固相萃取-液相色谱-质谱法测定动物源食品中二氢吡啶的残留

□ 戎筱卿 苏州卫生职业技术学院

固相萃取-液相色谱-质谱法测定动物源食品中二氢吡啶的残留

□ 戎筱卿 苏州卫生职业技术学院

本文利用固相萃取技术对动物源食品进行净化、富集，并通过高效液相色谱-质谱联用技术，建立肉源食品中二氢吡啶的检测方法。

二氢吡啶；固相萃取；高效液相色谱-质谱联用

自2008年三聚氰胺事件的爆发，国内各种食品安全事故接连不断，一时间沸沸扬扬，食品安全越来越受到大家的关注。从早期的瘦肉精克伦特罗到2017年的3.15晚会，新的饲料添加剂喹乙醇、二氢吡啶、硫酸黏菌素又被不法分子大剂量添加到的动物饲料中，通过肉类食品进入了人们的餐桌。

喹乙醇，商品名为倍育诺、快育灵，长期使用，会蓄积在动物体内，产生毒性，对很多动物有明显的致畸作用。此外，抗生素的滥用会造成耐药性[1]，其他添加剂的大量和过量使用，均会部分蓄积在动物的体内，造成动物源食品中过量残留，给人类身体健康带来很多潜在危害。

二氢吡啶又名多犊锭、吉卢金，化学名称为2,6-二甲基- 3,5-二乙酯基-1,4-二氢吡啶，淡黄色结晶物。是一种新型多功能的饲料添加剂，具有广泛的生物学功能，在医学上用作心血管疾病的防治保健药物，有治疗脂肪肝、中毒性肝炎、抗衰老、防早熟等作用[2]。二氢吡啶最初由前苏联科学家合成并应用，因其具有天然抗氧化剂Vc的某些作用，最早在20世纪30年代，主要用作动植物油的抗氧化剂。20世纪70年代，前苏联拉托维亚专家发现其具有促进畜禽生长作用以来，世界各国相继展开了相关研究，并发现二氢吡啶有促进畜禽生长、改善畜禽产品品质、提高畜禽繁殖性能及防病等功能[3,4]，现作为新兴的饲料添加剂，应用广泛。

液相色谱-质谱联用仪（liquid Chromatograph Mass Spectrometer）， 简称LC-MS，是液相色谱与质谱联用的仪器。它既有液相色谱仪有效分离热不稳性及高沸点化合物的分离能力，又具有质谱仪的鉴定组分的能力。LC-MS已成为有机物分析实验室、药品/食品检验室、生产过程、质量检验等部门必不可少的分析工具。目前，串联质谱技术已成为痕量残留物质检测的主流技术，该方法灵敏度高、选择性和特异性好。

根据文献调研发现，测定二氢吡啶的分析方法的研究很少，一般是测定药品中的有效成分含量[5,6]。例如，二氢吡啶片剂的含量测定等，多数使用的是现有的主流分析方法——高效液相色谱法，但没有查到肉源食品中二氢吡啶含量测定的相关研究。由于肉源食品基质复杂、形态多样化，但是目标化合物含量低。因此，简单的浸提法会存在假阳性干扰、灵敏度不高等问题，不适用对肉类食品基质的研究[7,8]。在近期的文献报道中，测定食品中禁用、限用成份大多采用溶剂提取结合固相萃取技术对样品进行前处理[9,10]。本项目在参考国内外有关文献方法的基础上，拟采用固相萃取技术对样品进行净化、富集，并通过高效液相色谱-质谱联用技术，建立肉源食品中二氢吡啶的检测方法。

1 研究内容

（1）考察不同性质的溶剂（混合溶剂）和不同品牌的固相柱对肉类食品中二氢吡啶的提取效果，通过溶剂对肉源产品二氢吡啶的溶解性，在固相萃取柱上的保留情况、固相萃取柱的洗脱情况，确定提取、上样、淋洗、洗脱的最佳条件和最适合的固相萃取柱。

（2）考察不同品牌的C18柱色谱柱对待测物的保留情况，通过流动相、柱温、进样量、流速等条件的优化，找出二氢吡啶的特征离子，建立二氢吡啶的液相色谱-质谱条件。

（3）考察上述方法中二氢吡啶的液相色谱-质谱的线性范围，按照阴性样品出峰位置的3倍信噪比和10倍信噪比，测定检出限及定量限。

（4）选择肉源样品，对其进行方法准确度、重现性考察，添加水平为0.5*MRL、1*MRL、1.5*MRL，平行做6个样品，计算回收率与精密度。

（5）按照建立的样品提取、净化方法对阴性空白样品提取、净化后，加标准品溶液（相当于添加水平0.5*MRL），进行测定，平行测定3次。通过公式ME(%)=B/A×100，计算二者相对比值来评价其基质效应。

图1 固相萃取-质谱法测定动物源食品中二氢吡啶的工艺路线图

2 研究目标

（1）建立肉源食品中二氢吡啶的提取及纯化方法。

（2）建立二氢吡啶的液相色谱-质谱条件。

（3）建立二氢吡啶的工作曲线，确定检出限和定量限。

（4）确定该液相色谱-质谱方法的回收率和精密度。

（5）评价该液相色谱-质谱测定方法的基质效应。

3 工艺路线

从肉源食品中提取二氢吡啶，通过固相萃取法进行净化和富集，再用HPLC-MS法进行含量测定，获得标准曲线，并得到检出限、定量限、回收率和精密度，并用基质效应进行评价。固相萃取-质谱法测定动物源食品中二氢吡啶的工艺路线，如图1所示。

4 结语

我们将建立肉源食品中二氢吡啶的提取及纯化方法，并建立二氢吡啶的液相色谱-质谱条件，确定检出限和定量限，回收率和精密度，最后评价该液相色谱-质谱测定方法的基质效应。

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本文系苏州卫生职业技术学院科研项目“固相萃取-液相色谱-质谱法测定动物源食品中二氢吡啶的残留”（编号：szwzy201706）。