金花葵和葵花叶提取物的体外抗氧化性的初步研究

李一婷++林书缘++葛冰洁++姜成哲++朴明淑

【摘 要】为了研究金花葵和葵花叶提取物的抗氧化性，本实验采用了DPPH·法来测定金花葵提取物、葵花叶提取物以及抗坏血酸对二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）的清除效果并进行对比，结果显示，此三种物质均能够清除DPPH·，都具有良好的抗氧化活性。在一定范围内，其浓度与清除率之间存在着良好的线性关系，其50%抑制浓度IC50分别是0.55mg/ml、0.81mg/ml、5.1x10-2mg/ml，抗氧化能力：抗坏血酸>金花葵提取物>葵花叶提取物。

【Abstract】In order to study the antioxidant activity of extracts of sunflower and sunflower leaves， this experiment used the DPPH· method to determine the scavenging effect of the extracts of sunflower， and the extracts of the leaves of sunflower and ascorbic acid on two benzoic acid radical radical （DPPH·）. The results showed that all the three substances could remove DPPH· and had good antioxidant activity. In a certain range， there is a good linear relationship between the concentration and the clearance rate. The 50% inhibition concentration of IC50 was 0.55mg/ml， 0.81mg/ml and 5.1x10-2mg/ml. Antioxidant capacity： ascorbic acid > the extract of golden sunflower > the extract of sunflower leaves.

【关键词】金花葵；葵花叶；DPPH；抗氧化性

【Keywords】sunflower； sunflower leaf； DPPH； antioxidant activity

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1673-1069（2017）08-0189-02

1 引言

金花葵（Aurea？HELIANTHUS），又名菜芙蓉，也称野芙蓉。金花葵具有良好的清热解毒、镇痛消炎、降血脂、免疫调节、抑制肿瘤细胞、抗氧化、抗衰老等作用，具备很强的药用价值。结合近年来的报道文献可以发现，金花葵中黄酮类化合物是主要的生物活性物质，危晴等[1]采用紫外分光光度法对金花葵籽中的总黄酮含量进行测定，结果显示，其总黄酮获得率为2.08%。兰蓉等[2]分别采用超声提取法、索氏提取法和有机溶剂回流法三种方法在金花葵的干花中进行总黄酮的提取，并且使用HPLC（高效液相色谱法）检测了这三种方法提取所得的总黄酮含量，由检测结果可知，有机溶剂回流法提取效果最佳，其总黄酮获得率为3.97%。

2 实验目的

本实验使用的葵花叶提取物是来自于向日葵的葵花叶提取物，向日葵是菊科向日葵属的一年生草本植物，向日葵的叶分为真叶和子叶。茎下部分叶片在开花前制造养分，主要供给根部生长，到开花时其功能基本结束。中上部叶片制造的养分主要供给花盘促使种子形成，葵花叶中含有多糖及多种微量元素，营养丰富，利用价值很高。[3]

维生素C，英文名：Vitamin C，又称：L-抗坏血酸，是多数生物的必需营养素。抗坏血酸在多数生物体内可以借助新陈代谢制造而来，人类例外。在生物体内，抗坏血酸是一种抗氧化剂，其作用是保护机体免于自由基的伤害。

3 实验过程

DPPH·是一种很稳定的氮中心的自由基，由于DPPH自由基在以300～400之间为中心处具有强烈的吸收，因此其溶液呈深紫色，并且在被中和之后变为浅黄色或无色。利用这一特性，通过记录DPPH在波长为517nm处吸光度值的变化即可判断其含量变化，从而对反应进行定量分析。[4-6]

金花葵提取物、葵花叶提取物和抗坏血酸都具有良好的抗氧化作用，本实验使用DPPH·法分别测定金花葵提取物、葵花叶提取物以及抗坏血酸对DPPH·自由基清除作用的强弱并进行比较，从而进一步对比这三种物质的抗氧化性能。

①實验材料

金花葵花，来自延吉郊区；葵花叶，采自龙井郊区。

②实验仪器

紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），电子分析天平（上海精天电子仪器有限公司）。

③实验试剂

无水乙醇；DPPH·

④实验方法

DPPH·标准溶液：配制成6.5x10-4mol/L的储液，存放于冰箱中备用，使用时用无水乙醇稀释成6.5x10-5mol/L的DPPH·溶液。

金花葵提取液：配制成浓度为1mg/ml溶液备用。

葵花叶提取液：配制成20mg/ml的溶液，摇匀，静置。使用时，吸取上清液1ml，加入9ml蒸馏水稀释为2mg/ml的溶液。

抗坏血酸溶液：配制成500μg/ml抗坏血酸溶液备用，用时稀释成100μg/ml。

⑤抗氧化作用的测定[7]

第一，取6支小试管，编号1-6，分别加入5μl、10μl、20μl、50μl、100μl、0μl 浓度为1mg/ml的金花葵提取物溶液（或分别加入12.5μl、25μl、50μl、75μl、100μl浓度为100μg/ml抗坏血酸溶液：或分别加入25μl、50μl、100μl、150μl、200μl、0μl浓度为2mg/ml的葵花叶提取物溶液），再蒸馏水补足至100μl，向6支试管中分别加入990μl 6.5x10-5mol/L DPPH·溶液，震荡混匀，30min后测定波长为517nm处的吸光值A，其中，试管6为不含提取物溶液的对照组。endprint

第二，自由基清除率的计算公式：

清除率（%）=（A对照-A抗氧化剂）/A对照x100%

4 实验结果

第一，金花葵提取物浓度与DPPH·清除率。

由表1可以看出，在0.05～1.00mg/ml范围内，金花葵提取物对DPPH·的清除作用随着濃度的增加而增强。

表1 浓度与清除率

■

第二，金花葵提取物浓度与对DPPH·的清除率存在良好的线性关系，其50%抑制浓度IC50=0.55mg/ml，而当金花葵提取物溶液浓度达到1.15mg/ml时清除率接近100%。

表2 葵花叶提取物浓度与DPPH·清除率

■

由表2可以看出，在0.125～1.000mg/ml范围内，葵花叶提取物对DPPH·的清除作用随着浓度的增加而增强。

葵花叶提取物的浓度与对DPPH·的清除率存在良好的线性关系，其50%抑制浓度为IC50=0.81mg/ml，而当葵花叶提取物溶液浓度达到1.63mg/ml时，清除率接近100%。

第三，从抗坏血酸溶液浓度与DPPH·的清除率可以看出，在一定浓度范围内，抗坏血酸溶液对DPPH·的清除作用随着浓度的增加而增强。

抗坏血酸浓度与对DPPH·的清除率之间存在良好的线性关系，其50%抑制浓度IC50=5.1×10-2mg/ml；而当抗坏血酸溶液浓度达到10×10-2mg/ml时，清除率接近100%。

对比三者的IC50可以判断其抗氧化性：抗坏血酸>金花葵提取物>葵花叶提取物。

5 结论

通过实验发现金花葵提取物、葵花叶提取物和抗坏血酸都具有良好的抗氧化性，三者对DPPH·的50%抑制浓度IC50分别为0.55mg/ml、0.81mg/ml、5.1x10-2mg/ml，即抗氧化能力：抗坏血酸>金花葵提取物>葵花叶提取物。

【参考文献】

【1】危晴，兰蓉，辛秀兰，等.紫外分光光度法测定金花葵籽中总黄酮的含量[J].安徽农业科学，2012，40（12）：7050+7060.

【2】兰蓉，李浡，刘卉，等.金花葵总黄酮的提取和含量测定[J].江苏农业科学， 2012，40（12）：280-282.

【3】朱元龙.紫苏叶抗氧化物的提取分离及其在油脂中抗氧化应用研究[D]. 福州：福建农林学院，2010.

【4】Om P. Sharma and Tej K. Bhat. DPPH antioxidant assay revisited[J]. Food Chemistry， 2009， 113（4） ：1202-1205.

【5】Lu Y R，Fool L Y.Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from apple pomace[J].Food chemistry，2000，68（1）：81-85.

【6】Leong L P，Shu G.An investigation of antioxidant capacity of fruits in Singapore markets[J].Food chemistry，2002，76（1）：69-75.

【7】郝晓丽，许申鸿，杭瑚，等.用两种方法评价四种食物抗氧化剂的抗氧化活性[J].食品科学，2004，24（3）：127-129.endprint