胶艾汤不同炮制组方对动物激素水平与凝血机制的影响

蒋晓煌，蒋孟良*，贺卫和，李 红，曾 婷，何坪欣，赵新昱，张彪彪，赵梓含，邓潇潇

（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

胶艾汤不同炮制组方对动物激素水平与凝血机制的影响

蒋晓煌，蒋孟良*，贺卫和，李 红，曾 婷，何坪欣，赵新昱，张彪彪，赵梓含，邓潇潇

（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

目的 优选胶艾汤的最佳炮制组方。方法 对胶艾汤全方生品、部分炮制、全方炮制a、全方炮制b等四种不同的炮制组合方进行大鼠激素水平与凝血机制的测定，比较不同炮制组方的药效活性。结果 胶艾汤对大鼠雌二醇、孕酮、睾丸酮、内皮素与6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2作用强弱顺序是全方炮制b＞全方炮制a＞部分炮制＞全方生品。结论 胶艾汤全方炮制b的止血作用最强。

胶艾汤；中药炮制；雌二醇；孕酮；睾丸酮；内皮素；6-酮-前列腺素F1α；血栓素B2

胶艾汤出自《金匮要略·妇人妊娠第二十》[1]，临床用于治疗崩漏，月经过多，先兆流产，产后子宫收缩不全等功血症，总有效率达90%以上[2]。其临床应用报道较多，药理研究报道较少，有研究发现其具有缩宫与止血作用[3-7]。关于胶艾汤炮制研究则更少，仅对方中单味药进行了炮制研究[6-8]，但胶艾汤不同炮制组方的药理研究未见报道，本研究根据炮制理论，在前期研究基础上[8-9]，将方中各药物进行不同的炮制，再组合成4个制品方，并对去势大鼠进行雌二醇（E2）、孕酮（P）、睾丸酮（T）等激素及内皮素（ET）、6-酮-前列腺素 F1α（6-Keto-PGF1α）和血栓素B2（TXB2）含量比较实验，以优选出更有效的炮制组合方，为临床用药提供科学依据。

1 实验材料

1.1 动物

SD大白鼠，清洁级，雌雄兼取，体质量（200±20）g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2009-004。动物饲养于湖南中医药大学SPF级实验动物中心，标准饲料、全营养喂养，自由饮水，笼具每天清洗消毒1次、紫外灯灭菌10 min，每周空气消毒1次，每天换气2次，每次约2 h，空调恒温，白天明、晚上暗。实验前动物在实验室饲养适应1周。

1.2 仪器

Stat Fax 2100型酶标仪（美国 Awareness Technoligy,Inc公司）；TP1004型电子天平 （奥豪斯国际贸易上海有限公司）；TGL20M台式高速冷冻离心机（湖南迈达仪器有限公司）；DK-S22型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）。

1.3 药品与试剂

艾胶汤中的阿胶、艾叶、干地黄、当归、川芎、白芍、甘草等药材购于长沙市老百姓大药房东塘店，经湖南省食品药品检验研究院方石林主任药师鉴定为《中华人民共和国药典》正品；宫血宁胶囊（云南白药集团股份有限公司，0.13 g/粒，成人一日口服6粒，批号 20150612）；E2、P、T 放射免疫测定试剂盒（上海生物试剂公司，批号 20150302、20150511、20150408）；ET、6-Keto-PGF1α和 TXB2试剂盒（解放军总医院科技开发中心放免所，批号 20150705、20150703、20150620）。

2 实验方法

2.1 药物的炮制

2.1.1 全方生品 各药物项下净选加工或切制的同批饮片。

2.1.2 部分炮制 仅将方中艾叶炒炭、地黄蒸制成熟地黄，其他药物均生用。

2.1.3 全方炮制a 蛤粉炒阿胶、艾叶炭、熟地炭、当归炭、白芍炭、酒川芎、蜜甘草。

2.1.4 全方炮制b 蒲黄炒阿胶、醋艾叶、熟地黄、酒当归、酒白芍、酒川芎、蜜甘草。

以上各不同炮制组合方中药物的炮制参照文献方法炮制[5-7]。

2.2 药物的提取

称取当归 54 g，川芎 36 g，艾叶 54 g，加药物重量10倍量水提取挥发油至油不再增加为止；地黄108 g，白芍72 g，甘草36 g，置不锈钢锅中，加8倍量的水浸泡1 h，再煮沸60 min，过滤，药渣再加6倍量水煮沸40 min，过滤，合并滤液，加提取挥发油时滤出的药液，置水浴上浓缩，分别加阿胶生品36 g，或不同炮制品烊化（溶解），挥发油加0.5%吐温-80，混匀，再加入药液中，最后加蒸馏水至664 mL(每mL药液含饮片0.58 g)备用。贮存于4℃冰箱中。

2.3 对去卵巢成年大鼠E2、P、T的测定

取SD雌性大鼠，用乙醚作浅麻醉，常规消毒，摘除双侧卵巢，分笼饲养，5 d后逐只作阴道涂片，检查上皮角化细胞，每天一次，连续5 d，检查剔除因摘除卵巢不全而出现动情期的大鼠，随机将去卵巢大鼠按体质量分成去卵巢空白对照组和生品组、部分炮制组、全方炮制a、全方炮制b及阳性对照组，另设正常空白组，每组10只。灌胃给予胶艾汤各炮制组合方5.8 g/kg，空白组灌胃等体积0.5%吐温-80，阳性对照组灌胃宫血宁，一天一次，连续一周，于末次给药1 h后，腹主动脉取血，分离血清，放射免疫法测定 E2、P、T 含量[10-11]。

2.4 对雄性大鼠 ET、6-Keto-PGF1α、TXB2的测定

取SD雄性大鼠，空白对照组和生品组、部分炮制组，全方炮制a，全方炮制b，阳性对照组，每组10只。灌胃给予胶艾汤各炮制组合方5.8 g/kg，空白组灌胃等体积0.5%吐温80，阳性对照组灌胃宫血宁，一天一次，连续一周，于末次给药1 h后，腹主动脉取血，加入放有肝素（1%）溶液的离心管内抗凝，在4℃下以3 000 r/min离心10 min，分离血浆，按试剂盒说明，采用放射免疫分析法测定ET、6-keto-PGF1α和 TXB2含量。

2.5 统计分析

3 实验结果

3.1 对去卵巢成年大鼠性激素E2、P、T的作用

实验表明，各组动物造模后，E2、P、T等均显著下降，与正常空白组比P＜0.01，说明造模成功。给药后胶艾汤各组各指标均有增加，但生品组增加不明显，与模型组比P＞0.05，其余各组与模型组比P＜0.05 或 P＜0.01；各炮制组作用均强于生品组，除全方炮制 b 具有显著性差异（P＜0.05）外，其余无统计学意义；全方炮制a与b作用也强于宫血宁组，但无统计学意义，P＞0.05。 详见表 1。

表1胶艾汤各炮制品组合方对激素水平的影响 （n=10，±s）

表1胶艾汤各炮制品组合方对激素水平的影响 （n=10，±s）

注：与模型组比 *P＜0.05，**P＜0.01；与生品组比 ＃P＜0.05。

炮制方法正常空白组模型空白生品组部分炮制组全方炮制a全方炮制b宫血宁组剂量/（g·kg-1）--5.8 5.8 5.8 5.8 0.6 E2/（pg·mL-1）74.2±17.1**37.5±10.3 47.5±16.9 50.3±12.9*56.1±17.5**63.8±15.8**＃55.7±14.6**P/（ng·mL-1）1.07±0.21**0.68±0.18 0.74±0.17 0.83±0.22 0.87±0.18*0.91±0.19*＃0.86±0.20*T/（pg·dL-1）3.82±0.65**2.16±0.72 2.73±0.83 2.89±0.63*2.93±0.59*3.16±0.77**2.91±0.82*

3.2 对雄性大鼠 ET、6-keto-PGF1α和 TXB2的影响

实验表明，给药后胶艾汤各组ET和TXB2等指标均有增加，但生品组TXB2增加不明显，与空白组比 P＞0.05， 其余各给药组与空白组比 P＜0.05 或0.01；6-keto-PGF1α均有所降低，各给药组与空白组比 P＜0.05 或 P＜0.01； 各炮制组作用均强于生品组，除全方炮制b与生品组比具有显著性差异P＜0.05外，其余无统计学意义，详见表2。

表2胶艾汤各炮制品组合方对ET、6-keto-PGF1a和TXB2的影响 （n=10，±s）

表2胶艾汤各炮制品组合方对ET、6-keto-PGF1a和TXB2的影响 （n=10，±s）

注：与生品组比 *P＜0.05。

炮制方法正常空白组生品组部分炮制组全方炮制a全方炮制b宫血宁组剂量/（g·kg-1）-5.8 5.8 5.8 5.8 0.6 ET/（pg·mL-1）93.6±19.1*120.5±22.8 138.7±21.6 140.1±19.9 145.3±22.8*144.2±20.5 6-keto-PGF1a/（pg·mL-1）221.3±22.7*195.6±24.5 187.4±21.9 180.5±18.9 172.8±21.6*182.7±22.8 TXB2/（pg·mL-1）196.8±18.8*210.7±21.7 220.3±19.8 225.8±20.3 237.6±22.9*222.5±21.6

4 讨论

4.1 对激素影响

中医崩漏是指妇女非周期性子宫出血，其发病急骤，暴下如注，大量出血者为“崩”；病势缓，出血量少，淋漓不绝者为“漏”。与西医功血症类似，以青春期和更年期妇女多见。青春期少女下丘脑-垂体-卵巢轴尚未建立，更年期妇女卵巢衰退，导致激素水平下降，孕酮为孕激素，睾丸酮有较强的孕激素样作用，其治疗功血主要作用机制是雌激素作用下持续增生的子宫内膜转化为分泌期，从而达到止血效果，亦可起到药物性刮宫作用[12]。实验表明，胶艾汤对去势大鼠激素水平均有提高作用，炮制品作用强于生品，说明胶艾汤治疗崩漏其方中药物须采用科学的炮制方法，方能发挥最佳疗效。

4.2 对 ET影响

ET是目前所发现的最强的缩血管物质，主要通过与靶细胞膜上的ET受体结合引起生物效应。实验表明，胶艾汤能增强大鼠血浆中ET的含量，说明胶艾汤具有增加血管内皮细胞分泌内皮素的作用，其止血作用与其缩血管物质ET增加有关。

4.3 对 6-Keto-PGF1α与 TXB2影响

TXA2和PGI2是调节血管壁紧张性的一对重要血管活性物质。TXA2可促进血小板聚集和血栓形成而止血，PGI2具有抑制血小板聚集和促进血管扩张作用，二者在血液中迅速代谢为无活性的TXB2与6-Keto-PGF1α[13]。本实验研究表明，胶艾汤能显著升高大鼠血浆中TXB2和降低6-Keto-PGF1α的含量，说明其对血小板聚集、血管痉挛收缩或形成具有促进作用，这与其止血功效吻合，且炮制后作用显著增强。说明中药炮制的重要性、科学性与临床疗效的关联性。

胶艾汤对家兔子宫收缩作用、对大鼠凝血酶原时间与纤维蛋白溶解活性强弱顺序是全方炮制b＞全方炮制a＞部分炮制＞全方生品[14]，与本文研究结果一致。

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[14]蒋晓煌，蒋孟良，贺卫和,等.胶艾汤不同炮制组方对动物子宫收缩、PT与纤溶活性的影响 [J].中国医院药学杂志，2017,37（5）：53-56.

（本文编辑 苏 维）

Effects of Jiaoai Decoction with Different Processing Methods on Hormone and Clotting Mechanism of Animals

JIANG Xiaohuang,JIANG Mengliang*,HE Weihe,LI Hong,ZENG Ting,HE Pingxin,ZHAO Xinyu,ZHANG Biaobiao,ZHAO Zihan,DENG Xiaoxiao
(Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

Objective To optimize processing method of Jiaoai decoction.Methods The effects of Jiaoai decoction with four different methods,all crude drugs,part proccesing drugs,all drugs processing a,all drugs processing b,on hormone and clotting mechanism in rats were compared.Results The effects order of Jiaoai decoction on estradiol,progesterone,testosterone,ET,6-Keto-PGF1α and TXB2 of rats was all drugs processing b ＞all drugs processing a＞ part proccesing drugs ＞ all crude drugs.Conclusions The hemostatic effect of all drugs processing bin Jiaoai decoction was the strongest.

Jiaoai decoction;Chinese crude drug processing;estradiol； progesterone； testosterone； ET； 6-Keto-PGF1α；TXB2

R283；R285.5

A

doi：10.3969/j.issn.1674－070X.2017.06.003

本文引用：蒋晓煌，蒋孟良，贺卫和，李 红，曾 婷，何坪欣，赵新昱，张彪彪，赵梓含，邓潇潇.胶艾汤不同炮制组方对动物激素水平与凝血机制的影响[J].湖南中医药大学学报，2017,37（6）：591-593.

2016-08-06

湖南省自然科学基金资助项目（14JJ2107）。

蒋晓煌，男，硕士，主要从事中药炮制研究。

* 蒋孟良，男，教授，硕士研究生导师，E-mail：hhjmL@163.com。

本文引用：谭旭仪，陈献韬，高书图，段小波.补肾、活血、祛痰法对激素性股骨头坏死模型血液流变学的影响[J].湖南中医药大学学报，2017,37（6）：594-598.