骨肉瘤组织中血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达及其临床意义

王 楠，王璐瑶，杨国辉，陈聚伍

(1. 郑州大学第一附属医院急诊外科，河南 郑州 450052；2. 郑州大学第一附属医院口腔科，河南 郑州 450052)

骨肉瘤组织中血管内皮细胞生长因子、基质金属蛋白酶-2的表达及其临床意义

王 楠1，王璐瑶2，杨国辉1，陈聚伍1

(1. 郑州大学第一附属医院急诊外科，河南 郑州 450052；2. 郑州大学第一附属医院口腔科，河南 郑州 450052)

目的 探讨骨肉瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化S-P法检测68例骨肉瘤和30例正常骨组织中VEGF、MMP-2的表达，并分析两者与骨肉瘤的临床病理参数之间的关系。结果 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的阳性率均高于正常骨组织(P<0.05)。骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达均与患者的软组织浸润、临床分期有关(P<0.05)。骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达呈正相关关系(r=0.637，P<0.05)。结论 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2存在高表达，两者可能协同参与了骨肉瘤的发生、发展、浸润、转移等。

骨肉瘤；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶-2

骨肉瘤是一种青少年高发的原发性恶性骨肿瘤，发病率居原发性恶性骨肿瘤的前列。骨肉瘤的发生、发展、浸润、转移受多因素的影响，多种因子参与其具体过程。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是作用较强的一种促血管生成因子，是恶性肿瘤新生血管形成的关键影响因素[1]。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)是MMPs家族成员之一，广泛参与肿瘤组织的浸润、转移等[2]。作者采用免疫组化S-P法检测骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2蛋白表达，并分析两者与骨肉瘤临床病理特征之间的关系。

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1 资料与方法

1.1 一般资料 入组郑州大学第一附属医院2013年1月至2016年6月收治的经病理学确诊的骨肉瘤患者68例，男41例，女27例；年龄9～46岁，其中≤18岁者42例，>18岁者26例；肿瘤大小:≤4 cm者37例，>4 cm者31例；肿瘤部位：四肢49例，躯干19例；组织类型：骨母细胞型30例，软骨母细胞型26例，纤维母细胞型12例；临床分期(Eneeking分期)：Ⅱ级43例，Ⅲ级25例；有软组织浸润48例，无软组织浸润20例。并选取同期在郑州大学第一附属医院住院的非瘤性骨折患者30例作为对照，其中男20例，女10例，年龄10～50岁。2组患者的性别、年龄等具有可比性(P>0.05)。

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1.2 主要试剂 S-P免疫组化试剂盒、DAB显色剂、VEGF鼠抗人单克隆抗体、MMP-2鼠抗人单克隆抗体等均购自北京中山金桥生物技术有限公司。

1.4 免疫组化结果判定 VEGF、MMP-2定位于细胞质中，以细胞染色呈棕黄或黄褐色为阳性，选取至少10个高倍镜(×400)视野，计数阳性细胞数，评价染色强度，然后根据阳性细胞数评分和染色强度评分综合评判染色结果[3]。

1.3 VEGF、MMP-2的检测 按照S-P免疫组化试剂盒说明采用免疫组化S-P法检测骨肉瘤和正常骨组织中VEGF、MMP-2蛋白表达，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知VEGF、MMP-2阳性切片作为阳性对照。

2.2 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达与其临床病理参数的关系 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达均与患者的软组织浸润、临床分期有关(P<0.05)。见表1。

2.1 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的阳性率分别为70.59%(48/68)、73.53%(50/68)，均高于正常骨组织的10.00%(3/30)、16.67%(5/30)，差异均有统计学意义(P均<0.05)。

2 结果

1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0进行统计学分析，VEGF、MMP-2的阳性率等计数资料比较采用χ2检验，骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的相关性分析采用Spearman相关性分析法，检验标准α=0.05。

“贵州大学当时有两个优势学科，一个是计算机软件，另一个是农药学。按当时政策，可以倾斜照顾一个学科，另一个需参加正常评审。后来，贵州大学的农药学先通过评审，并将消息通知了计算机学科评议组。我作为评议组秘书，并没有急于转达这个消息，从而使得计算机软件学科也顺利通过评审。”

表1 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达与其临床病理参数的关系

2.3 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2表达的相关性 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达呈正相关关系(r=0.637，P<0.05)。见表2。

表2 骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2表达的相关性

注：r=0.637，P<0.05

3 讨论

骨肉瘤是一种青少年高发的原发性恶性骨肿瘤，其发生、发展、浸润、转移等生物学行为受多因素的影响，多种基因和蛋白参与其具体过程。骨肉瘤的诊断和治疗随着影像学、病理学技术的进步以及治疗手段的丰富得到了快速发展。目前，其确诊主要依靠病理学检查，治疗主要是手切除辅以化疗、靶向治疗等。但是骨肉瘤临床上的确诊和复发仍是难以解决的问题。所有肿瘤的增大和疾病进展均离不开新生血管的形成。VEGF是作用较强的一种促血管生成因子，在多种实体瘤的进展中具有重要作用[4-5]。MMP-2在细胞外基质和基底膜的降解中发挥关键作用，而细胞外基质和基底膜的降解是肿瘤周围浸润的生物学基础，因此MMP-2广泛参与肿瘤组织的浸润、转移等[6]。作者采用免疫组化S-P法检测骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2蛋白表达，并分析两者与骨肉瘤临床病理特征之间的关系。

本研究结果显示，骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的阳性率均高于正常骨组织(P<0.05)。骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达均与患者的肿瘤大小、软组织浸润、临床分期有关(P<0.05)。骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2的表达呈正相关关系(r=0.637，P<0.05)。这与有关研究[7-8]结果相似。

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综上所述，骨肉瘤组织中VEGF、MMP-2存在高表达，两者可能协同参与骨肉瘤的发生、发展、浸润、转移等。

[1] 赵文静，钱红燕，李靖，等. 血管内皮生长因子在肝癌血管内皮细胞体外管腔形成中量效和时效局限性的实验研究[J]. 肿瘤基础与临床, 2016,29(4):284-290.

[2] 尹磊,高惠妮,庞超,等. 眼睑基底细胞癌组织中基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-7的表达[J]. 肿瘤基础与临床，2016，29(6):465-467.

[3] 王光茂，原银萍，赵翠秀,等. 结肠癌组织MMP-2和MMP-9及VEGF表达临床意义的研究[J]. 中华肿瘤防治杂志，2011，18(16):1267-1269.

[4] 吴同中，孟彦. 老年骨肉瘤组织中MMP-7和VEGF的表达及其意义[J].中国老年学杂志,2012,32(3)：606-607.

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Expressions of Vascular Endothelial Growth Factor and Matrix Metalloproteinase-2 in the Osteosarcoma

WANG Nan1, WANG Luyao2, YANG Guohui1, CHEN Juwu1

(1.DepartmentofEmergencySurgery,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.DepartmentofStomatology,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)

Objective To investigate the expressions of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) in the osteosarcoma and their clinical significance.Methods Immunohistochemical S-P method was used to detect the expressions of VEGF and MMP-2 in the 68 cases of osteosarcoma and 30 cases of normal bone tissues, their relationship with clinicopathological parameters were analyzed.Results The positive rate of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma were higher than those in the normal bone tissue (P<0.05). The expressions of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma were related with tumor size, soft tissue infiltration and clinical stage (P<0.05). In the osteosarcoma, the expression of VEGF was negatively related with MMP-2 (r=0.637,P<0.05).Conclusion high expressions of VEGF and MMP-2 in the osteosarcoma are related to the development, infiltration and metastasis of osteosarcoma.

osteosarcoma; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinase-2

国家自然科学基金青年基金资助项目(编号：81603471)

王楠(1982-)，男，博士在读，主治医师，主要从事骨外科临床工作。E-mail：alpha19820607@163.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2017.03.003

R738.1；R730.23

A

1673-5412(2017)03-0192-03

2016-10-29)