羧甲基纤维素钠对4℃保存藏猪精液指标的影响

尼 玛，晋美多吉，赖 可，陈晓英，谭占坤，任子利

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850009；2.西藏自治区达孜县农牧局，达孜 850100；3.西藏自治区日喀则市动物疫病预防控制中心，日喀则 857000；4.西藏农牧学院动物科学学院，林芝 860000）

仔猪生产

羧甲基纤维素钠对4℃保存藏猪精液指标的影响

尼 玛1，晋美多吉2，赖 可3，陈晓英1，谭占坤4，任子利4

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏 拉萨 850009；2.西藏自治区达孜县农牧局，达孜 850100；3.西藏自治区日喀则市动物疫病预防控制中心，日喀则 857000；4.西藏农牧学院动物科学学院，林芝 860000）

试验旨在研究羧甲基纤维素钠（CMC）对藏猪精液4℃保存效果的影响，采用电刺激法采集健康藏猪精液，在改进的猪精液低温稀释液为基础液中，添加不同浓度的CMC（0、6、12、18和24 μmol/L），将藏猪种公猪新鲜精液稀释后于4℃环境保存至第5天，以藏猪精子活力、精子畸形率和精子顶体完整率为评价精液品质指标，探讨CMC对藏猪精液4℃保存效果的影响。结果显示：12 μmol/L CMC添加组藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率均极显著好于其他试验组（P＜0.01）。总之，在改进的猪精液稀释液中添加CMC 12 μmol/L可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质，该试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。

羧甲基纤维素钠（CMC）；藏猪；4℃环境；精液品质

4℃低温保存，精子代谢活动水平低，脂质过氧化程度低，保存时间比常温更长，同时可应用普通冰箱保存，经济方便。任子利等[1]研究了维生素C对藏猪精液4℃保存及其精子全基因组DNA甲基化的影响，陈晓英等[2-4]先后研究了红景天多糖、维生素E及不同稀释液对藏猪精液4℃保存效果的影响，为藏猪精液低温保存的进一步研究奠定基础。

羧甲基纤维素钠（Carmellose Sodium,CMC）又称羧甲基纤维素钠盐。具有黏合、增稠、增强、乳化、保水、悬浮等作用[5]。在食品应用中不仅是良好的乳化稳定剂、增稠剂，而且具有优异的冻结、溶化稳定性，并能延长贮藏时间。在稀释液中添加一定量的CMC可减缓精子沉降速度，延长沉淀时间，为使用前减少了摇匀次数，进而提高精液保存质量。张家庆等[6]研究表明在稀释液中添加CMC 16 μmol/L，可明显提高低温液态保存后猪的精液品质。本试验旨在探讨CMC对生活在高海拔环境的藏猪精液4℃保存的效果，以提高藏猪种公猪精液在4℃保存后的质量。以期为藏猪精液4℃保存提供更多的精液保护剂选择方案。

1 材料与方法

1.1 试验动物与材料

1.1.1 试验动物与试验地点 试验藏猪为3～5岁健康种公猪6头。试验时间为2017年5月，试验地点为西藏拉萨市达孜县某藏猪养殖专业合作社、西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所和西藏农牧学院动物科学学院。

1.1.2 主要设备与试剂 动物电刺激采精仪（MDW-1，成都华智开物科技有限公司），倒置荧光显微镜（IX73，奥林巴斯），电热恒温水槽（DKB-450A，上海森信），变频冰箱（BCD-649WDVC，海尔），-80℃冰箱（MDF-U33V，合肥荣事达三洋电器股份有限公司）。

食品级羧甲基纤维素钠（上海申光使用化学品有限公司）、考马斯亮蓝（国药集团化学试剂有限公司）、Diff-Quik Stain染液（北京普博斯）、亚卫精液稀释粉（丹麦）、速眠新Ⅱ（吉林省敦化市圣达动物药品有限公司）。

新鲜藏猪精液由西藏拉萨市达孜县某藏猪养殖专业合作社提供。

1.2 试验方法与内容

1.2.1 改进的低温稀释液配制 参照孙时军等[7]的试验结果，使用亚卫牌精液稀释剂作为基础稀释剂，在稀释后的精液中加入1%乙二醇作为低温保护剂。

1.2.2 精液采集及处理 采用速眠新Ⅱ（0.1 mL/kg）肌内注射麻醉健康藏猪种公猪，用动物电刺激采精仪于3 V、50 mA条件下电刺激法采集健康藏猪精液。

将每头藏猪种公猪精液（精子活力0.8以上）均做4倍稀释，用6层以上纱布包裹后放入培养箱中，17℃平衡2 h后，放入冰箱4℃保存。

1.2.3 精子质量评价 精子活力和精子畸形率两项精液常规性状参照世界卫生组织标准（WHO）[8]的方法测定，具体方法如下。1）精子活力：精液过滤后立即在显微镜下观察精子活力，采用百分制法，直线前进精子数占总精子数的百分比为精子活力。2）精子畸形率：采用龙胆紫酒精溶液染色法，将精子涂片染色，在400倍显微镜下观察，计算不同视野500个精子中畸形精子占比例即为畸形率。3）精子顶体完整率参照文献[9]考马斯亮蓝R250染色法进行评价。

1.3 试验设计

试验用6头藏猪种公猪隔2 d采精1次，共采精7次。每次每头藏猪种公猪精液分5组，每组3个重复。在改进的猪精液低温稀释液为基础液中，按0 μmol/L、6 μmol/L、12 μmol/L、18 μmol/L和24 μmol/L添加CMC，将每头藏猪种公猪精液均做4倍稀释后于4℃保存到第5天时以藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率和质膜完整率为评价指标，探讨CMC对4℃保存藏猪精液品质的影响。每头藏猪种公猪精液均做3个重复。

1.4 数据处理

所得试验数据用Excel进行前期处理，再用SPSS 11.5软件进行One-Way ANOVA方差分析，并进行多重比较，试验结果用平均数±标准差表示，检验误差为5%和1%。

2 结果与分析

由表1可以看出，每头藏猪种公猪精液4℃保存到第5天时，12 μmol/L CMC添加组的精子活力极显著优于其他组（P＜0.01）；精子畸形率12 μmol/L CMC添加组极显著小于其他组（P＜0.01）；精子顶体完整率12 μmol/L CMC添加组极显著高于其他组（P＜0.01）。

表1 CMC对4℃保存藏猪精液品质的影响（n=42）

3 讨论

随着现代化藏猪养殖生产技术的提高，为有效控制疫病传播、降低饲养公猪的费用、提高猪群品质、解决藏猪精液的妥善保存问题，人工授精技术服务于藏猪产业发展已迫在眉睫。在藏猪精液稀释液中添加有效保护剂于4℃低温保存时间比常温更长，同时可应用普通冰箱保存，经济方便。CMC是一种良好的乳化稳定剂和增稠剂在食品中广泛应用，且能有效延缓贮藏时间[6]。本研究参考张家庆等[6]研究结果，试将CMC添加到高海拔地区特有的藏猪种公猪精液稀释液中，探讨对藏猪精液4℃保存至第5天时精子质量的影响发现，精液稀释液中添加CMC 12 μmol/L时，精子活力、精子顶体完整率最高，精子畸形率最低，添加量略低于张家庆等[6]研究结果，可能与高海拔环境氧分压低、精子体外运动能力略差有关。

CMC的乳化稳定和增稠作用减缓了精子沉降速度、延长了沉淀时间，提高了藏猪精液4℃环境保存质量。其具体保护机理有待进一步研究。

4 结论

在改进的猪精液稀释液中添加CMC 12 μmol/L可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质，本试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产增加一种精液保护剂选择方案。

[1]任子利，赵彦玲，王建洲，等.维生素C对藏猪精液4℃保存及其精子全基因组DNA甲基化的影响 [J].畜牧兽医学报，2016，47（5）：1057-1061.

[2]陈晓英，马金英，宋天增，等.红景天多糖对藏猪精液4℃保存效果的研究[J].养猪，2016（6）：33-36.

[3]陈晓英，马金英，宋天增，等.维生素E对4℃保存藏猪精液品质和抗氧化保护作用的影响[J].养猪，2016（6）：37-40.

[4]陈晓英，马金英，宋天增，等.不同稀释液对藏猪精液4℃保存效果的影响[J].畜牧与饲料科学，2016，37（10）：22-24.

[5]羧甲基纤维素钠 [EB/OL].http://baike.baidu.com/link?url= T3GvzaGxwCFOKcmVEZXPOtB4TGmi3TGN-d0pOTtvlTKiwCSfJdlIRZdNeOir2c6-_dyBR_1RuzknP-IxhXOhdOYEs－DEFDqmmzuRhUWI61OPwqVtsaimCii_Hdkk0hM4QJccL5BrNcPI-76QPdS6yT4RzqeY9kaa5Gi8PxAmW0Vm.

[6]张家庆，陈东峰，王献伟，等.羧甲基纤维素钠对猪精液常温保存效果的影响[J].家畜生态学报，2017，38（2）：33-38.

[7]孙时军，朱华鸿，陈晓峰，等.低温保护剂对4℃保存猪精液活率的影响[J].上海畜牧兽医通讯，2012（4）：28-29.

[8]WHO.Laboratory test handbook about the interaction between semen and cervical mucus[M].PressⅢ.Beijing:Scientific Editor,1994:9-13.

[9]胡传活，许春荣，陆媚，等.黄芪多糖对猪精液低温保存的影响[J].中国兽医学报，2015，35（1）：150-154.

（编辑：郭玉翠）

为何减肥食品大多不奏效

【美国斯里尔利斯特网站1月12日报道】题：大部分减肥食品不奏效的惊人原因

大部分减肥食品之所以注定不奏效至少有一个明显原因，那就是它们不会给人带来乐趣。

但这个解释并未描绘出减肥究竟有多难的完整情形。例如，为什么有人有毅力坚持严格的饮食而减掉一半体重，而其他人坚持同样的饮食计划反而增重了？

和生活中的大多数事情一样，这个问题的答案是复杂的。这就是为什么减肥专家开始把肥胖看作一组疾病，而非单一的问题，就像医生看待癌症一样。

马萨诸塞综合医院肥胖、新陈代谢和营养研究所主任李·卡普兰博士对英国《泰晤士报》记者说，他估计可能有多达59种不同类型的肥胖。59种！因此，对一种类型的肥胖有效的疗法可能对另一种类型的肥胖就无效，而且即便找到一种对多种类型的肥胖都有效的可能性也相当低。

与癌症进行类比是思考肥胖问题的一个有用方式。你不会切除肺癌患者的乳房，除非你是个不具备基本解剖知识却不知何故获准从医学院毕业的外科医生。

此外，还有30多个基因可能与肥胖有关，但研究人员仍难搞清到底哪些遗传和环境因素与肥胖最有关联。我们仍知之甚少的是，这些基因究竟如何相互作用并与环境发生关联从而致人肥胖。而如果无法搞清原因，治疗肥胖就会变得更加困难。

了解家族史有一定帮助，但它当然不会决定你的命运。波士顿医疗中心营养和体重管理部门负责人卡罗琳·阿波维安博士说：“父母或家庭成员肥胖的人并不注定会超重，但知道你的基因可能对高糖和高饱和脂肪食物尤其敏感将有助于了解个性化需求。那些带有容易使自己增重的基因的人会在充斥着廉价和不健康食品的环境中增重。”

虽然减肥的一般原则—健康饮食、经常锻炼、睡眠充足—都是对的，但吃多少和“健康饮食”具体意味着什么，是因人而异的。遗憾的是，治疗通常是一个试错过程，直到人们发现究竟是什么对他们减肥有效。

例如，卡普兰博士对《纽约时报》记者说，他对肥胖患者试用40种疗法，包括不同的饮食、有氧运动、加强睡眠和几十种药物。

此外，即使有些人一开始体重减轻了，但能保持下去才是关键。大部分体重减轻的人会反弹，这令对肥胖采取综合疗法变得更加困难。

找到可持续的减肥方案并不容易，但在合适的方案、成套技巧和心态的帮助下，这是有可能做到的，只是可能需要比预期更长的时间才能找到对你奏效的方法。

（转自参考消息[N]，2017-01-18）

Effect of Cysteamine on Tibetan Boar Semen Preserved at 4℃ and Antioxidative

Ni Ma1,Jinmei Duoji2,LAI Ke3,CHEN Xiaoying1,TAN Zhankun4,REN Zili4
(1.Institute of Animal Science,Tibet Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences,Lhasa 850009, China;2.Animal Husbandry Bureau,Tibet Dagzê County,Dagzê 850100,China;3.Animal Disease Control and Prevention Center,Tibet Shigatse City,Shigatse 857000,China;4.Faculty of Animal Science,Tibet Agricultural and Animal Husbandry College,Nyingchi 860000,China)

This study was conducted to investigate the effects of Carmellose Sodium on Tibetan boar semen preserved at 4℃ and antioxidative.The semen was collected from Tibetan boar by electrical stimulation.Add Carmellose Sodium 0 μmol/L,6 μmol/L,12 μmol/L,18 μmol/L,24 μmol/L,in the improvement of pig semen low temperature dilution liquid.Save to fifth days at 4℃ after dilution of fresh semen.Body integrity and membrane integrity rate of the top Tibetan pig sperm activity,sperm abnormal rate and semen quality evaluation index,to investigate the effect of Carmellose Sodium on the quality of semen quality at 4℃.The results show that,the sperm motility,sperm deformity rate,sperm motility rate and plasma membrane integrity rate of the Carmellose Sodium 12 μmol/L addition group were significantly better than other test groups（P＜0.05）.In short, adding Carmellose Sodium 12 μmol/L to the improved pig semen diluent can significantly improve the semen quality and antioxidant protection at 4℃.The experimental study laid a foundation for the production and application of cryopreservation of boar semen in the future.

Carmellose Sodium;Tibetan pig;environmental science at 4℃;semen quality

S828

A

1002-1957(2017)04-0022-03

2017-06-17

西藏自治区自然科学基金（2016ZR-15-37）

尼 玛（1972-），女，西藏拉萨人，助理研究员，硕士，主要从事高原畜禽安全生产工作.E-mail：nimacw@126.com

任子利（1969-），男，河南卫辉人，副教授，博士，主要从事动物繁殖教学与研究工作.E-mail：zlren0925@163.com