凯氏定氮法测定豆粕中粗蛋白含量

张琳静

（济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000）

凯氏定氮法测定豆粕中粗蛋白含量

张琳静

（济源市畜产品质量监测检验中心，河南济源 459000）

为了测定豆粕中粗蛋白的含量，本试验采用全自动凯氏定氮仪进行了测定，并对测定的最佳试验条件和方法学进行了试验和验证；试验结果表明：消解时间为1h，碱液的加入量为40ml，硼酸吸收液的体积为35ml和蒸馏时间为5mjn为最佳的试验条件，回收率和精密度（RSD）分别为100%和0.9%，从而表明该方法可以用于快速测定豆粕中粗蛋白的含量。

豆粕；粗蛋白；凯氏定氮仪；含量测定

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 主要仪器和设备

全自动凯氏定氮仪，K1100F济南海能仪器股份有限公司；石墨消解仪，SH420F 济南海能仪器股份有限公司；小型高速粉碎机，YS-04北京燕山正德机械设备有限公司；分析天平，XS205DU梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.1.2 试剂

硫酸，盐酸，氢氧化钠，硼酸，硫酸铜，硫酸钾，硫酸铵均为国产分析纯。

1.1.3 0.1mol/L盐酸标准溶液的配制

精密量取盐酸溶液9ml，注入1000ml水中，摇匀，备用。

1.1.4 混合指示剂的配制

甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。

1.1.5 混合催化剂的配制

称取硫酸铜0.4g，称取硫酸钾6g，按此比例磨碎混匀。

1.1.6 硼酸吸收液的配制

1%硼酸水溶液1000ml，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ml，0.1%甲基红乙醇7ml。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的标定

精密称取0.2g于270℃灼烧至恒重的基准级无水碳酸钠溶于50ml水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示液，用配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变成暗红色，煮沸2分钟，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同时作空白试验。

1.2.2 测定条件的确立

（1）消解时间的确立

精密称取供试样品约0.5g4份，分别放入消化管中，加6.4g混合催化剂，10ml硫酸。利用石墨消解炉进行消解，将消化管放在石墨炉上，盖上排气罩，连接废气吸收系统，消化完毕后，将消化管取下冷却至室温。消化过程采用阶段升温模式，升温至420℃，分别消解0.5、1.0、1.5和2.0h，然后按照全自动定氮仪说明书的步骤进行操作，准备滴定液、硼酸吸收液、碱液和蒸馏水，并和仪器连接好，按照全自动定氮仪说明书的步骤进行操作，测定按下列公式计算分别试样粗蛋白含量。

式中：V2为测定试样时标准酸溶液的体积，ml；V1为滴定空白时所需标准酸溶液的体积，ml；C为盐酸标准溶液浓度，mol/L；m为试样质量，g；V为试样分解液总体积，ml；V’为试样分解液蒸馏用体积，ml。

（2） 碱液的添加量的确立

精密称取供试样品约0.5g4份，按照（1）步骤进行操作，消解1h，然后按照全自动定氮仪说明书的步骤进行操作，试样溶液中分别加入碱液20ml、30ml、40ml和50ml，然后分别测定粗蛋白含量。

（3）硼酸量的添加量的确立

精密称取供试样品约0.5g4份，按照（1）步骤进行操作，消解1h，然后按照全自动定氮仪说明书的步骤进行操作，试样分别用硼酸吸收液25ml、30ml、35ml和40ml进行收集，然后分别测定粗蛋白含量。

（4）蒸馏时间的确立

精密称取供试样品约0.5g4份，按照（1）步骤进行操作，消解1h，然后按照全自动定氮仪说明书的步骤进行操作，蒸馏时间分别设为3min、4min、5min和6min，然后分别测定粗蛋白含量。

1.2.3 试样的制备

选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，有粉碎机粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中备用，防止试样成分的变化。

1.2.4 试样的粗蛋白的测定

精密称取供试样品约0.5g，按照步骤1.2.2确立的条件进行操作，测定试样中粗蛋白的含量。

1.2.5 空白测定

称取蔗糖0.5g，代替样品，按照1.2.2进行空白测定，消耗盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml。

1.2.6 回收率试验

精确称取105℃烘至恒重的硫酸铵0.2g，代替试样，按1.2.2步骤进行操作，并测定硫酸铵的含氮量。硫酸铵含氮量应为21.19±0.2%。

1.2.7 精密度试验

精密称取供试样品0.5g6份，按照1.2.2方法的操作分别进行测定，记录结果，并求其相对标准偏差（RSD）

2 结果与分析

2.1 测定条件的确立

经过测定最佳消解时间、碱液的加入量、硼酸吸收液体积和蒸馏的时间试验，结果表明消解时间为1h，碱液的加入量为40ml，硼酸吸收液的体积为35ml和蒸馏时间为5min为最佳的试验条件。

2.2 试样的含氮量

按照试验要求，采用最佳的试验条件，测定试样豆粕的粗蛋白含量为43.5%。一般豆粕的粗蛋白含量为40～45%，不同地区含量有差别。

2.3 回收率试验结果

经过测定蔗糖样品（空白样品）消耗盐酸标准溶液的的体积为0.15ml，符合试验要求的“消耗盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml”。

经过测定硫酸铵的含氮量，测定的结果为21.24%，符合试验规定的“硫酸铵含氮量应为21.19±0.2%”，回收率为100.2%。

2.4 精密度试验结果

经过连续测定6各平行试样的粗蛋白含量，结果分别为43.15%、44.04%、43.59%、43.28%、44.10%和43.96%，平均含量为43.7%，RSD为0.9%。

3 讨论

粗蛋白的含量测定是饲料日常检测中最常检的项目之一，也是评定饲料质量的关键指标。本试验通过正交试验确定消解时间为1h，碱液的加入量为40ml，硼酸吸收液的体积为35ml和蒸馏时间为5min为最佳的试验条件。同时本试验也对试验方法的回收率和精密度进行了试验，实验结果表明质控样品的含氮量结果为21.24%，回收率为100.2%；连续测定6份样品的RSD为0.9%。试验结果和方法验证结果均符合要求和规定，该方法可以用于测定豆粕的粗蛋白的含量测定，也为快速检测豆粕粗蛋白的含量奠定了理论基础。

[1] 杨静.浅谈豆粕中蛋白质含量测定的影响因素[J].科学时代：下，2010，（5）：237.