MTHFR基因多态性在黑龙江东部地区脑卒中患者的频率分析①

王 超，于 莲，季方茹，雷力力

(1.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江 佳木斯 154003)

MTHFR基因多态性在黑龙江东部地区脑卒中患者的频率分析①

王 超1，于 莲1，季方茹2，雷力力2

(1.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.佳木斯大学附属第一医院药剂科,黑龙江 佳木斯 154003)

目的：分析黑龙江省东部地区健康人群和脑卒中患者中5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) C677T、A1298C基因多态性的分布情况。方法：在黑龙江东部地区选取225例脑卒中患者和169例健康人群为测试对象，检测其MTHFR C677T、A1298C位点的基因多态性，统计并分析黑龙江东部地区基因多态性的分布特征。结果：MTHFR C677T基因型中健康组与脑卒中组人群的基因携带频率之间无显著性差异(χ2=2.269，P>0.05)。MTHFR A1298C基因型中2组人群基因频率没有显著性差异(χ2=0.159，P>0.05)。C677T和A1298C两个基因位点之间连锁后的9种基因型在2组人群中无显著性差异(χ2=8.202，P>0.05)。结论：我省东部地区MTHFR C677T、A1298C的3中基因类型在健康组与脑卒中组人群中没有差异性，C677T和A1298C基因型组合在2组人群中无差异性，脑卒中患者的发病因素可能不仅与基因型有关，其他不确定因素进一步导致了其发病率。

亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；脑卒中

脑卒中(cerebral stroke)是以脑血管病变而引起的高致残率、高致死率的疾病，尤其患有高血压、糖尿病等高危因素的人群中其发病率明显上升。目前，我国脑卒中患者人数呈上升趋势，而且趋于年轻化[1]。亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetrahydrofolate reductase MTHFR)是叶酸在体内代谢的关键酶，该酶的活性能直接影响人体内血浆同型半胱氨酸的含量。通常MTHFR的两个常见的突变基因位点是C677T和A1298C，这两个基因位点的错义突变导致677位碱基C被T置换，1298位A置换为C从而改变了MTHFR的氨基酸结构，影响了MTHFR酶的活性，最为显著的表现为MTHFR酶活性下降，这就使得同型半胱氨酸无法正常完成向蛋氨酸的转化，从而造成血同型半胱氨酸的含量明显升高[2]，进而导致脑卒中的易感性。

当前国内外对于MTHFR C677T和A1298C的研究有很多，种群、地域等因素导致研究结果不尽相同。然而，就目前对我国脑卒中高发地区之一的黑龙江东部地区，研究数据较少。同时对于以C677T和A1298C两个基因位点作为相互关联因素研究的数据为零。因此，本实验组拟定科学合理的实验方法，在黑龙江东部地区适宜人群中选取适宜样本，探讨MTHFR C677T和A1298C位点的基因多态性在健康人与脑卒中患者中的分布情况，为我省在精准医疗的发展上提供实验室数据支持，指导临床合理用药，以减少脑梗死疾病和痛苦，达到合理预防、提高生存质量的目的。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取黑龙江东部地区自2015-10～2016-02来我院进行脑卒中检查的人群，以及本实验组随机选取的健康人，其中健康人共计169例，脑卒中患者共计225例，均为汉族，平均年龄为(61.7±8.5)岁。脑卒中患者筛选的指标均按照“全国第四届脑血管会议制定的脑梗死诊断标准”执行[3]，同时脑卒中患者都经过本院MRI或(和)CT检查并确诊。

1.2 研究方法

基因型的检测：本实验采用荧光染色原位杂交法对样本基因进行采集：①富集白细胞:取待测样本200μL新鲜全血加入到1100μL氯化铵溶液中，混匀后室温放置5min，然后离心机离心5min(3000r/min 700g) ，用移液枪吸取上清液，保留管底白细胞。②裂解保存:在富集白细胞的试管中加入50μL耀金保，用枪吹吸并震荡试管混匀。③加样:取1.5μL直接加入到待测基因对应的耀金分试剂中，上机检测。

1.3 统计学方法

采用Spss 21.0软件进行统计学分析处理，计数采用χ2检验，以P<0.05具有显著性差异。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡

依据Hardy-Weinberg遗传平衡，检验采集到的MTHFR C677T、A1298C位点数据，健康组与脑卒中组理论频数之间差异性无统计学意义(P>0.05)，说明本实验采集的样本具有群体代表性。

2.2 MTHFR基因多态

2.2.1 本省东部地区健康人群与脑卒中人群中MTHFR C677T的基因频率分布比较是(表1)：C677T位点可分为CC基因型、CT基因型、TT基因型三种基因型，健康组中3种基因型频率分别为20.7%、47.3%、32.0%，C和T等位基因频率为44.4%、55.6%；脑卒中组的3种基因型频率为13.3%、52.0%、34.7%，C和T等位基因频率为39.3%、60.7%。两组基因类型的总体分布频率无显著性意义(χ2=2.269，P>0.05)。两组中C与T的等位基因频率分布无显著性意义(χ2=0.517，P>0.05)。

表1 MTHFR C677T的基因频率分布[n(%)]

2.2.2 健康人群与脑卒中患者中MTHFR A1298C的基因频率分布比较是(表2)：A1298C位点可分为AA基因型、AC基因型、CC基因型三种基因型，健康组中3种基因型频率分别为58.6%、38.5%、2.9%，A和C等位基因频率为77.8%、22.2%；脑卒中组的3种基因型频率为57.8%、37.8%、4.4%，A和C等位基因频率为76.7%、23.3%。两组基因类型的总体分布频率无显著性意义(χ2=0.159，P>0.05)。两组中A与C的等位基因频率分布无显著性意义(χ2=0.029，P>0.05)。

表2 MTHFR A1298C的基因频率分布[n(%)]

2.2.3MTHFRC677T和A1298C两个基因位点连锁后的基因频率分布比较(表3)。健康组中C677T与A1298C连锁后的9中基因型频率分别为CCAA9.5%、CCAC9.5%、CCCC1.8%、CTAA23.7%、CTAC23.1%、CTCC0.6%、TTAA25.4%、TTAC5.9%、TTCC0.6%，脑卒中组中两种基因型连锁后的频率分别为CCAA4.4%、CCAC7.6%、CCCC1.3%、CTAA29.3%、CTAC19.6%、CTCC3.1%、TTAA24%、TTAC10.2%、TTCC0.4%。两组基因类型的总体分布频率无显著性意义(χ2=8.202，P>0.05)。

表3 MTHFR C677T和A1298C连锁后的基因频率分布[n(%)]

3 讨论

MTHFR基因位于人体染色体1p36.3，常见的研究类型有677C>T、1298A>C两个位点[4]。目前，国内外有大量的研究显示，这2个基因位点碱基对的改变将直接导致MTHFR活性的降低，导致其反应过程中甲基代谢能力的降低，进而导致如同型半胱氨酸的升高[6]，同型半胱氨酸(Hcy)与脑血管疾病的发生有着密切的关系。同时，其与心脏病、糖尿病等脑卒中发生的高危因素也有关联[5]。本实验研究显示，我省东部地区健康人群中与脑卒中患者MTHFR C677T和A1298C两个基因位点的频率之间没有统计学意义。健康组与脑卒中组两个基因位点中分别形成的3种基因类型具有相关性，没有差异性。C677T和A1298C两个位点连锁后的9种基因型在健康组与脑卒中组中也没有差异性。说明我省东部地区MTHFR基因型分布没有差异性，健康人群与脑卒中患者在发病率上与其携带的基因型没有关联。国内已有大量文献报道，MTHFR C677T和A1298C基因中突变型在健康人群和脑卒中患者中具有显著差异，突变型基因会导致脑卒中危险因素发生的概率[7]。然而，我省东部地区基因型之间没有区别，说明健康人群与脑卒中患者在发病原因可能因为其他因素导致。本省是我国脑卒中的高发地区之一，每年脑卒中患者呈增长趋势，随着分子生物学和精准医学的快速发展，疾病与一些药物相关的基因多态性之间的相关性研究越来越受关注[8～10]，如何有效、合理的知道患者用药已经成为医疗工作者面对的问题。从基因层面个体化用药，不仅能得到好的治疗效果，更能减轻药物的毒副作用，增加患者的耐受性。本实验的研究结果说明我省东部人群体内携带的MTHFR C677T和A1298C两个位点的3中基因型较我国其他地方水平高，这可能会增加我省东部地区患脑卒中等相关疾病的风险。

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佳木斯大学研究生创新项目，编号：YM2016_097。

王超(1986～)男，山东青岛人，在读硕士研究生。

雷力力(1958～)女，黑龙江佳木斯人，学士，主任药师，硕士研究生导师。E-mail：leill888@126.com。

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1008-0104(2017)04-0048-03

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