茶树油抗菌液的制备研究*

文光科

（广东富阳生物科技有限公司，广东 河源 517583）

茶树油抗菌液的制备研究*

文光科

（广东富阳生物科技有限公司，广东 河源 517583）

采用茶树油为原料，制备抗菌液，并对其杀菌试验和皮肤的刺激性试验进行研究。试验结果表明，茶树油抗菌液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌等多种致病菌和真菌有很好的杀灭和抑制作用，而对皮肤只有轻微的刺激作用。

茶树油（TTO）；抗菌液；杀菌试验

由于化学消毒剂对人体具有较强的刺激性和危害性，而且对病毒的杀灭效果不理想。研究人员发现消毒剂还会“训练”细菌，使其对抗生素药物也产生耐药性，从而形成“超级病菌”［1］。因此，人们迫切希望能从天然中草药中研制出抗菌作用强、无不良反应、使用方便、不会产生抗药性的中药抗菌液。但目前市场上的纯天然中药抗菌液不多。主要原因是天然的中药抗菌液抗菌活性低，只能杀灭多数细菌繁殖体、部分真菌和病毒，对耐药菌作用不佳，属于低效抗菌液，且性能价格比不合理，无法满足市场需求。

互叶白千层（Melaleuca alterngotia）的新鲜枝叶经水蒸汽蒸馏而得到的精油（俗称茶树油，Tea tree oil）茶树油广泛应用于制药、日化、食品、香料等行业应用于个人护理品、护发品、化妆品、口腔用品、宠物用品、空气清新剂、家庭清洁剂、消炎药品等100多种系列产品中［2］。由于茶树油中含有的松油烯-4-醇是一种主要的天然抗菌剂，其，其对细胞靶的作用方式是损毁病菌、病原体的细胞壁（膜），然后改变细胞成分。故微生物对许多抗菌素和磺胺药的获得性免疫（抗药性）的情况，对茶树油不会发生。然而，目前市场尚无纯天然的茶树油抗菌液产品。因此将茶树油研发成天然环保的抗菌液系列产品，用于空气清洁、家庭家居清洁、汽车清洁，皮肤清洁等方面，市场前景十分广阔，经济价值十分可观，是可持续发展的绿色产业。

1 材料与方法

1.1 茶树油抗菌液制备

1.1.1 主要成分：茶树油（TTO）100%(广东富阳生物科技有限公司提供)、聚山梨酯80医药级（吐温）(河南景昌化工产品有限公司提供)、薄荷脑(99%医药级，郑州市食代添骄化工有限公司提供)、丙三醇AR（广州市东征化玻仪器有限公司）、乙醇95%（食品级(普通级)，广州俱辉化工有限公司提供）、纯化水（符合中国药典2015年版，广东富阳生物科技有限公司提供）等。

1.1.2 实验步骤：称取原料茶树油、甘油、吐温，混合均匀。用烧杯称取原料薄荷脑于套式恒温器中加热溶解为薄荷脑液，加入茶树油、甘油、吐温的混合液中混匀，投入搅拌锅，加入乙醇、纯化水，搅拌30min后出料，成品检测合格后入库。

1.2 杀菌试验

1.2.1 材料

试验菌株：金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus，ATCC25903)、大肠杆菌（Escherichia coli，ATCC25922）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC27853)、白色念珠菌（Candida albicans，ATCC103231)、以上菌种代数为4～6代，由中国人民解放军军事医学科学院提供。试验样品：茶树油抗菌液。主要仪器：微孔滤膜滤器（上海信步）、滤膜（南京艾宇琦膜科技有限公司）、气泵（ZH-ZKL007）等。

1.2.2 方法

1）菌悬液的制备：依据文献［3］进行试验，含菌量为 1×104 cfu/ml～ 9×104 cfu/ml。

2）过滤冲洗法鉴定试验：依据文献［3］及文献［4］进行试验。试验菌为金黄色葡萄球菌。试验设4个处理：①试验样品＋菌悬液；②（试验样品＋菌悬液）＋过滤冲洗法处理；③（菌悬液＋水〉＋过滤冲洗法处理；④菌悬液。分为A、B2组进行对比试验，A组：试验样品用原液，处理时间lmin，B组：试验样品用50%的稀释液，处理时间lmin。试验重复3次，试验温度20～22℃。

3）悬液定量杀菌试验：根据文献［5］及文献［6］进行试验。用试验样品原液，处理时间分别为l、2、5。试验重复3次，试验温度20～22℃，试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌。

4）稳定性试验：依据文献［3］及文献［4］进行试验。试验菌株：大肠杆菌、白色念珠菌。保存条件：样品密封包装，放置37℃的恒温箱中，存放3个月（有效期2a试验），试验温度 20～22℃。

1.3 皮肤刺激试验

1.3.1 材料和动物

受试物：茶树油抗菌液、液体、原样直接供试。动物：新西兰家兔（普通级）3只，体重2.0～3.0kg，由广东省医学实验动物中心提供。

1.3.2 方法

依据文献［6］，实验前24h先将家兔背部毛左右各剪去约3 cm×3cm。次日，在确定无皮肤损伤情况下用药，将受试物0.5ml均匀涂抹在一侧2.5cm×2.5cm去毛区皮肤，另一侧作空白对照。敷药4h后用温水洗去残留物。每天涂抹一次，连续14d。在每次涂抹24h后观察结果，计算每天每只动物平均积分（刺激指数）判定皮肤刺激强度。皮肤刺激反应评分标准及皮肤刺激强度分级见表1～2。

表1 皮肤刺激反应评分标准

表2 皮肤刺激强度分级

2 结果与分析

2.1 过滤冲洗鉴定

过滤冲洗法鉴定试验结果见表3，由表3可知，A组：处理①平均生长菌落数为0cfu/ml，处理②平均生长菌落数为0cfu/ml，处理③与处理④平均生长菌落数相近，各处理间菌落数误差率为36.84%。阴性对照：稀释液、培养基均无菌生长。B组：处理①平均生长菌落数为1.47×103 cfu/ml，处理②平均生长菌落数为1.32×104cfu/ml，处理③与处理④平均生长菌落数相近，各处理间菌落数误差率为39.57%。阴性对照：稀释液、培养基均无菌生长。两组试验说明采用过滤冲洗法，可有效去除试验样品对金黄色葡萄球菌的作用，且该方法对试验菌无不良影响。

2.2 灭菌效果及稳定性

由表4可知，经3次重复试验表明：茶树油抗菌液在试验温度 20～22℃时，该试验样品原液，处理 lmin、2min、5min，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的杀灭率均为100%；样品于37℃的恒温箱中，存放3个月后，该试验样品原液，处理lmin，对大肠杆菌、白色念珠菌的杀灭率为100%。阴性对照：稀释液、培养基均无菌生长。

表3 过滤冲洗法鉴定试验结果

表4 茶树油抗菌液对金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的杀灭效果及稳定性

表5 茶树油抗菌液对家兔多次皮肤刺激反应评分

2.3 皮肤刺激试验

由表5可知，在观察期内，受试的新西兰家兔在涂抹茶树油抗菌液第4d皮肤勉强可见红斑，第5d明显可见红斑，第6～14d有重度到严重红斑。在14d观察期内未见水肿等异常反应，刺激指数为0.71。说明茶树油抗菌液对新西兰家兔皮肤刺激属轻度刺激性。

3 小结

采用过滤冲洗法可有效去除试验样品对金黄色葡萄球菌的作用，且该方法对试验菌无不良影响。该试验样品原液，处理lmin、2min、5min，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌的杀灭率均为100%；于37℃的恒温箱中，存放3个月后，样品原液对大肠杆菌、白色念珠菌的杀灭效果无影响。

皮肤刺激试验表明，新西兰家兔在涂抹茶树油抗菌液第4d皮肤出现红斑、在14d观察期内未见水肿等异常反应，刺激指数为0.71。说明茶树油抗菌液对新西兰家兔皮肤刺激属轻度刺激性。

[1]赵美丽．国内外化学消毒剂应用的研究进展[J]．社区医学杂志，2011，9（9）：8-12．

[2] 钟昌勇，陈海燕．茶树油的应用及市场前景[J]．林产化工通讯，2003，37（5）：31-35．

[3]国家卫生部．GB15979-2002一次性使用卫生用品卫生标准[S]．北京：中国标准出版社，2002．

[4]国家卫生部．消毒技术规范[S]．北京：中国标准出版社，2002．

[5]周南，宋丹丹，周建业．茶树油在皮肤领域的研究及进展[J]．江西中药材，2008，39（10）：74-77．

责任编辑/罗美娟

Preparation ofTea Tree Oil Antibacterial Liquid

Wen Guangke
(Guangdong Fuyang Biological TechnologyCo.,Ltd.,Heyuan,Guangdong 517583,China)

Tea tree oil was used as the rawmaterial to prepare antibacterial liquid,and its bactericidal test and skin irritation test were studied.The test results showed that tea tree oil antibacterial liquid had good killing and inhibiting effect on Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa,Candida albicansand other pathogenic bacteria and fungi,and onlya slight stimulation tothe skin.

tea tree oil;antibacterial liquid;bactericidal test

R285

A

1003-4382（2017）06-0040-04

2017-03-21

2017-05-20

文光科（1985—），男，海南东方人，助工，从事日用化工用品研发工作。