HPLC测定妇科再造丸中黄芩苷的含量

舒 柯 苌 玲 廖 敏 程 韬

贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004



HPLC测定妇科再造丸中黄芩苷的含量

舒 柯 苌 玲 廖 敏 程 韬

贵州省食品药品检验所，贵州 贵阳 550004

目的：建立以HPLC法测定妇科再造丸中黄芩苷含量的方法。方法：色谱柱Waters symmetry C18(250mm×4.6 mm,5μm)；以甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53)为流动相；流速1mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm。结果：黄芩苷在0.1061～1.3260μg的范围内峰面积呈良好的线性关系，回归方程：Y=122.88X-2.14(r=1)，平均加样回收率为97.3%，RSD为0.8%(n=6)。结论：所建立的含量测定方法可靠，操作简便，结果准确，重现性良好，可用于该制剂的质量控制和评价。

妇科再造丸；高效液相色谱法；黄芩苷；质量控制

妇科再造丸由当归、香附、白芍、熟地黄、阿胶、茯苓、党参、黄芩等42味中药组成，是一个大处方的复方制剂。用于月经先后不定期，带经日久，淋漓出血，痛经，带下等症[1]。本品收载于国家中成药标准汇编，中成药地方标准上升国家标准部分，原标准仅以测定白芍中的芍药苷含量进行质量控制。黄芩作为方中佐药，其中黄芩苷是黄芩发挥功效的主要活性成分，具有抗菌抗病毒、清除氧自由基、抗氧化、解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤、保护心脑血管及神经元、保肝、预防或治疗糖尿病及其并发症等作用，故本试验测定妇科再造丸中黄芩苷的含量，进一步提高了该品种的可控性[2]。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Ultimate 3000)；KQ-500DA型数控超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司)；METTLER TOLEDO AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 材料 黄芩苷(批号：110715-201117，中国药品生物制品检定院，质量分数91.7%)，妇科再造丸10批样品(贵州德昌祥制药有限公司)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液(47∶53)为流动相；检测波长为280nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min，进样量：10μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成含53.0393μg/mL的溶液，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品适量，除去糖衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25mL，称定重量，超声(频率34Hz，功率250W)处理45min，放冷，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 系统适应性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，照“色谱条件”项下进样，记录色谱图，结果供试品与黄芩苷对照品在对应的位置出现色谱峰，阴性对照在该位置无色谱峰出现。色谱图见图1。

2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液(53.0393μg/mL)2、5、10、15、25μL依次注入液相色谱仪，测定峰面积。计算回归方程：Y=122.88X-2.14，R=1。结果表明：黄芩苷在0.1061～1.3260μg的范围内对照品的进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取“线性关系考察”项下的对照品溶液，连续进样6次，进样量10μL，测定黄芩苷的峰面积，计算其RSD为0.3%，结果表明，仪器精密度好。

2.7 重复性试验 取同1批样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备6份供试品溶液，进样量10μL，测定黄芩苷的峰面积，计算其RSD为1.6%，表明该方法重现性好。

2.8 稳定性试验 取同1样品，按“供试品溶液的制备”项下方法制备1份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10h各进样10μL，测定黄芩苷的峰面积，计算RSD为0.9%，结果表明，供试品在10h内稳定。

2.9 加样回收率试验 取已测定含量的妇科再造丸(平均含量4.2251mg/g)约0.25g，精密称定，置于三角烧瓶中，分别精密加入对照品溶液(53.0393μg/mL)25mL，按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，计算黄芩苷的平均回收率为97.3%，RSD为0.8%。结果见表1。

表1 加样回收率结果

2.10 样品含量测定 按上述色谱条件，取妇科再造丸按“供试品溶液的制备”项下方法制备供试品溶液，测定黄芩苷的含量。结果表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

妇科再造丸为大处方制剂，药材较多，原标准仅以测定白芍中的芍药苷含量进行质量控制，使原质量标准不够完善。本试验针对制剂中的佐药黄芩进行研究，黄芩苷是黄芩中的主要活性成分，故选择黄芩苷作为本制剂的质量控制成分。

黄芩苷为一种有葡萄糖醛酸结构的黄酮衍生物，目前普遍认为加热回流的提取效果最好[3]。在供试品溶液制备中，本实验曾以超声回流提取和加热回流提取进行比较。结果显示，超声法对黄芩苷的提取效率与传统的回流提取无统计学差异。同时超声提取具有无需高温、安全性好、操作简单易行、维护保养方便、提取效率高的特点[4-5]。故试验中选用超声提取方法。对超声提取时间进行了比较，结果显示提取45min，样品中黄芩苷基本提取完全，故采用超声提取45min。该测定方法准确，简单，具有较高的重现性。

[1]李谦，肖海涛，郝小燕.高效液相色谱法测定妇科再造丸中黄芩苷的含量[J].贵阳医学院学报,2006,31(2)：146-147.

[2]王翰华，沈岳光，陆元勋.浅析中药质量标准中建立多指标含量测定体系[J].中医药导报,2010,16(10):95-96.

[3]王佩琦，王成明，卢静华，等．正交试验法优选超声提取黄芩苷的研究[J].中医药学刊,2004,11(22)：2133-2134.

[4]冯亦颖，王巨存，徐学锐.HPLC法测定龙胆泻肝丸中黄芩苷的含量[J].天津药学,2007,19(5):15-17.

[5]王玲玲，王凌，杨菲，等．RP-HPLC测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的含量[J]．中国实验方剂学杂志,2012,12(18):124-126.

Determination of baicalin in Fukezaizao pill by HPLC

SHU Ke CHANG Ling LIAO Min CHENG Tao

Guizhou Institute for Food and Drug Control，Guiyang 550004,China

Objective To establish a HPLC to determinate the content of Baicalin in Fukezaizao pill. Methods The analysis was carried on a column of C18(Waters symmetry,250mm×4.6mm,5μm)at 30℃;methanol-0.2%Phosphoric Acid(47∶53)as mobile phase;the flow rate was 1.0mL/min;the detection wavelength was 280nm. Results A good linearity can be found in the range of 0.1061～1.3260μg with regression equation asY=122.88X-2.14,(r=1),the average recovery rate was 97.3%,RSDWas 0.8%(n=6). Conclusion This method is simple,rapid and accurate.It can be used to control the quality of Fukezaizao pill.

Fukezaizao pill;HPLC;Baicalin;Quality control

舒柯(1984-)，女，硕士研究生，研究方向为药品检验和质量标准。E-mail:shuke1210@163.com

R284

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1007-8517(2017)14-0022-02

2017-05-10 编辑：陶希睿)