选择了甲醇-0．1%甲酸、甲醇-0．2%醋酸等成分，明显优于360 nm 条件下的出峰情况。流动相的选择采用甲醇-水-冰醋酸(32∶ 68∶ 0.16)、腈-0.1%磷酸水溶液，结果前者所得色谱基线不平，且药酒内各种元素的含量其相邻杂质不能得到较好的分离，且洗出较多杂质，而进行梯度洗脱，相邻的杂质峰分离度极佳，重现性强。作为流动相系统，药在 210 nm 处出峰，谱峰分离较理想，0．1%磷酸 =1 ∶1，乙腈-0．1%磷酸、甲醇-0．1%，选择甲醇和醋酸各0.1%，，色谱峰形好，洗脱能力强，基线平稳色谱图信息量大且分离效果好。

（作者单位：南阳医学高等专科学校）

南阳市2015年科技攻关项目，KJGG05

[1] 杨媛媛,陈志永,廖立平等.冯了性风湿跌打药酒中东莨菪素、东茛菪苷和绿原酸的测定[J].中成药,2014,36(3)：551-553.

[2] 关红晖,霍嘉茵,林淑明等.冯了性风湿跌打药酒HPLC指纹图谱研究[J].广东药学院学报,2017,33(1)：65-67.

[3] 翟敏,吴海龙,张喜华等.三维荧光结合二阶校正方法测定风湿药酒中东莨菪素含量[C].//第十二届全国电分析化学学术会议论文集 .2014：96-97.

[4] 殷博武 .细说药酒[J].中国药店 ,2013,(8)：56-57.

[5] 王常顺.无敌药酒与无敌丹胶囊质量控制方法研究[D].河北医科大学,2016.

[6] 冯倩倩,潘鑫,何友花等.旴江医家龚廷贤酒疗特色初探[J].江西中医药 ,2016,47(3)：11-12.