水产制品中山梨酸的不同提取方法的研究

朱金艳，郑凤娥，孙淼淼

（1．庄河市食品检验监测中心，辽宁 庄河 116400；2．沈阳市食品检验所，辽宁 沈阳 110000；3．庄河市农业技术推广中心，辽宁 庄河 116400）

水产制品中山梨酸的不同提取方法的研究

朱金艳1，郑凤娥2，孙淼淼3

（1．庄河市食品检验监测中心，辽宁 庄河 116400；2．沈阳市食品检验所，辽宁 沈阳 110000；3．庄河市农业技术推广中心，辽宁 庄河 116400）

山梨酸能有效地抑制霉菌，酵母菌和好氧性细菌的活性，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖，但对厌氧性芽孢菌与嗜酸乳杆菌等有益微生物几乎无效，其抑止发育的作用比杀菌作用更强，从而达到有效地延长食品的保存时间，并保持原有食品的风味，其防腐效果是同类产品苯甲酸钠的5～10倍，所以在食品加工生产中应用广泛。如果食品中添加的山梨酸超标严重，消费者长期食用，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。在2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中，规定山梨酸在水产制品中的最大使用量为1．0克/公斤。针对目前在水产制品中山梨酸检测方法存在着提取困难的问题，本文引入超声辅助提取的方法，提高水产制品的提取率，提高检测的回收率和准确性。

1 材料与方法

1.1 仪器

Aligent1260高效液相色谱仪、高速组织粉碎机、超声波清洗器、天平。

1.2 试剂

山梨酸标准品、氨水溶液(1+99)、亚铁氰化钾溶液(92克/升)、乙酸锌溶液(183克/升)、乙酸铵溶液(20毫摩/升)、甲酸-乙酸铵溶液(2毫摩/升甲酸+20毫摩/升乙酸铵)。

图1 山梨酸图谱

1.3 色谱条件

色谱柱：C18柱，柱长250毫米，内径4．6毫米，粒径5微米，流动相：甲醇+乙酸铵溶液（5：95），流速：1毫升/分，检测波长：230纳米，进样量：10微升。

图2 山梨酸标准曲线图

1.4 试验方法

将100个鳕鱼片（干），用高速组织粉碎机制样，在试样中准确称取2克，共20份，分别放置50毫升具塞离心管中（其中10份添加相同量的山梨酸标准溶液，作为测量回收率的样品，剩余10份作为测中山梨酸含量的样品），加水约25毫升，涡旋混匀，于50℃水无超声，50℃水超声15、20、25、30分钟，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2毫升和乙酸锌溶液2毫升，混匀，于8000转/分离心5分钟，将水相转移至50毫升容量瓶中，于残渣中加水20毫升，涡旋混匀后超声5分钟，于8000转/分离心5分钟，将水相转移到同一50毫升容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0．22微米滤膜，待液相色谱测，每种条件做双平行，取平均值。外标法定量，谱图如图1，标准曲线如图2。

图3 不同处理条件下山梨酸含量的变化

2 结果与讨论

2.1 不同处理条件下样品中山梨酸含量变化

根据图3可以看出，超声对样品中山梨酸测定含量有一定影响，同样50℃水温下，有超声比没有超声作用，测定含量高出0．06克/公斤以上，主要原因在超声波使样品中的山梨酸更容易释放出来，残留在样品中的山梨酸减少。

2.2 不同处理条件下样品中山梨酸的回收率变化

图4 不同处理条件下山梨酸回收率变化

从图4中的变化趋势可以看出，超声作用较无超声作用可以明显提高样品中山梨酸的回收率，原因同样可能是超声波可促进山梨酸从样品游离到溶液中，使得回收率变高。同时，可以发现随着超声时间延长，回收率不断增加，但25分钟与30分钟基本一致。

通过以上试验结果，超声波辅助提取水产制品中的添加剂——山梨酸可以起到提高检测准确性的目的。同时也说明在食品检测领域，超声波有提高某些目标物质提取率的作用，是很好的辅助提取措施。