复合蛋白饮料中三聚氰胺高效液相色谱法的检测

□ 王如影 四川省德阳市食品药品安全检验检测中心

复合蛋白饮料中三聚氰胺高效液相色谱法的检测

□ 王如影 四川省德阳市食品药品安全检验检测中心

国家食品安全监督抽检实施细则（2017年版）中饮料种类中要求含有乳制品的饮料都需要检测三聚氰胺，本法用三氯乙酸溶液和乙腈提取，滤纸过滤方法检测，线性良好，相关系数为0.999 9，回收率在99%～110%，满足实验检测要求。

复合蛋白饮料；三聚氰胺；高效液相色谱法

蛋白质是组成人体一切细胞、组织重要成分。蛋白质主要成分为氨基酸，氮含量不超过30%，三聚氰胺中的分子式中氮含量为66%。现在普遍蛋白质测定方法为“凯氏定氮法”，原理是通过测出含氮量来计算蛋白质含量，因此，在食品中加入三聚氰胺会使蛋白质检测含量偏高，使不法商家在食品中加入三聚氰胺来增加蛋白质含量。

三聚氰胺（化学式：C3N3(NH2)3），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，属于化工原料，白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1 g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油和吡啶等，不溶于丙酮和醚类，对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。因此，快速准确检测样品中的三聚氰胺的残留量，对保护消费者的经济权益和人身安全有重要意义。三聚氰胺检测方法包括重量法、电位滴定法和高校液相色谱法等[1]，本次检测用是高效液相色谱法。

1 实验部分

1.1 原理

试样成分相对简单的样品用三氯乙酸溶液-乙腈提取，滤纸过滤后用高效液相色谱法检测，外标法定量。

1.2 仪器与实验材料

岛津高效液相色谱仪LC-2030（配有紫外检测器）；冷冻离心机TGL-16A（转速为5 000 r/min）；涡旋振荡器；50 mL带塞离心管；0.22 μm的微孔滤膜，有机相。

甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；水（超纯水）；柠檬酸（分析纯）；三氯乙酸（1%）；甲醇水溶液（50∶50）；辛烷磺酸钠（色谱纯）；氨水（25%）；三聚氰胺标准品（含量99%，Dr. Ehrenstorfer GmbH）。

1.3 溶液的配制

流动相A：乙腈；流动相B：称取柠檬酸2.10 g和辛烷磺酸钠2.16 g于 1 000 mL容量瓶中，用超纯水溶解，pH约为3。

标准溶液的配置：准确称取标准品0.1 g（精确到0.1 mg）于100 mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容到刻度线，配制成1 mg/mL的标准储备液，在4 ℃条件下避光保存。

用流动相将三聚氰胺储备液逐级稀释到浓度为2、4、8、12、16、20 μg/mL的标准工作液。

1.4 样品前处理

称取2 g（精确到0.01 g）的试样于50 mL带塞离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和5 mL的乙腈，超声提取10 min，冷冻离心。用湿润滤纸过滤，定容到25 mL。微孔滤膜过滤，供高效液相色谱用。

1.5 测定

高效液相色谱条件：C18柱4.6 mm×250 mm；流速为1.0 mL/min；柱温为40 ℃；波长为240 nm进样量10 μL。

2 结果分析

2.1 结果计算

试样中三聚氰胺的含量按下式计算：X=(C×V×1000)/(m×1000)。

式中：X—试样中三聚氰胺的含量，单位为mg/kg；

C—经查标准曲线计算所得进样液的浓度，单位为mg/L；

V—试样总稀释体积，单位为mL；m—样品量，单位为g。

2.2 标准曲线

三聚氰胺浓度在2～20 μg/mL内线性关系良好，回归方程为y=397 75x，相关系数为0.999 97。

2.3 方法的精密度

配置三聚氰胺浓度为20 μg/mL的溶液，分别进样测定计算相对标准偏差。测定结果见表1。

2.4 准确度实验

称取复合蛋白饮料2.0 g测定，在样品中加入已知的三个不同浓度三聚氰胺加标样，回收率在90%～110%，准确度和精密度均符合实验分析要求。样品添加回收率见表2。

表1 精密度（n=6）实验表

表2 复合蛋白饮料中样品中三聚氰胺的回收率表

3 结论

三聚氰胺的动物性实验表明，摄入量大或时间长将会在泌尿系统形成结石，引起肾功能衰竭，甚至引起死亡。必须准确测定食品中的三聚氰胺含量。

本方法利用高效液相色谱仪测定复合蛋白饮料中的三聚氰胺含量，本方法省去净化环节，节约成本，操作简便快速，重现性好，精密度和准确度均达到实验要求，能满足复合蛋白饮料中三聚氰胺的测定[2]。

[1]戚冬伟.电位滴定——联机测试法对饲料中的三聚氰胺残留量分析[J].畜牧与饲料科学,2009,30(1):77-79.

[2]黄艳红,丁健桦,邱昌福,等.液相微萃取-高效液相色谱法测定乳制品中的三聚氰胺[J].食品科学,2010,31(2):161-164.