白细胞介素17单核苷酸多态性及血浆水平与慢性丙型肝炎感染的相关性研究

陈兴壮，纪海容

（海南省三亚市中医院 检验科，海南 三亚 572000）

白细胞介素17单核苷酸多态性及血浆水平与慢性丙型肝炎感染的相关性研究

陈兴壮，纪海容

（海南省三亚市中医院 检验科，海南 三亚 572000）

目的探讨白细胞介素17（IL-17）单核苷酸多态性及血浆水平与慢性丙型肝炎感染的相关性。方法将200例慢性丙型肝炎患者作为观察组，150例体检健康者作为对照组。采用TaqMan检测系统提取检测IL-17 SNPS基因组DNA；采用Elisa检测法测定IL-17水平。对比两组研究对象IL-17 rs8193036及rs2275913位点等位基因及基因型分布；对比两组研究对象IL-17多态性与HCV基因型的关系；对比两组研究对象IL-17水平。结果观察组IL-17 rs8193036位点等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位点等位基因A、G分布多于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组IL-17 rs8193036位点CC、CT及TT基因型分布，RS2275913基因型AA、AG及GG分布多于对照组，差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者IL-17水平（98.73±28.65）高于对照组（70.27±18.53），差异有统计学意义（P＜0.05）。结论IL-17水平的升高可能是慢性丙型肝炎感染的因素之一。

白细胞介素17；血浆水平；慢性丙型肝炎

慢性丙型肝炎（chronic hepatiits C，CHC）是一种由丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）引起的疾病，该病具有传染性和易于发展为慢性疾病的特点[1]。据2011年世界卫生组织统计，该病在全世界的患者总数高达1.3亿～1.7亿人，且该病每年的病死人数超过3 500万人[2]。目前，慢性丙型肝炎的研究机制探讨尚不清楚。就现存研究范围来讲，对该病的机制研究主要集中在白细胞介素28B（IL-28B）上，对白细胞介素 17（Interleukin-17，IL-17）与该病关系的报道较少。米寅等[3]在对IL-28B基因多态性与丙型肝炎易感性的关系中指出，中国人群IL-28B rs8099917的基因多态性在一定程度上影响着丙型肝炎的发生。丛瑞等[4]在研究中指出，IL-28B对我国丙型肝炎患者的自发清除影响不显著。与此同时，南月敏等[5]在研究中指出，目前关于IL-17与CHC患者感染的机制研究十分不清楚。因此本研究旨在探索IL-17单核苷酸多态性及血浆水平与CHC感染的相关性，为日后CHC机制探索提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取海南省三亚市中医院2012年4月-2016年4月收治的CHC患者200例作为观察组。其中，男性121例，女性79例，年龄21～82岁，平均（36.2±0.7）岁。同时选取150例体检健康者作为对照组。其中，男性78例，女性72例，年龄23～76岁，平均（34.5±1.2）岁。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入标准

所有患者符合①②③中的1项，且同时符合④⑤项。①感染CHC病毒超过6个月；②发病时间不明确，既往无肝炎病史，但通过肝组织病理检查确定为慢性肝炎者；③患者症状体征及实验室检查、影像学检查结果可确诊为丙型肝炎患者；④所有患者血清抗HCV抗体及HCV-RNA检测结果显示为阳性，且HCV RNA定量检测不超过15 IU/ml；⑤所有患者均未接受过干扰素联合抗病毒药物治疗[6]。

1.3 排除标准

①患者合并其他类型肝炎者；②患者合并人类免疫缺陷病毒感染；③患者同时伴有恶性肿瘤等严重疾病者；④患者伴有严重心脑系统疾病及其他血液系统疾病者；⑤患者伴有精神意识障碍者；⑥患者为妊娠期或哺乳期妇女。

1.4 试剂来源及各指标检测方法

抗 HCV抗体、HCV RNA、HCV基因型、IL-17 SNPS检测及IL-17水平测定：抗HCV（上海生物工程技术有限公司），酶联免疫吸附法（Elisa）；HCV RNA（上海罗氏诊断有限公司），COBAS TaqMan系统；IL-17 SNPS基因组DNA定量分析（美国Thermo公司），NanoDrop 2 000C紫外分光光度仪；IL-17 SNPS检测提取基因组DNA（美国Applied Biosystems公司），TaqMan检测系统；IL-17水平测定（美国RapidBiocab公司），Elisa。

以上所有指标检测完全按照产品说明书进行操作。HCV基因分型参照高英堂等[7]在HCV基因分型芯片的研制和临床应用中的HCV基因分型芯片技术检测。

1.5 观察指标

对比两组研究对象IL-17rs8193036及rs2275913位点等位基因及基因型分布；对比两组研究对象IL-17多态性与HCV基因型的关系；对比两组研究对象IL-17水平。

1.6 统计学方法

均采用SPSS17.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以频数（构成比）表示，组间比较使用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象I L-17等位基因分布

观察组IL-17 rs8193036位点等位基因C、T分布，IL-17 rs2275913位点等位基因A、G分布多于对照组，差异无统计学意义。见表1。

2.2 两组研究对象I L-17基因型分布

观察组IL-17 rs8193036位点CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布多于对照组，差异不具有统计学意义。见表2。

2.3 I L-17多态性与H C V基因型的关系

观察组200例患者全部进行HCV基因型检测。其中HCV基因I型290例、II型102例、III型4例、IV型4例。HCV基因I型IL-17 rs8193036 T位点及rs2275913 A位点基因分布多于II型，差异不具有统计学意义。HCV基因I型IL-17 rs8193036 C位点及rs2275913 G位点基因分布少于II型，差异不具有统计学意义（见表3）。HCV基因I型IL-17 rs8193036 CC、CT分布及rs2275913 AA分布少于II型，差异无统计学意义。HCV基因I型IL-17 rs8193036 TT分布及rs2275913AG、GG分布多于II型，差异无统计学意义。见表4。

表2 两组研究对象I L-17基因型分布 例

表3 观察组I L-17等位基因分布与H C V基因型的关系例（%）

表4 观察组I L-17基因型分布与H C V基因型的关系 例（%）

2.4 两组的I L-17水平比较

观察组IL-17水平高于对照组，差异有统计学意义。见表5。

表5 两组I L-17水平比较 （±s）

表5 两组I L-17水平比较 （±s）

组别IL-17水平观察组（n=200） 98.73±28.65对照组（n=150） 70.27±18.53 t值 10.613 P值 0.000

3 讨论

CHC是指由不同病因所引起的肝脏坏死和炎症，其病程一般均超过6个月[8]。该病的主要发生原因为HCV感染、嗜酒及长期服用肝毒性药物。CHC的发展过程呈波动型或持续进行型[9]。若治疗不当往往可导致肝硬化和肝细胞癌的发生。HCV侵袭人体后所发生的反应机制比较复杂，根据目前研究报道认为丙型肝炎的发生机制与细胞免疫功能异常有关[10]。

本研究在探讨IL-17 rs8193036及rs2275913位点等位基因中发现，观察组IL-17 rs8193036位点等位基因C、T分布及rs2275913位点等位基因A、G分布与对照组差异无统计学意义。同时在IL-17基因型分布比较中得出：观察组患者IL-17 rs8193036位点CC、CT及TT基因型分布，rs2275913基因型AA、AG及GG分布与对照组差异无统计学意义。这表明IL-17 SNPS与CHC感染无关。在IL-17多态性与HCV基因型关系的探讨中得出，HCV基因 I型 IL-17rs8193036C、T位点及rs2275913 A、G位点基因分布与II型差异无统计学意义，HCV 基因 I型 IL-17 rs8193036 CC、CT、TT 分布及rs2275913 AA、AG、GG分布与II型无差异。这表明IL-17多态性与HAV基因型无关。以上全部结果可能受到所选观察对象种族及例数偏差的影响。该试验所选观察对象均为黄种人，并不具有全球人群代表性。同时在样本例数的确定上受到病源获取及病源配合的限制，未达到大样本试验。因此该部分的结论尚需进一步加以确定。在对比两组研究对象血浆IL-17水平中得出，CHC患者的IL-17水平高于健康人群组成的对照组。这表明IL-17水平升高可能是感染HCV的重要原因之一。IL-17通过调节人体固有免疫能力及获得性免疫反应作用于肝脏疾病的进展过程中[11-13]。IL-17的细胞因子对人体的作用具有双重性。当机体处于急性炎症状态时，IL-17可迅速分泌，进而与外来危害物质形成对抗，保护机体不受外源有害物质危害。但是当机体处于其他原因而导致慢性炎症发生时，IL-17又会参与到慢性疾病的发展过程中，从而与机体免疫保护功能形成对抗[14]。同时，HCV侵袭人体的过程中往往导致CHC的发生[15]。因此IL-17可能是CHC病毒感染的因素之一。

综上所述，IL-17水平的升高可能是机体CHC感染的因素之一。但其单核苷酸多态性对CHC患者的影响无明确关系，需进一步进行研究。

[1]许敏,施海燕,蔡卫平,等.丙型病毒性肝炎患者流行及治疗现状调查[J].中华实验和临床病毒学杂志,2011,25(2):135-136.

[2]Word Health Organization.Avilable from:http://www.Who.Int/mediacentre/factsheets/fs164/zh/.index.html.

[3]米寅,高英堂,焦晓磊,等.IL-28B基因多态性与丙型肝炎易感性的关系[J].世界华人消化杂志,2013,21(2):182-187.

[4]丛瑞,佟小非,刘三都,等.白细胞介素28B(IL-28B)基因多态性与丙型肝炎病毒(HCV)感染者自发清除的相关性[J].首都医科大学学报,2012,33(3):326-329.

[5]南月敏,张玉果,孔令波,等.白细胞介素17基因多态性及血浆水平与慢性丙型肝炎病毒感染的关系[J].中华肝脏病杂志,2013,21(6):425-428.

[6]中华医学会肝病学分会,中华医学会传染病与寄生虫病学分会.丙型肝炎防治指南[J].中华肝脏病杂志,2004,12(4):194-198.

[7]高英堂,陈瑞阳,宋文芹,等.丙型肝炎病毒基因分型芯片的研制和临床应用[J].中华检验医学杂志,2004,27(10):690-693.

[8]穆彩琴,胡蕾苹,张璐,等.慢性丙型病毒性肝炎抗病毒治疗研究进展[J].中华实验和临床病毒学杂志,2013,27(4):310-313.

[9]赵青春,陈虹,范铁艳,等.肝移植后丙型病毒性肝炎复发与防治的进展[J].中华器官移植杂志,2014,35(2):124-127.

[10]米寅,高英堂,杜智,等.IL-28B基因多态性与丙型肝炎相关性研究进展[J].国际遗传学杂志,2012,35(4):224-228.

[11]CHANG Q,WANG Y K,ZHAO Q,et al.Th17 cells are increased with severity of liverin flammation in patientswith chronic hepatitis C[J].Journal of Gastroenterology and Hepatology,2012,27(2):273-278.

[12]佟小非,尤红.IL-28B基因多态性对干扰素治疗丙型病毒性肝炎应答的影响[J].首都医科大学学报,2012,33(3):334-337.

[13]KIM E S,KIM S W,MOON C N,et al.Interactions between IL17A,IL23R,and STAT4 polymorphisms confer susceptibility to intestinal Bechcet's disease in Korean population[J].Life Sciences,2012,90(19):740-746.

[14]陈显,黄成垠,朱绍汶,等.丙型病毒性肝炎的基因分型方法及临床意义[J].临床输血与检验,2012,14(1):89-92.

[15]杨建军,李朝霞,田淑菊,等.慢性丙型病毒性肝炎患者自身抗体动态变化与HCV-RNA基因型关系研究[J].国际检验医学杂志,2012,33(24):2960-2962.

（张西倩 编辑）

Correlations of IL-17 single nucleotide polymorphisms and plasma level with chronic hepatitis C infection

Xing-zhuang Chen,Hai-rong Ji
(Clinical Laboratory,Sanya Hospital of Traditional Chinese Medicine,Sanya,Hainan 572000,China)

ObjectiveTo investigate the association between interleukin-17 single nucleotide polymorphisms(SNPs)and plasma levels and chronic hepatitis C infection.MethodsIn this study,200 patients of chronic hepatitis C were included in observation group,150 cases of healthy subjects were enrolled into control group.TaqMan detection system was used to extract genomic DNA for detection of IL-17 SNPs.ELISA was applied to detect IL-17 level.The IL-17 level was compared between the two groups.The alleles and genotype distribution of IL-17 rs8193036 and rs2275913 loci were compared between the two groups.The relationships of IL-17 polymorphisms with the HCV genotypes were analyzed in the two groups.ResultsThe distribution of alleles C and T of rs8193036 locus and alleles A and G of rs2275913 locus inIL-17gene in the observation group was more than that in the control group,but the differences were not statistically significant(P＞0.05).The distribution of CC,CT and TT genotypes of rs8193036 locus and AA,AG and GG genotypes of rs2275913 locus ofIL-17gene in the observation group was more than that in the control group with significant differences(P＞0.05).The level of IL-17 in the observation group(98.73± 28.65)was higher than that in the control group(70.27±18.53),the difference was statistically significant(P＜0.05).ConclusionsElevated IL-17 level may be one of the factors of chronic hepatitis C infection.

IL-17;plasma level;chronic C hepatitis

R512.63

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.13.014

1005-8982（2017）13-0070-04

2016-12-08