复方中药增免颗粒药材提取工艺研究

赵立军,崔敏,储君，宋志元，孙雪峰，梁群超，张要齐*

（1.郑州市动物疫病预防控制中心，河南郑州 450016；2.新郑市科学技术局，河南新郑 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑451162）

复方中药增免颗粒药材提取工艺研究

赵立军1,崔敏2,储君3，宋志元3，孙雪峰3，梁群超3，张要齐*3

（1.郑州市动物疫病预防控制中心，河南郑州 450016；2.新郑市科学技术局，河南新郑 451199；3.河南惠通天下生物工程有限公司，河南新郑451162）

目的 优选复方中药增免颗粒药材提取工艺。方法 用水量、煎煮时间、煎煮次数为参考因素，总多糖含量和干膏得率为指标，采用正交设计试验选择优良水提工艺。结果 最佳水提工艺组合为A3B3C2，即加水量为12倍，每次3h，煎煮2次。结合药材的吸水率试验，在第一次加水时需要比正常水量多加入2.1倍药材量的水量。结论：本试验优选的提取工艺稳定、可行，为复方中药增免颗粒药材提取提供参考。

中药；增免颗粒；正交设计；提取工艺

复方中药增免颗粒方剂是由黄芪、党参、淫羊藿等几味药组成。现代药理研究表明：黄芪具有提高免疫功能，增强抗氧化作用，保护细胞活力，抗菌及抑制病毒作用；党参具有补中益气，健脾益肺之功效。增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用；淫羊藿具有补肾阴、强筋骨、祛风湿等多种功效。能够改善心血管系统功能、调节内分泌、改善骨密度、增强免疫力。复方中药增免颗粒具有提高机体免疫、促进机体生长发育等功效。为确定其最佳提取工艺，本文采用正交设计试验以总多糖含量和干膏得率为控制指标，对其提取工艺进行研究。

1 材料与试药

1.1 仪器与设备

FE120型中药粉碎机 （河北省黄烨市新兴电器厂）；D2F-1ASB真空干燥箱 （北京科伟仪器有限公司）；DH-360电热恒温培养箱 （北京科伟仪器有限公司）；AB135S电子天平 （帅宁仪器上海有限公司）；DZKW-4型电热恒温水浴锅（江苏金坛仪器有限公司）；MD-2270MI微波炉（青岛海尔微波炉制品有限公司）；UV-5300紫外可见光分光光度计（上海元析仪器有限公司）；KQ-250TDv超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 药材与试剂

黄芪、黄精、党参、淫羊藿等（购于河南禹州中药材市场）；无水乙醇 （烟台双双化工有限公司）、葡萄糖标准品 （中国兽医药品监察所）、苯酚、浓硫酸（天津风船化学试剂科技有限公司）。

2 方法与结果

2.1 测定方法

2.1.1 干膏得率的测定方法

准确称取处方量的中药材，提取，滤过，滤液合并，冷藏静置，过滤，减压浓缩至每ml含1g生药，精密量取浓缩后药液10mL置已干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后,于105℃的干燥箱中干燥3小时,再移置干燥器中,冷却30min后迅速精密称定重量，计算药液的总固量，作为每次实验的干浸膏得率。

2.1.2 总多糖含量测定方法[1]

2.1.2.1 线性关系考察

精密称取已于105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100mg于干净小烧杯中，加水溶解并定量移至100ml的容量瓶中，加水稀释至容量刻度，混匀，即得1mg/ml的葡萄糖标准品溶液。分别精密吸取该葡萄糖标准品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml置于100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度。分别吸取以上各种浓度的葡萄糖标准品稀释标准溶液2ml于具塞试管中，加5%的苯酚试液1ml，混匀，迅速加5ml浓硫酸，剧烈振摇2分钟，然后置沸水浴加热15分钟，取出置冷水中迅速冷却，备用。以苯酚-硫酸溶液作空白，于491nm处测定吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，建立标准曲线，得回归方程。回归方程为y=13.014x-0.008，r2=0.9911。

图1 标准曲线图

2.1.2.2 供试品溶液制备

提取液减压浓缩至每1ml含1g生药，精密量取2.5ml提取浓缩液，3600rpm离心5min去除沉淀，上清液加10ml无水乙醇，振摇，离心10分钟，沉淀水浴蒸干，加水10ml，水浴30分钟，转移至100ml容量瓶中，加水定容，备用。

2.1.2.3 总多糖含量测定方法

取供试品5ml至100ml容量瓶中，加水定容至刻度，取10ml稀释定容至100ml，得待测溶液。精密量取待测溶液2ml于具塞试管中，加5%的苯酚试液1ml，混匀，迅速加5ml浓硫酸，剧烈振摇2分钟，然后置沸水浴加热15分钟，取出至冷水中迅速冷却，以苯酚-硫酸溶液作空白，于491nm处测定吸光度。根据吸光度结果代入回归方程，计算出总多糖浓度。

2.2 药材吸水率考察

取1/5处方量黄芪、党参、黄精、淫羊藿四味药材三份,每份加10倍量水浸泡过夜,直至药材全部被浸透,将未被吸收的水液全部滤出,通过吸水率的公式计算药材吸水率。四味药材的药材吸水率结果如表1所示。

吸水率=(药材湿重-药材干重)/药材干重×100%

表1 药材吸水率考察结果

结果显示，吸水率为211.4%。由于第一次加入时，药材会吸收水分，在第一次加水时需要比正常水量多加入2.1倍药材量的水量。

2.3 水提工艺正交设计

2.3.1 水提工艺L9(34)水平设计

水提工艺的因素水平见表2。

表2 水提因素水平表

2.3.2 水提工艺正交结果及分析

表3 水提工艺正交试验设计及结果

表4 综合评分方差分析

由表3中的直观分析可知，按综合评分标准进行评判时，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞b1，C2＞C3＞C1。由表4可知，各因素影响主次关系C＞A＞B，并且可知A和C因素对提取工艺有显著影响(P＜0. 10)，其中C因素（P＜0.05）,所以从生产实际和经济因素综合考虑，我们选用最佳提取工艺为A3B3C2，即用12倍量水提取两次，每次3h。

2.4 水提工艺验证试验

取1/5处方量的黄芪、淫羊藿、黄精、党参三份，按最佳提取工艺进行提取，测定干膏得率和总多糖含量，所得结果如表5。

表5 水提工艺验证试验表

结果表明，RSD干膏得率及总糖含量均小于3%，该工艺稳定、可行。

3 小结与讨论

评价指标选择：复方中药增免颗粒药材均含多糖，查阅文献资料[2]，淫羊藿多糖、黄芪多糖、党参多糖等都有增强免疫力的作用，故总多糖含量测定作为的评价指标。由于为水提液,干膏得率也是重要的一个评价提取工艺的指标。根据文献[3],并结合本工艺,最终选择总多糖含量和干膏得率作为优选工艺的评价指标。

通过L9（34）正交试验，设置了三个因素即加水量、煎煮时间和煎煮次数，每个因素设置三个水平。以干膏得率和总多糖含量为评价指标，并结合生产实际，确定了最佳的水提工艺。最佳水提工艺组合为A3B3C2，即加水量为12倍，每次煎煮3h，总共煎煮2次。且由药材的吸水率试验可知，在第一次加水时需要比正常水量多加入

2.1 倍药材量的水量。

通过对最佳水提工艺的验证试验，表明所得最佳的水提工艺稳定可行，为复方中药增免颗粒药材提取提供参考。

[1]王宏洁、李鹏跃、刘婷等.苯酚-硫酸法测定清开灵注射液中总多糖的含量[J].中国实验方剂学杂志, 2009,15(11):3-5

[2]李龙.黄芪多糖、淫羊藿多糖免疫增强作用研究[D].新疆农业大学硕士学位论文.2013.12.

[3]苏玉顺、李艳君、赵方振等.紫外-可见分光光度法在植物多糖含量测定中的应用[J].光谱实验室, 2011,28(3):1102-1105.

S853.73

B

1003-8655（2017）03-0010-03

2017-01-06

赵立军:1981-,兽医师，从事畜牧兽医工作,

邮箱：798697489@qq.com

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张要齐（1978-），高级经济师，硕士，从事农业推广工作，httx0371@126.com