中药联合高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10 mRNA水平的影响❋

邹 雯，王 健△，刘 颖，咸庆飞，张复春

(1.中国中医科学院，北京 100700；2.广州市第八人民医院，广州 510060)



【临床基础】

中药联合高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10 mRNA水平的影响❋

邹 雯1，王 健1△，刘 颖1，咸庆飞1，张复春2

(1.中国中医科学院，北京 100700；2.广州市第八人民医院，广州 510060)

目的：观察中药免疫2号颗粒联合HAART疗法对44例艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10 mRNA水平的影响，初步探索该疗法对机体免疫调节的作用机制。方法：随机双盲安慰剂对照研究，治疗组23例采用HAART+免疫2号颗粒，对照组21例采用HAART+免疫2号颗粒模拟剂，观察时间1年。观察指标包括CD4+T淋巴细胞计数、IL-2mRNA、IL-10mRNA。结果：试验组CD4+T淋巴细胞计数上升显著优于对照组，组间比较差异有统计学意义；试验组IL-2上升，ΔCt增加值试验组上升幅度明显优于对照组，2组疗后-疗前差值比较有统计学意义；试验组和对照组IL-10ΔCt值均上升，2组疗后-疗前差值比较无统计学意义。结论：中药免疫2号颗粒联合HAART治疗可较对照组明显上调艾滋病免疫重建不全患者IL-2的表达，还需扩大样本量进一步验证。

中医药；免疫重建不全；IL-2；IL-10

免疫功能重建不全是艾滋病治疗领域的难点和瓶颈问题，约30%左右的患者在保证良好依从性的前提下接受高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy，HAART)疗法后，即使血浆病毒载量较长时间控制在检测不出的水平之下，其CD4+T淋巴细胞数量始终在基线水平或低于200～350 cells/mm3[1]。中药联合HAART能够有效调节患者免疫功能，促进免疫重建，然而其作用机制尚不明确。

文献研究显示，IL-2(Interleukin-2)、IL-10(Interleukin-10)等细胞因子在调节免疫应答和维持免疫平衡方面具有重要作用[2-5]。本研究采用随机双盲安慰剂对照方法研究中药免疫2号颗粒联合HAART对44例艾滋病免疫重建不全患者IL-2、IL-10等细胞因子的影响，探索该疗法对机体免疫调节的作用机制。

1 资料

1.1 一般资料

选取2014年2月至2015年5月广州市第八人民医院44例免疫重建不全患者，患者均参加中国中医科学院临床评价中心中央随机系统分组。其中治疗组23例，对照组21例。治疗组年龄(41.62±9.8)岁，身高(164.83±6.52) cm，体质量(55.45±8.7) kg，CD4基线值(201.67±62.36)cells/ul；对照组年龄(41.53±9.89)岁，身高(164.11±6.52) cm，体质量(57.8±8.6) kg，CD4基线值(193.1±67.54)cells/ul。2组年龄、体质量、体温、心率、呼吸、血压症状体征基线比较差异无统计学意义。

1.2 纳入标准

艾滋病诊断标准参照《艾滋病诊疗指南》[6]。接受HAART治疗大于12个月且小于24个月的患者CD4+T淋巴细胞绝对计数<200 cells/ul，接受HAART治疗大于24个月的患者CD4+T淋巴细胞绝对计数<350 cells/ul，HIV RNA低于检测值；入组时CD4+绝对计数≥50 cells/ul；年龄18～70岁；自愿参加本研究并签署知情同意书。

1.3 排除标准

入组前严重的机会性感染未得到控制者；入组前1个月内或正在参加其他药物临床试验的患者；入组前1个月内接受免疫调节治疗者；有自身免疫性疾病患者；妊娠或哺乳期妇女或准备妊娠妇女；任何有肾功能不全症状患者；存在智力或语言障碍，不能充分理解试验内容或给予良好合作的患者。

2 方法

2.1 治疗用药

治疗组采用 HAART(药物组合为AZT/TDF+3TC+EFV/NVP)+免疫2号颗粒(黄芪24g，党参18 g，灵芝18 g，枸杞子18 g等药物组成)，规格：5.5 g/袋，温水冲服，每日2次，每次1袋，与抗病毒西药间隔1 h以上。颗粒剂由江阴天江制药有限公司提供(批号1311327)；对照组采用 HAART(药物组合为AZT/TDF+3TC+EFV/NVP)+免疫2号颗粒模拟剂。模拟剂由上述厂家自行设计生产最终由非试验参与人员统一包装，模拟剂在外形、包装、颜色、气味上与原药一致。用药疗程为1年。

2.2 观察指标及方法

抽取患者5ml静脉血EDTA-K2抗凝，用Trizol LS提取全血中总RNA，M-MLV逆转录试剂盒合成cDNA，采用Real-time RT-PCR技术检测IL-2及IL-10 mRNA水平，CD4+T淋巴细胞绝对计数采用流式细胞术，以上均委托广州金域医学检验中心有限公司进行检测。数据处理采用ΔCT方法计算靶基因的相对表达水平：先计算每组中每个基因3个复孔的平均Ct值，ΔCt=平均Ct值(靶基因)-Ct(β-actin)，疗前疗后各检测1次。

2.3 主要仪器与试剂

RNA提取TRIZOL LS REAGENT(Invitrogen，货号10296010)；逆转录MLV REVERSE TRANSCRIPTASE(Invitrogen，货号28025013)、RNASEOUT RECOMB(Invitroge，货号10777019)；扩增 Faststart Universal SYBR(Roche，货号4913914001-1)，所用PCR仪器 Bio-Rad(型号CFX-96)。

2.4 统计学方法

3 结果

表1显示， 治疗12个月后，2组CD4+T淋巴细胞计数均上升，试验组上升显著优于对照组(P<0.05)。试验组和对照组IL-2 mRNA ΔCt值均上升，试验组上升幅度明显优于对照组，2组疗后-疗前差值比较有统计学意义(P<0.05)；试验组和对照组IL-10 mRNA ΔCt值均上升，但2组疗后-疗前差值比较无统计学意义(P>0.05)。

表1 2组CD4+T淋巴细胞计数及外周血中IL-2、IL-10 mRNA水平ΔCT值前后比较

注：与对照组治疗后比较：*P<0.05

4 讨论

HIV进入人体后，CD4+T淋巴细胞被大量吞噬、破坏，成为人体免疫系统中最主要的攻击目标。CD4辅助T细胞(Th)可分泌Th1和Th2等不同细胞因子，其中IL-2由Th1产生，具有增强吞噬细胞、NK细胞及细胞毒T淋巴细胞活性，促进细胞免疫的作用，是参与免疫应答的重要细胞因子，与其他细胞因子有协同和拮抗作用，共同完成机体免疫机能的平衡调节。IL-10是一种多功能负性调节因子，主要由Th2细胞、活化的B细胞、单核细胞、巨噬细胞产生，参与免疫细胞、炎症细胞、肿瘤细胞等多种细胞的生物调节。有研究显示，免疫重建不全患者的IL-2水平较免疫重建良好的患者明显降低[7]；另外IL-2作为一种免疫调节剂，与HAART疗法联合应用可比单用HAART疗法更有效提升CD4细胞计数[8]。现代医学认为，免疫调节指机体通过多方面、多层次的正负反馈机制控制免疫应答的强度和时限，以维持机体生理功能的平衡与稳定。其方法包括通过免疫增强剂或免疫抑制剂对机体神经-内分泌系统、免疫细胞之间以及免疫细胞与各种体液因子之间进行整体调节。而且免疫学认为人体是一个统一的整体，要保持人体的健康，就必须保持免疫系统处于相对稳定的平衡状态。这种认识与中医的整体观念以及治疗上的扶正祛邪、调整阴阳颇为相似。因此IL-2、IL-10 mRNA水平研究对于探索中医药治疗艾滋病的疗效作用机制具有一定的价值。

IL- 2被发现迄今已有30余年，但仍然是最受关注和被广泛研究的细胞因子之一。其主要功能不仅是提升免疫反应，更重要的是维持Treg细胞的稳定及其介导的免疫耐受，具有双向免疫调节作用[9]。既往 IL-2 多应用于提高抗肿瘤免疫研究[10-11]，在中医药治疗艾滋病方面研究较少。中药免疫2号颗粒由黄芪、党参、灵芝、枸杞子等药物组成，具有扶正固本的功效。本研究用中药免疫2号颗粒联合HAART干预12个月后分析结果显示，试验组CD4+T淋巴细胞计数上升明显优于对照组，试验组与对照组IL-2均上升，ΔCt增加值试验组上升幅度明显优于对照组，2组疗后-疗前差值比较差异有统计学意义。而试验组与对照组IL-10均上升，ΔCt增加值2组疗后-疗前差值比较差异无统计学意义。说明IL-2可能是一个有潜力且比较敏感的反应免疫调节能力的指标，其与反映艾滋病患者免疫系统重建国际公认的金指标CD4+T淋巴细胞计数之间的关系还有待进一步扩大样本量深入研究。

[1] NEGREDO E, MASSANELLA M, PUIG J, et al. Nadir CD4 T cellcount as predictor and high CD4 T cell intrinsic apoptosis as final mechanism of poor CD4 T cell recovery in virologically suppressed HIV infected patients: clinical implications[J]. Clinical Infectious Disease, 2010,50 (9):1300-1308.

[2] BARTHLOTT T, MONCRIEFFE H, VELDHOEN M,et al. CD25+CD4+T cells compete with naive CD4+T cells for IL-2 and exploit it for the induction of IL-10 production[J].International immunology,2005,17 (3):279-288.

[3] CARCELAIN G, SAINT-MEZARD P, ALTES H K, et al. IL-2 therapy and thymic production of naive CD4 T cells in HIV-infected patients with severe CD4 lymphopenia[J].AIDS,2003,17(6):841-850.

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[5] MARCHETTI G, MERONI L, VARCHETTA S, et al. Low-dose prolonged intermittent interleukin-2 adjuvant therapy: results of a randomized trial among human immunodeficiency virus-positive patients with advanced immune impairment [J]. Journal of Infectious Diseases, 2002, 186(5): 606-616.

[6] 中华医学会感染病学分会艾滋病学组.艾滋病诊疗指南[J].中华传染病杂志,2005,24(2):133-144.

[7] ERIKSTRUP C, KRONBORG G, LOHSE N, et al. T-cell dysfunction in HIV-1-infected patients with impaired recovery of CD4 cells despite suppression of viral replication[J].Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes, 2010, 53(3): 303-310.

[8] PETT S L, KELLEHER A D, EMERY S. Role of interleukin-2 in patients with HIV infection [J].Drugs, 2010, 70 (9): 1115-1130.

[9] 翟志敏.IL-2 对免疫激活和免疫耐受的双向调节作用[J].中国药理学通报,2013,29(3) :319-322.

[10] AHMADZADEH M， ROSENBERG S A．IL- 2 administration increasesCD+4 CD25hiFoxp3+ regulatory T cells in cancer patients [J] Blood,2006,107( 6):2409-2414.

[11] LEMOINE F M，CHERAI M，GIVERNE C，et al．Massive expansion of regulatory T-cells following interleukin 2 treatment during a phaseⅠ-Ⅱdendritic cell-based immunotherapy of metastatic renal cancer [J]. International Journal of Oncology,2009,35 (3):569-581.

Effects of Immune 2 Granule Combined with HAART Therapy treatment on IL-2 and IL-10 mRNA level of HIV/AIDS with Incomplete Immune Recovery

ZOU Wen1, WANG Jian1△, LIU Ying1, XIAN Qing-fei1, ZHANG Fu-chun2

(1.TCMCenterforAIDSPreventionandTreatment,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;2.GuangzhouEighthPeople’sHospital,Guangzhou510060,China)

Objective:To assess the therapeutic effect of Immune 2 granule on IL-2 and IL-10 mRNA level of HIV/AIDS patients with incomplete immune recovery after highly active antiretroviral therapy (HAART) for 12 months, to explore the mechanism of immune regulation.Methods:Randomized, double-blind, placebo-controlled study was adopted, 23 cases of treatment group was treated with HAART+ Immune 2 granule, 21 cases were treated with HAART+ placebo, treatment period lasted for 12 months with the observation parameters such as. CD4+Tlymphocyte count, IL-2 and IL-10.Results: The CD4+cell count of treatment group increased significantly compared with the control group, the difference is statistically significant between groups; IL-2 increased in treatment group, ΔCt increased more than the control group, significant statistical differences was found between groups; IL-10 increased in treatment group, ΔCt increased by 0.51±3.2, the control group increased by 1.24±4.37, no significant statistical differences was found between groups. Conclusion: Chinese medicine immune 2 granule with HAART therapy can increase the expression of IL-2 mRNA level in HIV/AIDS patients with incomplete immune recovery. The mechanism of TCM intervention to promote immune regulation was shown. But it still needs to enlarge the sample size to get more evidences.

Traditional Chinese medicine; Incomplete Immune Recovery; IL-2; IL-10

国家自然科学基金青年基金项目(81503571)-从T细胞免疫活化分子及Toll样受体信号通路探究中医药治疗HAART后免疫无应答患者的免疫调节机制；中国中医科学院中医基础理论研究所自主选题项目(YZ-1662)

邹 雯(1982-)，女，湖南人，助理研究员，医学硕士，从事艾滋病的中医临床与研究。

△通讯作者：王 健，E-mail:62tiger@163.com。

R512.91

B

1006-3250(2017)06-0824-02

2016-12-17