排毒尪痹汤对类风湿性关节炎患者T细胞亚群的影响

唐贞力云南省临沧市人民医院，云南 临沧 677000



排毒尪痹汤对类风湿性关节炎患者T细胞亚群的影响

唐贞力
云南省临沧市人民医院，云南 临沧 677000

目的:观察排毒尪痹汤对类风湿性关节炎(RA)患者外周血淋巴T 细胞亚群的影响，从细胞免疫方向探讨本方药的疗效机制。方法:将200例门诊及住院患者分为两组。对照组给予吲哚美辛肠溶片和甲氨蝶呤片治疗；治疗组用排毒尪痹汤煎服。连续治疗4周为1个疗程。2个疗程后，于治疗前和治疗月后分别检测CD4+、CD8+， 计算CD4+/CD8+值。结果：治疗前两组CD4+、CD8+、 CD4+/CD8+值比较差别无统计学意义 (P>0.05)。治疗后, 两组较治疗前，CD4+均下降, CD8+均升高, CD4+/CD8+比值均降低；且两组治疗后各指标组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:RA 患者体内存在着细胞免疫功能紊乱，排毒尪痹汤能调节T 细胞分布, 使机体趋向免疫稳定状态，具有类似MTX 联合用药的免疫抑制效应。

类风湿性关节炎；排毒尪痹汤；T -淋巴细胞亚群

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis， RA)是一种病因复杂的自身免疫性疾病，目前其发病机制尚不十分清楚，临床以多关节慢性炎症为主要表现[1]。研究发现，调节性T细胞免疫功能紊乱，细胞异常活化和细胞亚群的平衡失控密切相关是其主要发病机制之一，且这种调节细胞主要存在于CD4+、CD8+淋巴细胞亚群中[2]。笔者结合当地少数民族的佤医佤药独特的治疗特色, 并通过10余年的临床使用心得，筛选优化组方配伍,自拟排毒尪痹汤并运用该方治疗类风湿性关节炎, 取得较好疗效。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将2013年3月至2015年9月临沧市人民医院中医科门诊及住院符合条件的RA患者200例，按照随机数字表方法，分为两组各100例，其中对照组男性43例，女性57例，年龄25～65岁，平均(52.7±10.1)岁，病程1.3～13.6年，平均(78.5±45.0)个月；治疗组男性40例，女性60例，年龄23～68岁，平均(54.3±10.6)岁，病程1.8～10.3年，平均(75.3±44.6)个月。两组在性别、年龄、病程、关节功能比较等方面差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 纳入标准 ①年龄在15～70周岁之间。②均为活动性RA患者，符合美国风湿病协会类风湿关节炎1987年修订标准[3]。活动性RA 诊断标准为[3](需具备以下5 项中4 项):晨僵≥1h；休息时有中等程度疼痛；关节肿胀≥3个；关节压痛≥5 个；ESR≥30mm/h③中医辨证属于“风寒湿型” 标准。④受试者知情，自愿签署知情同意书。

1.3 排除标准 ①伴有可能影响效应指标观测、判断的其他生理或病理状况。②合并其他免疫系统疾病。③除规定用药外，长期服用治疗本病的西药或其他药物近3周未停服者。④特征人群孕妇、哺乳期、精神病、病情危笃或疾病晚期。⑤严重心、肝、`肾损害影响药物代谢。

1.4 退出标准 ①违反试验方案。②发生严重不良事件、并发症，难以继续治疗。③资料不全无法判定疗效、安全性。④不符合纳人条件, 纳入错误或未按规定服药无法判定疗效。

1.5 诊断标准

1.5.1 西医诊断 参照美国风湿病学会(ARA)1987年对RA活动期的诊断标准[3]

1.5.2 中医诊断 参照卫生部2002年《中药新药临床研究指导原则》标准[4]。

1.6 治疗方法 4周为1个疗程，连续2个疗程。

1.6.1 对照组 吲哚美辛肠溶片(山西云鹏药业有限公司，国药准字H14020771)25mg，1次/d；甲氨蝶呤片(上海信谊药厂有限公司，国药准字H31020644)7.5mg，每周1次。

1.6.2 治疗组 排毒尪痹汤, 200mL，2次/d。处方组成: 娘母良10g，火把花根(先煎)10g，小铜锤5g,秦艽15g,威灵仙20g,黄芪50g,桂枝15g,白术20g,茯苓20g,淫羊藿25g,枸杞子25g，川断30g,牛膝15g,红花10g,鸡血藤30g,甘草6g。将火把花根用开水先煎2h,再放入其他药物煎1h,取汁200mL,煎煮2次,共400mL,早、晚2次饭后分服。以上药物均来源临沧市人民医院，并由中医科统一煎制。

1.7 实验材料 人外周血T—淋巴细胞亚群检测采用免疫组化S-P(链菌素亲生物素-过氧化酶连接法,Biotin-Streptanidin-Peroxidase)。其鼠抗人CD4，CD8 单抗及生物素-兔抗鼠IgG， 链霉亲和素-HRP 等试剂均购自北京宜安泰医疗技术开发有限公司。

1.8 实验方法 采用免疫组化S.P 法(链菌素亲生物素-过氧化酶连接法,Biotin -Streptanidin -Peroxidase)[5]。具体步骤如下 ①标本制备:抽取受试者静脉血3～4mL, 加入肝素25U·mL-1, 经离心后分离淋巴细胞, PBS洗涤3 次,使每微升细胞数约2000 个, 涂片, 干燥。(2)标本染色:分别加抗T 细胞亚群单克隆抗体10 μL，置湿盒中, 30 min， 37 ℃， PBS -Tween20 淋洗4 次, 擦干。加(生物素-兔抗鼠IgG)10 μl， PBS洗涤同上。加链霉亲和素-HRP10 μL， PBS洗涤。在1mL 蒸馏水中加入底物1、 2、3 各1 滴约50 μL混匀备用。擦干涂片圈外水份, 加1 滴底物混合液约30 ～ 50 μL， 37 ℃，5 ～ 15 min， 显微镜下观察,待细胞膜被明显染成红色, 用蒸馏水中止显色,加复染液1 滴，作用约1～3min后PBS 冲洗。③计数:高倍显微镜下计算每200个单核细胞中阳性染色细胞所占的百分比。

2 结果

2组患者治疗后与治疗前比较, 细胞均下降(P<0.05), 细胞明显升高(P<0 .01)，此外，两组治疗后较治疗前明显降低，差异具有统计学意义(P<0 .05)。但两组治疗后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比较无统计学差异(P>0.05)。见表1。

组别组别例数CD4+CD8+CD4+/CD8+治疗组治疗前10048.30±5.3217.42±3.852.81±0.25治疗后10042.25±3.47*24.40±3.61**1.73±0.12**对照组治疗前10047.82±4.9916.73±2.862.86±0.22治疗后10043.78±2.08*25.41±3.10**1.72±0.15**

注：与本组治疗前比较，*P<0.05,**P<0.05。

3 讨论

RA 是一种系统性、复杂的、慢性、炎性的自身免疫性疾病，抗原多肽通过抗原提呈细胞激活T细胞是其特征性病理变化，T细胞激活后产生细胞因子，并聚集其他炎症细胞(包括其他T细胞和巨噬细胞，产生更多细胞因子，大量巨噬细胞被激活并且释放了白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)，致使软骨细胞和滑膜细胞释出细胞毒素，造成关节及其周围正常细胞和组织伤害，滑膜增生，骨和软骨受损[6]。RA主要发病机制是T细胞介导的免疫反应异常，成熟的T细胞按其免疫效应功能，可分为CD4辅助性T细胞(CD4 T细胞)，CD8杀伤性T细胞(CD8 CTL细胞)和 CD4-CD25调节性T细胞(Tr细胞)[7]。研究表明，与正常人比较，RA 患者外周血中CD3+、CD4+淋巴细胞明显降低， CD4+/CD8+比值降低[8]。

类风湿性关节炎临床特征与“历节病”较为相似，归属中医“痹证”范畴。中医对类风湿性关节炎病因病机的认识，经过长期临床实践和理论探讨，目前比较倾向于外邪、正虚、瘀血3个方面[9]。认为该病是风、湿、寒、热等闭阻经络, 气血运行不畅, 经脉失养，肢体关节、肌肉、筋骨等处，从而发生疼痛、重着、酸楚, 麻木、 甚至关节变形、肿大、僵硬、屈伸不利。笔者采用排毒尪痹汤, 全方祛风散寒、利湿通络、解毒消肿、活血化瘀、补肾益气、扶正固本。方中君药火把花根有祛风除湿、舒筋活络、清热解毒等功效, 有效成分为生物碱、萜类、内酯、酚酸类等，具有明显抑制病理性免疫反应和抗炎镇痛作用[10]。小铜锤又称“小麻药”，《云南中草药选》载：“止痛，活血化瘀。主治骨折，跌打损伤，风湿关节痛，闭经，胃寒痛”。娘母良被佤族称作“娘三端”，学名为块根木兰，其味辛甘苦，归心、肺、肾、肝诸经。具有补肾助阳、养心安神、祛痰解痉的功效。秦艽、威灵仙祛风湿、舒经络,止痹痛。再以黄芪、桂枝、白术、茯苓补气通阳，健脾祛湿，据现代药理研究, 黄芪对免疫功能异常有双向调节作用；再以枸杞滋补肝肾；淫羊藿补肾壮阳、祛风除湿, 川断补肝肾、续筋骨、行血脉；红花、牛膝、鸡血藤活血祛瘀、补肝肾、强筋骨； 甘草补脾益气、缓急止痛、缓和药性。全方共奏祛风散寒、利湿活血、补虚之功。前期研究表明，该方治疗类风湿性关节炎安全有效[10]。

本实验检测了排毒尪痹汤 对RA 病人T 细胞亚群的影响, 发现经排毒尪痹汤治疗后, CD4+细胞较治前明显减少,CD8+细胞较治前明显增多,CD4+/CD8+值明显下降。结果表明排毒尪痹汤对RA 患者T 细胞亚群比例紊乱有调节作用，推测对T细胞免疫调节为排毒尪痹汤抗类风湿性关节炎的机制之一。

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唐贞力(1964-)，男，汉族，硕士研究生，主任医师，研究方向为中医诊治类风湿性关节炎疾病的研究。E-mail:13988329977@163.com

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2017-04-10 编辑：梁志庆)