不同加工方法对延胡索3种生物碱含量的影响

龙全江，张颖，徐雪琴



不同加工方法对延胡索3种生物碱含量的影响

龙全江，张颖，徐雪琴

安徽中医药高等专科学校，安徽芜湖 241000

目的 比较不同加工方法对延胡索药材中有效成分的影响。方法 采用HPLC测定延胡索中原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量。色谱柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺调pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。在上述色谱条件下，3种成分均得到很好分离，各成分质量与峰面积在相应范围内线性关系良好（2≥0.999 6），平均加样回收率分别为100.31%、99.34%、99.34%（RSD≤2.70%）。结果 大号规格（鲜品直径2.0～3.0 cm）煮制时间5～6 min、中号规格（鲜品直径1.5～1.9 cm）煮制时间2～4 min、小号规格（鲜品直径0.7～1.4 cm）煮制时间1～2 min者中原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量及3种生物碱总含量比各组其他样品高，经煮制加工的延胡索药材样品中3种生物碱的含量总体低于蒸制加工所得的延胡索药材。结论 本研究为延胡索药材产地加工工艺的确定提供了依据。

延胡索；蒸制；煮制；生物碱；高效液相色谱法

延胡索为罂粟科植物延胡索W.T.Wang的干燥块茎，具有显著的镇痛、镇静、催眠作用，对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病有较好的治疗效果[1]。《中华人民共和国药典》收载的产地加工方法为“置沸水中煮至恰无白心时，取出，晒干”[2]。延胡索主产于浙江东阳、磐安等地，陕西、安徽、江苏、湖北、湖南等地也产[3]。产地加工传统习惯上主要依据药材大小掌握不同的煮制时间，煮至中心有一小白点时即可[4]。查阅文献发现，有研究者以延胡索乙素为考察指标，分析了不同采收期及不同加工方法对延胡索药材的影响，结果以蒸制加工延胡索乙素含量高[5]；张丽宏等[6]以延胡索乙素、原阿片碱为指标的研究，认为微波法比煮法为好；孙乙铭等[7]同样以延胡索乙素、原阿片碱为指标对产地加工工艺进行研究。

中药以多成分起效为其作用特点，延胡索中所含延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素（原阿片碱）等生物碱类化学成分[8-9]具有很强的镇痛、镇静和抗心律失常等多种生理活性[1]。本研究在对延胡索产地加工方法进行实地调研的基础上，结合生产实际情况，通过测定不同加工方法的延胡索药材中去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱3种生物碱成分的含量，对其产地加工方法进行全面考察和探讨，更加客观、全面地评价产地不同加工方法对延胡索药材质量的影响。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱检测仪（包括G1322A在线脱气机、G1312B二元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B DAD检测器、Agilent 1260色谱工作站），Agilent HC-C18（2）色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm，NO.588905-902），DV215CD十万分之一电子分析天平（美国OHAUS），JK-250DB型超声波清洗器（合肥金尼机械制造有限公司）。

延胡索乙素对照品（批号CFN99553，纯度98%）、去氢紫堇碱对照品（批号CFN90330，纯度98%）、原阿片碱对照品（批号CFN99399，纯度98%），武汉天植生物技术有限公司；乙腈（色谱纯），天津市大茂化学试剂厂，娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 样品采集与制备

延胡索鲜药材于2014年5月5日采自安徽省芜湖县花桥镇，不同大小规格的样品均采自同一块药田，全部样品经本校中药生药教研室汪荣斌副教授鉴定为罂粟科植物延胡索W.T.Wang的块茎。

延胡索鲜药材经淘洗，净选，除去外皮等非药用部分，略晾干多余水分，按大小对药材进行分档，大、中、小规格分别编号为A、B、C，依据传统经验，鲜品直径大号为2.0～3.0 cm，中号为1.5～1.9 cm，小号为0.7～1.4 cm。根据传统加工方法调研情况，取不同档样品（每份500 g）分别进行蒸、煮制备，取出，继续晒至干。晒干的成品呈不规则扁球形，表面黄色或黄褐色，具不规则网状皱纹。晒至药材不再减失质量，判断为药材已晒干，计算折干率。折干率（%）＝晒干后成品质量÷鲜药材质量×100%。样品加工方法、加工后性状、折干率、含水量见表1（f为加工前放置2周样品）。

表1 延胡索药材样品加工性状、折干率及含水量

3 方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺调pH 5.3）＝26∶74；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；自动进样，进样量10 μL。在此条件下，理论塔板数按延胡索乙素峰、原阿片碱峰和去氢紫堇碱峰计算均不低于3000[10]。空白溶剂色谱图中在与延胡索乙素、去氢紫堇碱、原阿片碱色谱峰相应位置上无峰，说明此系统条件无干扰。色谱图见图1。

3.2 对照品溶液制备

精密称取原阿片碱对照品1.46 mg、去氢紫堇碱对照品2.09 mg、延胡索乙素对照品3.36 mg，置于1000 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解，即得对照品溶液。

3.3 供试品溶液制备

精密称取样品粉末0.5 g，加水25 mL，超声提取2次，30 min/次，过滤，合并滤液，定容至100 mL容量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

注：A.混合对照品；B.供试品；1.原阿片碱；2.去氢紫堇碱；3.延胡索乙素

3.4 线性关系考察

取3种对照品溶液，按“3.1”项下色谱条件分别依次进样2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0 μL，测定峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。原阿片碱＝1270.8＋0.004 3，2＝0.999 9，在0.002 92～0.043 8 μg范围内线性关系良好；去氢紫堇碱＝2108.2－1.847 2，2＝0.999 6，在0.004 18～0.062 7 μg范围内线性关系良好；延胡索乙素＝906.56－1.421 2，2＝0.999 6，在0.006 72～0.100 8 μg范围内线性关系良好。

3.5 精密度试验

精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，结果原阿片碱峰面积RSD＝2.71%，去氢紫堇碱峰面积RSD＝1.70%，延胡索乙素峰面积RSD＝2.70%，表明精密度良好。

3.6 重复性试验

取同一批号样品，按“3.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，原阿片碱、去氢紫堇碱和延胡索乙素平均含量分别为1.87、0.33、0.56 mg/g，RSD分别为2.19%、2.17%、2.18%，表明方法重复性良好。

3.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h进样测定，原阿片碱峰面积RSD＝4.04%，去氢紫堇碱峰面积RSD＝1.56%，延胡索乙素峰面积RSD＝1.79%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.8 加样回收率试验

精密称取6份已知含量的样品各0.25 g，添加各对照品溶液适量，按样品含量测定项下方法操作，测得原阿片碱、去氢紫堇碱和延胡索乙素平均加样回收率分别为100.31%、99.34%、99.34%，RSD分别为1.60%、2.27%、2.70%，见表2。

表2 3种生物碱加样回收率试验

3.9 样品的测定

取各制备好的样品，分别制备供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定3种成分含量，结果见表3。

表3 延胡索样品中3种生物碱含量测定结果（mg/g，以干燥品计）

4 讨论

比较延胡索产地加工方法发现，经煮制加工的延胡索药材中原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量及3种生物碱总含量总体低于蒸制加工所得的延胡索药材，从多指标成分角度分析，延胡索药材产地加工采用蒸法较好。

在对延胡索药材传统加工企业调研时发现，不同大小药材的煮制时间不同，一般大者5～6 min，小者3～4 min。试验中根据药材大小分别设定加工时间并通过药材切面观察药材加工程度。从原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量及3种生物碱总含量变化看，大号规格（鲜品直径2.0～3.0 cm）煮制时间5～6 min者被检测成分含量高，中号规格（鲜品直径1.5～1.9 cm）煮制时间2～4 min者被检测成分含量高，小号规格（鲜品直径0.7～1.4 cm）煮制时间1～2 min者被检测成分含量高。上述规格试验样品继续延长煮制时间则被检测成分含量下降。试验还对煮法与蒸法进行了比较研究，在加工时间相同情况下，蒸法比煮法加工者被检测成分含量高。试验结果表明，不合理延长煮制时间，有效成分会有所损失，而蒸法则保留有效成分较好。

调研中还发现，延胡索药材存在加工前趁鲜放置（连带泥土）一段时间后再加工的现象，试验中另设该组样品（连带泥土放置2周）进行比较研究。结果表明，在相同加工条件下，趁鲜放置会使被检测成分含量下降，可见延胡索产地加工应以采收后即行加工为好。另外，不同加工品规格之间被检测成分含量差异明显，规格越小的延胡索药材有效成分含量越高。

综上所述，不同加工方法对延胡索药材有效成分含量有影响。不同规格其煮制时间、煮制程度、蒸制时间、蒸制程度等都可能影响测定结果，因此，制定规范化的操作规程很有必要。本研究为制定延胡索产地加工工艺规范提供了参考依据。

[1] 龙全江,徐雪琴,王晓阁.延胡索化学成分、药理作用与产地加工技术研究概况[J].甘肃中医学院学报,2014,31(5)：78-80.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社,2015：139.

[3] 徐雪琴,龙全江.不同产地延胡索采收加工技术调查与分析[J].现代中药研究与实践,2015,29(6)：7-9.

[4] 龙全江.中药材加工学(第二版)[M].北京：中国中医药出版社,2010：69.

[5] 任江剑,徐建中,俞旭平.不同采收期和不同加工方法对延胡索药材的影响[J].中药材,2009,32(7)：1026-1028.

[6] 张丽宏,游修琪,肖碧英,等.不同加工方法对延胡索质量的影响[J].中成药,2011,33(3)：471-476.

[7] 孙乙铭,俞旭平,徐建中,等.延胡索产地加工的工艺研究[J].中国现代应用药学,2011,28(10)：923.

[8] 汤法银,聂爱国,李艳玲.中药延胡索的研究进展[J].临床和实验医学杂志,2006,5(2)：185-186.

[9] 许翔鸿,王峥涛,余国奠,等.延胡索中生物碱成分的研究[J].中国药科大学学报,2002,33(6)：483-486.

[10] 田永亮,窦志英,曹柳,等.延胡索产地醋煮工艺研究[J].时珍国医国药,2010,21(5)：1184-1186.

Effects of Different Processes on Contents of Three Alkaloid Ingredients in Coridalis Rhizoma

LONG Quan-jiang, ZHANG Ying, XU Xue-qin

Objective To explore the effects of different processes on the contents of three alkaloid ingredients in Coridalis Rhizoma. Methods The contents of three alkaloid ingredients (protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine) were determined by HPLC. Agilent HC-C18(2) column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) was set at 35 ℃; acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution (triethylamine adjusted pH 5.3) (26:74) was set as mobile phase; the flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength was set at 280 nm; the injection volume was 10 μL. The three components were separated well under these chromatographic conditions. The linear relationship between the mass of each component and the peak area was good (2≥0.999 6). The average recoveries were 100.31%, 99.34%, and 99.34%, respectively (RSD≤2.70%). Results The contents of protopine, dehydrocorydaline, tetrahydropalmatine and the total contents of three alkaloids were higher than other groups in large size samples (diameter of fresh products was 2.0–3.0 cm) which were boiled 5–6 minutes, the medium size samples (diameter of fresh products was 1.5–1.9 cm) which were boiled 2–4 minutes and the small size samples (diameter of fresh products was 0.7–1.4 cm) which were boiled 1–2 minutes. The contents of alkaloid in boiled process were lower than steamed process. Conclusion The results of study provide an experimental basis for origin processing of Coridalis Rhizoma.

Coridalis Rhizoma; steaming process; boiling process; alkaloids; HPLC

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.021

R282.4

A

1005-5304(2017)07-0090-04

安徽省高等教育振兴计划人才项目-省级专业带头人资助项目（2013年）；芜湖市科技计划产学研合作重点项目（2013cxy03）

（2016-08-27）

（2017-01-09；编辑：陈静）