IMP3基因在葡萄胎中的表达及其意义

张梅娜 张丽娟 李英惠 段志敏 陈 丽 董 静 张 娜 崔 娜 宋 洁 赵敏英

IMP3基因在葡萄胎中的表达及其意义

张梅娜①张丽娟②*李英惠①段志敏①陈 丽①董 静①张 娜①崔 娜①宋 洁①赵敏英③

目的：探讨IMP3基因在葡萄胎中的表达及其意义。方法：应用免疫组织化学链霉亲和素-过氧化物酶(SP)法检测IMP3基因在不同转归患者初次清宫葡萄胎组织中的表达。结果：IMP3基因在人绒毛膜促性腺激素(HCG)＞2×105mIU/ml患者和HCG＜2×105mIU/ml患者中均有表达；IMP3基因在HCG＞2×105mIU/ml葡萄胎患者中阳性表达率为90%，在HCG＜2×105mIU/ ml患者中的表达率为78%，两者比较差异有统计学意义(x2=2.245，P＜0.05)。在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者中，后来发展为侵蚀性葡萄胎患者的IMP3基因表达阳性率高，组间比较差异有统计学意义(x2=10.719，P＜0.05)；HCG＜2×105mIU/ml葡萄胎患者中，后来发展为侵蚀性葡萄胎患者的IMP3基因表达阳性率高，组间比较差异有统计学意义(x2=14.438，P＜0.05)。结论：IMP3基因作为一种特异性很高的胞浆标志物，表达于葡萄胎合体滋养细胞，在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎组织中表达率高。IMP3基因与葡萄胎的转归密切相关，有望成为判断葡萄胎的发生、发展及转归的标志物。

IMP3基因；滋养细胞疾病；葡萄胎；侵蚀性葡萄胎；免疫组织化学

滋养细胞疾病(gestational trophoblastic diseases，GTD)是一组来源于胎盘绒毛滋养细胞的疾病，根据组织学将其分为葡萄胎(hydatidiform mole，HM)、侵蚀性葡萄胎(invasive hydatidiform mole，IHM)、绒毛膜癌(choriocarcinoma，CCA)及胎盘部位滋养细胞肿瘤。由于目前诊断手段及滋养细胞疾病标志物特异性的限制，只能在检测到血β亚基人绒毛膜促性腺激素(β-human chorionic gonadotropin，β-HCG)未能如期下降或影像学发现异常回声时，方能诊断侵蚀性葡萄胎并进行治疗，尚未能早期判断其预后及进行相应治疗，因此新的标志物和治疗靶点已经成为基础研究者和临床医师关注的焦点。本研究通过检测IMP3基因在葡萄胎不同转归患者初次清宫葡萄胎组织中的表达差异，进一步分析IMP3基因在葡萄胎向侵蚀性葡萄胎演变过程中的作用机制，以探讨该基因在葡萄胎发生和发展过程中的作用，以及与转归之间的关系，为早期诊断侵蚀性葡萄胎以及治疗监测提供帮助。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取1990年7月至2010年7月在河北医科大学第二医院、首都医科大学存档处葡萄胎患者首次清宫石蜡标本，根据本化验室HCG检测的最高稀释度数值为2×105mIU/ml，将其分为HCG＞2×105mIU/ml组和HCG＜2×105mIU/ml组，每组100例。HCG＞2×105mIU/ml组年龄20～53岁，平均年龄(32.05±0.93)岁；HCG＜2×105mIU/ml组年龄19～54岁，平均年龄(33.66±1.01)岁；两组患者年龄无显著性，具有可比性。随访4个月，部分患者血β-HCG下降后又上升、或持续平台期超过4周而确定为侵蚀性葡萄胎。

1.2 仪器及试剂

采用OLYMPUS-CX21型光学照相显微镜(日本OLYMPUS公司)；ZPJ-1型展片机(天津)；LEICARM2135石蜡切片机(德国)。兔抗人的IMP3多克隆抗体(英国Abcam公司)；免疫组织化学试剂盒(北京鼎国生物技术有限公司)；二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)显色盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；氨丙基三乙氧硅烷(3-amino propyltri ethoxy silane，APES)防脱片试剂(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.3 试验方法

所有蜡块标本以4 μm厚度切片制片，每张切片经苏木精-伊红(hematoxylin eosin，HE)染色常规病理形态学观察证实后采用链霉亲和素-过氧化物酶(streptavidin-perosidase，SP)法进行染色。

1.4 结果判定

IMP3基因主要位于细胞浆，以细胞浆内出现棕黄色或棕褐色的染色定为阳性。参照许良中等[1]的免疫组织化学反应结果的评定标准，综合考虑切片中阳性细胞数占所观察同类细胞数的百分比，阳性细胞数分为4个等级，即0～4分：≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，≥51%为3分：根据显色程度判定阳性程度分为4级：基本不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将每张切片的着色程度得分与着色程度百分率相乘，最后得分，0～1分为阴性(－)，2～3分为弱阳性(＋)，4～6分为中等阳性(＋＋)，6分以上为强阳性(＋＋＋)，最后用双盲法进行资料统计。

1.5 统计学方法

应用SPSS13.0统计软件进行数据处理分析，各组内进行x2检验，组间用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IMP3基因在葡萄胎中的表达情况

免疫组织化学反应结果可见棕黄色或棕褐色颗粒位于葡萄胎细胞的细胞浆中，IMP3基因在葡萄胎中均有表达，但是以HCG＞2×105mIU/ml组的葡萄胎患者为主，其中IMP3基因表达强阳性的44例(占44%)，表达阳性的32例(占32%)，表达弱阳性的14例(占14%)，其表达阳性率为90%；HCG＜2×105mIU/ml组的葡萄胎患者中，IMP3基因表达强阳性的19例(占19%)，表达阳性的26例(占26%)，表达弱阳性的33例(占33%)，其表达阳性率为78%，两组葡萄胎患者MP3基因表达阳性率比较，其差异有统计学意义(x2=2.245，P＜0.05)，见表1。

表1 IMP3基因在葡萄胎中的表达情况

2.2 HCG与葡萄胎转归之间的关系

HCG＞2×105mIU/ml组的100例葡萄胎患者中，有21例后来发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为21%；HCG＜2×105mIU/ml组的100例葡萄胎患者中，有8例发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为8%，两组比较差异有统计学意义(x2=5.106，P＜0.05)。研究结果表明，HCG越高的葡萄胎患者，将来发展为侵蚀性葡萄胎的可能性越大。

2.3 IMP3基因在葡萄胎中的表达与转归的关系

(1)IMP3基因在HCG＞2×105mIU/ml组葡萄胎中的表达与转归的关系。HCG＞2×105mIU/ml组的100例葡萄胎患者中，IMP3基因表达强阳性44例，其中有17例后来发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为39%，IMP3基因表达阳性32例中，有4例后来发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为13%，IMP3基因表达弱阳性的14例和表达阴性的10例中，未发展为侵蚀性葡萄胎的，组间比较差异有统计学意义(x2=10.719，P＜0.05)。

(2)IMP3基因在HCG＜2×105mIU/ml组葡萄胎中的表达与转归的关系。HCG＜2×105mIU/ml组的100例葡萄胎患者中，IMP3基因表达强阳性的患者19例，其中有6例患者转归后发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为32%，表达阳性的患者26例，其中有2例后发展为侵蚀性葡萄胎，转归率为8%，表达弱阳性的33例患者和表达阴性的22例患者中，后来没有发展为侵蚀性葡萄胎的，组间比较差异有统计学意义(x2=14.438，P＜0.05)。

3 讨论

目前，临床上评价葡萄胎的高危因素主要采用病理组织学和影像学的手段，随着生物医学和分子生物学的不断进展，基因的检测已经成为葡萄胎早期诊断，筛查高危因素以及判断预后的指标，从而为葡萄胎的诊断和靶向治疗开辟了新的领域，提供了新的思路。

IMP3基因(Insulin-like growth factor -ⅡmRNA-binding protein 3)又称为L523S或K同源区域控制癌组织中过度表达(KOC)，是一种新识别的RNA结合蛋白，是胰岛素生长因子信使RNA结合蛋白之一。IMP3基因定位于染色体7p11.5，包含了580个氨基酸的残基，被4350个核苷酸mRNA转录所编码。通过使用cDNA文库和大规模的DNA印迹技术发现，该基因在胰腺癌和肺癌中均有相应的表达，而且与最初胰腺癌克隆的KCO是同源基因[2-3]。研究发现，在胚胎早期形成的时期，IMP3基因在上皮组织，胎盘组织和肌肉组织中均有表达，但在成人组织中却未发现表达。在胚胎的形成时期，IMP3基因在结合，转录和稳定胚胎胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factorⅡ，IGF Ⅱ)过程中起着非常重要的作用。IMP3基因可以间接调控IGF Ⅱ基因的表达，而IGF Ⅱ通过激活和结合IGFⅠ受体，使酪氨酸激酶氧化磷酸化，氧化磷酸化的IGFⅠ受体再将传导促有丝分裂的信号传到细胞内，参与肿瘤的形成过程[4-6]。因此，可以推测IMP3基因通过稳定IGFⅡmRNA参与癌变，也可能结合和影响其他mRNA来影响潜在的恶性细胞。IMP3基因可以调节CD24，CD44，细胞粘附分子(ALCAM，SYNCAM，MCAM)和基质金属蛋白酶Ⅰ的表达，而这些分子均与细胞的粘附和肿瘤的侵袭性有密切关系。此外，IMP3基因还可促进白血病细胞的增殖，表明是一种胚胎性细胞，可能在调控细胞的增殖方面起着非常重要的作用。

目前许多研究发现，IMP3基因与多种肿瘤组织的发生和发展有密切关系。李康华等[7]采用免疫组织化学的方法，检测了IMP3基因在骨肉瘤组织以及骨软骨瘤组织中的表达情况，结果发现，在骨肉瘤组织中IMP3基因的表达明显增加，这提示了IMP3基因的表达活化可能与骨肉瘤的发生有关系，但是具体的作用机制尚需要进一步的研究。Jiang等[8]在肾细胞癌中也发现，IMP3基因表达增加与恶性生物学行为有密切关系，并报道了在TNMI期肾细胞癌中IMP3基因表达阳性的患者的5年生存率为44%，而表达阴性的患者的5年生存率却高达98%。而在Ⅱ期和Ⅲ期肾细胞癌中阳性表达者5年生存率分别为41%和16%。Parker等[9]发现IGF-IR同患者病死率的增加有密切关系，IGF-IR和IMP3基因作为肾透明细胞癌患者的预后因子，在一定程度上有一定的可重叠性。研究发现胰腺组织中IMP3基因过度表达可导致腺泡细胞的增殖和化生，提示IMP3基因可能与恶性组织的侵袭性有关系。

在妇科恶性肿瘤方面，Zheng等[10]通过免疫组织化学的方法研究发现，IMP3基因在Ⅰ型子宫内膜癌中表达微弱，而在Ⅱ型子宫内膜癌中却明显表达，进而指出IMP3基因的表达与Ⅱ型子宫内膜癌有密切关系，并与子宫内膜肿瘤病变中的侵袭性组织学形为有很大的关系，可能是具有侵袭性生物学行为的标记物。在不同的子宫内膜癌的癌前病变中IMP3基因表达不同。Vikesaa等[11]发现，IMP3基因可能是转化为Ⅱ型子宫内膜癌之前的早期事件，有可能成为诊断子宫内膜癌有意义的指标。

越来越多的研究证实，IMP3基因与人类恶性生物学行为密切相关，可以在许多肿瘤组织中表达，在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。IMP3基因表达的改变是葡萄胎恶变的早期事件。葡萄胎的恶性转化是多因素的作用，以后的研究除致力于IMP3基因使滋养细胞侵袭性改变的机制外，应筛查一些相关性强的基因，以期对葡萄胎的恶变早期预测。本实验研究结果显示，IMP3基因蛋白在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者和HCG＜2×105mIU/ml的葡萄胎患者中均有表达，但在HCG＞2×105mIU/ml的葡萄胎患者中，IMP3基因的阳性表达率高。表明IMP3基因作为一种特异性很高的胞浆标记物表达于葡萄胎中，而且有随滋养层细胞增生程度的增加而增加的趋势，差异有显著意义，提示IMP3基因表达增加在葡萄胎的进展中起重要作用，可能会作为预测葡萄胎恶变的指标。

4 结语

目前，葡萄胎患者的随访主要靠动态观测血β-HCG的变化及临床表现，具有滞后性，尚无早期预测葡萄胎恶变的方法，如能在各项研究中筛检一些相关性强的基因，独立或结合应用于葡萄胎恶变的预测，IMP3基因的表达增强在葡萄胎的形成和恶变过程中起着重要的作用可能是葡萄胎恶变的相关因素，有可能成为预测葡萄胎恶变的早期指标[12]。

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The expression and significance of IMP3 gene in hydatidiform mole/

ZHANG Mei-na, ZHANG Li-juan, LI Ying-hui, et al//
China Medical Equipment,2017,14(9):81-84.

Objective: To investigate the expression and significance of IMP3 in hydatidiform mole. Methods: Streptavidin-peroxidase (SP) of immunohistochemistry was applied to detect expression of IMP3 gene in hydatidiform mole tissue of different outcome patients after the first cleaned of their uterus. Results: The IMP3 gene could expressed whether HCG was higher than 2X105mIU/mL (the positive expression rate was 90%) or lower than 2×105mIU/mL ( the positive expression rate was 78%) in patients, and the difference of the positive expression rate was statistically significant (x2=2.245, P＜0.05). In the patients with hydatidiform mole whose HCG was more than 2×105mIU/ mL, the positive expression rate of IMP3 gene was higher in a part of patients who developed into invasive hydatidiform mole, and the difference among different groups was statistically significant (x2=10.719, P＜0.05). In the patients with hydatidiform mole whose HCG was less than 2×105mIU/mL, the positive expression rate of IMP3 gene also was higher in a part of patients who developed into invasive hydatidiform mole, and the difference among different groups also was statistically significant (x2=14.438, P＜0.05). Conclusion: IMP3 gene which is a higher specificity biomarker in endochylema and it can be expressed in syncytiotrophoblast of hydatidiform mole. The expression rate of IMP3 gene is higher in the hydatidiform mole tissue which HCG was higher than 2×105mIU/mL. There is a closed relationship between IMP3 gene and the outcome of hydatidiform mole, and it may become a biomarker for determining the happen, development and outcome of hydatidiform mole.

IMP3 gene; Gestational trophoblastic diseases; Hydatidiform mole; Invasive hydatidiform mole; Immunohistochemistry

Department of Gynecology and Obstetrics, The First Central Hospital of Baoding, Baoding 071000, China.

1672-8270(2017)09-0081-04

R737.33

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.09.022

2017-02-28

①保定市第一中心医院东院妇科 河北 保定 071000

②河北医科大学第二医院妇科 河北 石家庄 050000

③石家庄市第一医院生殖科 河北 石家庄 050000

*通讯作者：lijuan35@sina.com

张梅娜,女,(1980- ),硕士，主治医师。保定市第一中心医院东院妇科，从事妇科诊治工作。