微小RNA多态性和非小细胞肺癌遗传易感性关系研究*

段敏丹，陈 雪， 王 悦，苏 雷，史 茜，贾友超，霍 燃△

1.河北大学附属医院肿瘤内科(保定 071000)，2.河北省保定市第二医院(保定 071000)，3.河北省保定市第一医院 (保定 071000)，4.河北大学附属医院放疗科(保定 071000)，5.河北大学附属医院儿科(保定 071000)

微小RNA多态性和非小细胞肺癌遗传易感性关系研究*

段敏丹1，陈 雪2， 王 悦3，苏 雷4，史 茜5，贾友超1，霍 燃1△

1.河北大学附属医院肿瘤内科(保定 071000)，2.河北省保定市第二医院(保定 071000)，3.河北省保定市第一医院 (保定 071000)，4.河北大学附属医院放疗科(保定 071000)，5.河北大学附属医院儿科(保定 071000)

目的：研究微小RNA多态性和非小细胞肺癌遗传易感性的关系。方法：选取非小细胞肺癌患者130例(A组)与常规体检者150例(B组)，对两组hsa-mir-146a rs2910164和hsa-mir-499 Rs3746444基因的多态性进行研究分析，利用非条件Logistic回归模型计算OR及95%CI等。结果：A组G、A基因比例分别为73.08%和26.92%，B组分别为77.33%和22.67%；A组GG、AG、AA基因型频率分别为52.31%、40.77%、6.92%，B组分别为58.67%、36.67%、4.66%；两组基因型与等位基因分布分别比较均无统计学差异(P=0.4892,P=0.2437)；调节性别、年龄、吸烟、饮酒等进行回归分析，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC与基因型GG+CG相比患非小细胞肺癌的危险性较高(OR=1.39, 95%CI: 1.06～1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，两组基因型频率分布比较无统计学差异(P>0.05)；校正各种因素后，带有CC基因型男性患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.61, 95%CI: 1.24～2.03,P=0.0369)，吸烟患非小细胞肺癌危险性较高(OR=2.01, 95%CI: 1.76～2.35,P=0.0419)，饮酒患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.22, 95%CI: 0.55～3.25,P=0.0364)。结论：微小RNA rs2910164中基因型CC有可能增加非小细胞肺癌的遗传易感性，且其发病风险与吸烟、饮酒等因素存在一定相关性。

非小细胞肺癌约占肺癌总数的80%，发病率和病死率都非常高，男性患者多于女性[1-3]。肺癌的病因有多种，发病机制错综复杂，包括遗传、大气环境、生活压力、吸烟、饮酒等[4]。微小RNA是一类高度保守的非编码小分子单链的RNA，它利用降解信使RNA与抑制靶基因表达来调控着生物细胞的生长、发育、分化以及增殖等各个生命过程[5-6]。研究显示，微小RNA参与了免疫细胞的分化、成熟，抗体的生成以及炎症因子的释放，与生物免疫过程休戚相关，其中微小RNA的多态性能够调节其各项表达功能[7-8]。本研究选取2014年7月2015年7月来我院就诊并确诊为非小细胞肺癌的患者130例与进行常规体检健康人士150例，分析微小RNA多态性和非小细胞肺癌遗传易感性的关系，现报告如下。

资料与方法

1 一般资料 收集确诊为非小细胞肺癌患者130例(A组)与进行常规体检的健康人150例(B组)。所有加入此项研究的人均无亲属关系，并均同意加入此项研究。两组性别、年龄、有无吸烟、饮酒等一般资料比较均无统计学差异(P>0.05)，具有可比性，见表1。

表1 两组一般资料比较[例(%)]

2 基因提取及分型分析 根据相关研究[9]，提取两组全血基因组DNA,选择hsa-mir-146a rs2910164和hsa-mir-499 Rs3746444进行分析，严格按照说明书进行PCR反应体系的配制，并在ABI公司的高通量实时荧光定量PCR系统(7900HT型)进行反应和分析。基因分型的结果采用SDS2.2.1统计学软件进行分析。其中，所有384孔板中都设有3个阳性对照和3个阴性对照。利用较好的DNA样本作为阳性对照，利用DNA稀释液来替代基因组DNA作为阴性对照，并将其加入PCR的反应体系中。所有孔板都进行重复检测，并且检测结果均为100%一致。

3 统计学方法 运用SPSS18.0统计学软件，采用χ2检验，OR及95%CI采用非条件Logistic回归模型计算。以P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 基因型与等位基因分布情况比较 A组G、A基因比例分别为73.08%和26.92%，而B组分别为77.33%和22.67%；A组GG、AG、AA基因型频率分别为52.31%、40.77%、6.92%，而B组分别为58.67%、36.67%、4.66%，两组基因型与等位基因分布分别比较均无统计学差异(χ2=1.4299,P=0.4892; χ2=1.3589,P=0.2437)，见表2。

表2 基因型与等位基因分布情况比较[例(%)]

2 微小RNA基因型频率分布以及和非小细胞肺癌的关系 调节性别、年龄、吸烟、饮酒等，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC与基因型GG+CG相比患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.39, 95%CI: 1.06-1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，两组基因型频率分布比较无统计学差异(P>0.05)，见表3。

表3 微小RNA基因型频率分布及其和非小细胞肺癌的关系[例(%)]

a：运用多因素Logistic回归模型计算分析

3 微小RNA rs2910164位点基因频率和非小细胞肺癌风险的相关性 采用非条件多因素Logistic回归模型计算进行分层分析，校正各种因素后，带有CC基因型的男性患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.61, 95%CI: 1.24-2.03,P=0.0369)，吸烟患非小细胞肺癌危险性较高(OR=2.01, 95%CI: 1.76-2.35,P=0.0419)，饮酒患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.22, 95%CI: 0.55-3.25,P=0.0364),见表4。

表4 微小RNA rs2910164位点基因频率和非小细胞肺癌风险相关性

讨 论

非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌中最常见的发病类型，约占80%比例，并且近年来随着人类生活方式的改变，NSCLC的发生率和死率逐渐升高，其中男性患者多于女性，老年患者多于青壮年，严重影响了人类的幸福生活和生存质量[10-11]。肺癌的发病原因有多种，发病机制错综复杂，包括遗传、大气环境、生活压力、吸烟、饮酒、工作类型等。微小RNA是一类高度保守的长约有21～24个核苷酸的非编码小分子单链的RNA，它利用降解信使RNA与抑制靶基因表达(即翻译成蛋白质的过程)来调控着生物细胞的生长、发育、分化以及增殖等各个生命过程[12-13]。随着社会的发展和医学的进步，广大的医学研究人员越来越多的关注着微小RNA的作用，研究显示微小RNA与哮喘、肿瘤性疾病以及神经系统疾病等的关系密切[14]。微小RNA能够参与到免疫细胞的分化、成熟，抗体的生成以及炎症因子的释放等，它与生物的免疫过程休戚相关[15]。相关研究表明，微小RNA的多态性能够调节其表达和功能[16]。本研究选取非小细胞肺癌的130例患者与进行常规体检的健康人150例。结果显示，非小细胞肺癌患者的G、A基因比例分别为73.08%和26.92%，而健康人士分别为77.33%和22.67%，非小细胞肺癌患者GG、AG、AA基因型频率分别为52.31%、40.77%、6.92%，而健康人士分别为58.67%、36.67%、4.66%，非小细胞肺癌患者和健康人士基因型与等位基因分布比较均无统计学差异，表明了非小细胞肺癌患者和健康人士单基因型GG、AG和AA的分布符合Hardy-Weinberg平衡。本文研究还显示，调节了性别、年龄、吸烟、饮酒等因素后进行回归分析，在hsa-mir-146a rs2910164中，基因型CC与基因型GG+CG相比，患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.39, 95%CI: 1.06-1.80,P=0.0126)；在hsa-mir-499 Rs3746444中，表明微小RNA的hsa-mir-146a基因多态性位点rs2910164与非小细胞肺癌遗传易感性有关，其中的基因型CC有可能增加其风险度，而在hsa-mir-499 Rs3746444中的相关性不大。根据前期研究及功能学实验发现[14]，微小RNA hsa-mir-146a可以通过TNF-α来影响炎症因子IL-8和CCL5/RANTES等的释放，从而影响到了生物机体的炎症性免疫反应，其中rs2910164中的基因型CC有可能是通过调节微小RNA hsa-mir-146a，来影响生物机体的炎症性免疫反应，进而增加了非小细胞肺癌的遗传易感性。本研究还发现，校正各种因素后，CC基因型男性患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.61, 95%CI: 1.24-2.03,P=0.0369)，吸烟患非小细胞肺癌危险性较高(OR=2.01, 95%CI: 1.76-2.35,P=0.0419)，饮酒患非小细胞肺癌危险性较高(OR=1.22, 95%CI: 0.55-3.25,P=0.0364)。这可能是吸烟、饮酒的行为对机体产生的影响会激发微小RNA rs2910164中的CC基因发挥作用，抑或是在促进肺部炎症性免疫反应中起到了协同的作用，从而导致吸烟、饮酒的人患上非小细胞肺癌的危险性较高。

综上分析可知，微小RNA rs2910164中的基因型CC有可能增加非小细胞肺癌的遗传易感性，并且非小细胞肺癌的发病风险度与吸烟、饮酒等因素存在一定的相关性。

[1] 於 琳, 刘靳波. 肿瘤微小RNA与Hedgehog信号通路的研究进展[J]. 临床检验杂志, 2014, 32(8):597-600.

[2] 徐 慧, 彭剑雄. 端粒酶基因单核苷酸多态性与恶性肿瘤易感性的研究进展[J]. 临床检验杂志, 2014, 32(7):525-527.

[3] 王 涛, 王 伟, 曾 辉,等. VEGF基因多态性与非小细胞肺癌发病风险的相关性研究[J]. 中国现代医学杂志, 2014, 24(7):11-14.

[4] Wang SS, Guo HY, Dong LL,etal. Association between a p73 Gene Polymorphism and Genetic Susceptibility to Non-small Cell Lung Cancer in the South of China [J]. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention Apjcp, 2014, 15(23):10387-10391.

[5] 陈 琳, 吴悦陶. 微小RNA前体区域基因多态性与冠心病易感性和预后的关联研究[J]. 西安交通大学学报:医学版, 2013, 34(4): 495-499.

[6] Xu W, Cui R, Yu H. The association between SDF-1 G801A polymorphism and non-small cell lung cancer risk in a Chinese Han population [J]. International Journal of Clinical & Experimental Medicine, 2015, 8(8):14065-9.

[7] 李盈甫, 钱 旭, 周竞贤,等. 脂联素基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联[J]. 昆明医科大学学报, 2014, 35(9):52-55.

[8] 王霜霜, 董林利, 汤建新,等. P73基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性分析[J]. 湖南工业大学学报, 2014, 28(6):13-16.

[9] Hu Z,Chon J,Tian T,etal.Genetic variants of miRNA sequences and non-small cell lung cancer surviral [J].J Cin Invest,2008,118(7):2600-2608.

[10] Geng P, Yao J, Zhu Y. hOGG1 Ser326Cys polymorphism and lung cancer susceptibility: a meta-analysis[J]. Molecular Biology Reports, 2014, 41(4):2299-306.

[11] 乔光磊, 祁伟祥, 郑水儿,等. 鼠双微体基因2多态性309T/G与非小细胞肺癌易感性关系的Meta分析[J]. 肿瘤, 2014, 23(1):84-90.

[12] 李盈甫, 马千里, 王 红,等. ARL15基因rs4311394多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关联[J]. 昆明医科大学学报, 2015, 36(4):53-56.

[13] 付 萍, 王伏霞, 崔立献,等. SMAD7基因多态性与非小细胞肺癌易感性的相关性研究[J]. 国际肿瘤学杂志, 2014, 41(5):383-386.

[14] Xie Y Q, Chen J M, Liu Y. Interaction of the CYP1A1 gene polymorphism and smoking in non-small cell lung cancer susceptibility [J]. Genetics & Molecular Research Gmr, 2016, 14(4):19411-19417.

[15] 张红艳, 吴绪伟, 肖 谊,等. 谷胱甘肽S-转移酶M1、T1基因多态性及氧化应激与非小细胞肺癌易感性[J]. 中国医科大学学报, 2014, 37(5):432-436.

[16] 李 颖, 任 凡, 范亚光,等. 中国人群单核苷酸多态性与原发性肺癌易感性的相关性研究[J]. 中国输血杂志, 2014, 27(6):569-572.

(收稿：2016-10-09)

Relationship between micro RNA polymorphism and non small cell lung cancer genetic susceptibility

Duan Mindan,Chen Xue,Wang Yue,et al.

The Affiliated Hospital of Hebei University(Baoding 071000)

Objective:To study the relationship between micro RNA polymorphism and non small cell lung cancer genetic susceptibility. Methods:130 patients (group A) with non small cell lung cancer and 150 healthy individuals (group B) were selected Rs2910164 hsa-mir-146a and Rs3746444 hsa-mir-499 were selected to study the polymorphism of the gene, and the OR and 95%CI were calculated by using the non conditional ogistic regression model. Results:The gene ratio of G and A in group A were 73.08% and 26.92% respectively, while in group B were 77.33% and 22.67%; the genotype frequencies of GG, AG and AA in group A were 52.31%, 40.77%, 6.92%, and in group B were 58.67%, 36.67%, 4.66%, the genotype and allele distribution between two groups were no significant differences(P=0.4892,P=0.2437); adjusting for sex, age, smoking, drinking and regression analysis, in hsa-mir-146a rs2910164, genotype CC patients with higher risk of non-small cell lung cancer compared to the genotype GG+CG patients (P=0.0126); in hsa-mir-499 rs3746444, ; after correction of various factors, with CC genotype male Patients with higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0369) and smoking patients with higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0419), drinking for higher risk of non small cell lung cancer (P=0.0364). Conclusion：The gene type CC in Micro RNA rs2910164 may increase the genetic susceptibility to non small cell lung cancer, and the risk of the non small cell lung cancer disease and the factors of smoking and drinking have a certain relationship.

Lung neoplasms/immunology Polymorphism,genetic Regulatory sequenc,Ribonaleicacid Genetic Predispositio to disease

*河北省政府资助临床医学优秀人才项目(361007)

肺肿瘤/免疫学 多态现象，遗传学 调控序列，核糖核酸 疾病 遗传易感性

R363.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.005

△通讯作者