新生儿溶血病Rh血型分布与临床分析

詹洁瑜　舒琳琳　颜思璐　李俊勋

【摘要】 目的：为探究新生儿溶血病Rh血型分布情况。方法：选取2014年2月-2017年2月本院检验科收检的633例新生儿高胆红素血症、疑似新生儿溶血病患儿及其母亲的ED-TA抗凝管抗凝血样品为研究对象。采用盐水试管法进行ABO和Rh血型检测，微柱凝胶法进行新生儿溶血病溶血三项（新生儿直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、释放试验）的检测，并对患者的血型分布和溶血三項检查结果进行分析。结果：研究纳入的633例疑似新生儿溶血病样本中，有ABO血型系统新生儿溶血病（ABO HDN）438例（69.19%），Rh血型系统新生儿溶血病（Rh HDN）17例（2.69%）；研究纳入的633例疑似新生儿溶血病样本中，直抗人球蛋白试验阳性91例，阳性率为14.38%，游离抗体试验阳性285例，阳性率为45.02%，释放试验阳性455例，阳性率为71.88%；455份阳性标本中ABO HDN 438例，占总阳性标本的96.26%，Rh HDN 17例，占总阳性标本的3.74%；在Rh血型系统的HDN中，以抗-D溶血为主，占Rh血型系统的HDN的76.47%，抗-E、抗Ec和抗-C分别占11.76%、5.88%和5.88%；疑似患儿出生4 d内采集血液样品的检测阳性率与出生4 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：新生儿溶血病以ABO血型系统为主，占总阳性标本的96.26%，Rh血型系统的HDN占总阳性标本的3.74%，其中，在Rh血型系统的HDN中，以抗-D溶血为主，占Rh血型系统HDN的76.47%，抗-E、抗-Ec和抗-C分别占Rh血型系统HDN的11.76%、5.88%和5.88%。

【关键词】 新生儿溶血病； Rh血型分布； 临床分析

Distribution and Clinical Analysis of Rh Blood Group in Neonatal Hemolytic/ZHAN Jie-yu，SHU Lin-lin，YAN Si-lu，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（17）：113-117

【Abstract】 Objective：To explore the distribution of Rh blood group in neonatal hemolytic disease.Method：From February 2014 to February 2017，633 cases of neonatal hyperbilirubinemia，suspected neonatal hemolytic children and their mothers ED-TA anticoagulation Tube anticoagulant samples for the study.The test of ABO and Rh blood type was carried out by saline test，and the microcolumn gel method was used to detect neonatal hemolytic hemolysis（neonatal direct antiglobulin test，free antibody test and release test），and the blood type distribution and Hemolytic test results were analyzed.Result：633 suspected neonatal hemolytic samples，438 cases（69.19%） were neonatal hemolytic disease（ABO HDN），17 cases（3.74%） were Rhauric neonatal hemolytic disease（Rh HDN）.633 cases of suspected neonatal hemolytic disease，positive control of human globulin test in 91 cases，the positive rate was 14.38%，free antibody test positive 285 cases，the positive rate was 45.02%，the release test positive 455 cases，the rate was 71.88%，438 positive specimens，96.26% of ABO HDN of the total positive specimens，17 cases of Rh HDN，3.74% of the total positive specimens，2 cases of other irregular antibodies，accounting for 0.44%.In the system HDN，anti-D hemolysis mainly accounted for 76.47% of HDN of Rh blood group system，anti-E，anti-Ec and anti-C accounted for 11.76%，5.88% and 5.88% respectively；suspected children were born within 4 d The positive rate of blood samples was statistically significant（P<0.05） compared with the positive rate of blood samples collected at 4 days.Conclusion：Neonatal hemolytic disease is mainly ABO blood group system，accounts for 96.26% of the total positive specimens.HDN of Rh blood system accounts for 3.74% of the total positive samples.Among HDNs of Rh blood system，anti-D was the most， accounted for 76.47%，and anti-E， anti-Ec and anti-C accounted for 11.76%，5.88% and 5.88%.

【Key words】 Neonatal hemolytic disease； Rh blood group distribution； Clinical analysis

First-authors address：The First Peoples Hospital of Baiyun District Guangzhou，Guangzhou 510410，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.17.029

新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）是临床上最为常见的新生儿科血液疾病，包括同种被动免疫、红细胞酶缺乏、红细胞膜缺陷及感染在内的很多因素均可以引发HND发生，但同种被动免疫是其中最为重要的病因之一[1]。同种被动免疫导致的新生儿溶血病是母体内存在的与其胎儿不配合的IgG性质的抗体经胎盘进入胎儿体内而导致的溶血性贫血，30余个血型系统的抗原均可导致此病的发生，但多见于ABO血型系统，Rh血型系统次之。其中，由于Rh血型系统母子血型不合导致的新生儿溶血病不仅发病早、发展迅速，而且病情更为严重，治疗不及时可导致核黄疸甚至死亡，因此Rh血型系统的新生儿溶血病应该引起足够的重视。Rh血型系统是人类最复杂和最富有多态性的血型系统，通过血清学检测方法已经检测出48种Rh血型抗原，Rh血型的这些抗原均可导致新生儿溶血病的发生，但其中的D、C、c、E和e抗原是与临床关系最为密切的5种Rh血型抗原[2-3]。同时，D抗原在这5种抗原中免疫原性最强，人体血液的D抗原阴性就是Rh阴性血型。妊娠和输血过程中若D抗原不合可以导致IgG抗D抗体的产生，这是导致Rh阴性孕妇流产和新生儿溶血病发生的主要原因，也是导致Rh阴性个体输入Rh阳性（即D抗原阳性）血液后发生溶血性输血反应的原因所在。因此，有必要对新生儿溶血病Rh血型分布进行研究，以便进一步了解Rh血型不合导致的新生儿溶血病的发病机理，指导新生儿溶血病的预防、诊断和治疗。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年2月-2017年2月本院检验科收检的633例有新生儿高胆红素血症、疑似新生儿溶血病患儿及其母亲的ED-TA抗凝管抗凝血样品3 mL为研究对象。新生儿溶血病患儿的血液样品均采自出生1周以内的患儿，其中，男性患儿和女性患儿的比例为1∶1。纳入标准：出生1周以内者；疑似新生儿溶血病者；家属同意参与者。排除标准：出生时间1周以上者；合并其他严重疾病者；家属拒绝参与研究者。该研究已经本院伦理学委员会审核批准，患者家属知情同意并签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 血型及新生儿溶血病溶血三项检测 选用盐水试管法进行ABO和Rh血型检测；微柱凝胶法进行新生儿溶血病溶血三项（新生儿直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、释放试验）的检测；实验严格按照试剂说明书及《全国临床检验操作规程》进行操作。

1.2.2 红细胞不规则抗体筛选及鉴定 分别在标记有Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的3个微柱孔反应池中，加入50 μL浓度1%～2%要筛检的标准红细胞，再分别在3个反应池中加入50 μL待检血清，将其放置于微柱凝胶专用孵育器中37 ℃孵育10 min；取出后使用专用微柱凝胶离心机进行离心，观察结果。红细胞全部沉于微柱底部者为阴性，全部或部分红细胞滞留于微柱凝胶孔中者为阳性。如红细胞不规则抗体筛选阳性需进一步进行抗体鉴定，操作方法同上。

1.3 诊断标准 母婴血型不合；婴儿符合高胆红素血症诊断标准；HDN溶血三项结果下列条件之一：溶血三项均为阳性、释放试验阳性、释放试验阳性和游离抗体试验阳性、释放试验阳性和直接抗人球蛋白试验阳性、直接抗人球蛋白试验阳性和游离抗体试验阳性。

1.4 统计学处理 研究所得原始数据首先使用Excel 2007进行初步整理，然后使用SPSS 18.0统计软件对数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 溶血三项试验及ABO以外抗体筛查结果分布 在研究纳入的633个疑似新生儿溶血病样本中，ABO血型系统HDN 438例（69.19%），Rh血型系统HDN 17例（2.69%）。研究纳入的633个疑似新生儿溶血病样本中，直抗人球蛋白试验阳性91例，阳性率为14.38%；游离抗体试验阳性285例，阳性率为45.02%；释放试验阳性455例，阳性率为71.88%；释放试验的阳性率最高，游离抗体试验次之，直抗人球蛋白试验最低。溶血三项试验及ABO以外抗体筛查结果分布情况，见表1。

2.2 HDN阳性样本血型系统及其特异性分布 633份疑似新生儿溶血病样本中含有阳性标本455份，阳性率为71.88%。其中ABO血型系统HDN 438例，占总阳性标本的96.26%；Rh血型系统HDN 17例，占总阳性标本的3.74%。其中，在Rh血型系统的HDN中，以抗-D溶血为主，占Rh血型系统的HDN的76.47%，抗-E、抗Ec和抗-C分别占11.76%、5.88%和5.88%。HDN阳性样本血型系统及其特异性分布。

2.3 HDN阳性率与疑似患儿样本采集时间的关系 疑似患儿出生1 d采集血液样品的检测阳性率与出生1 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；疑似患儿出生2 d内采集血液样品的检测阳性率与出生2 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；疑似患兒出生3 d内采集血液样品的检测阳性率与出生3 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；而疑似患儿出生4 d内采集血液样品的检测阳性率与出生4 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.05）；疑似患儿出生5 d内采集血液样品的检测阳性率与出生5 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.05）；疑似患儿出生6 d内采集血液样品的检测阳性率与出生6 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.01）。HDN阳性率与疑似患儿样本采集时间的关系情况。

3 讨论

新生儿溶血病（HDN）是由母婴血型不合导致新生儿免疫性溶血引起的疾病。其中比较常见的是ABO和Rh血型系统的HDN，其他系统的HDN发生较少。在国外以Rh血型不合引起的HDN为主，而我国以ABO血型不合引起的HDN为主，发病率为15.6%[4-5]。

ABO HDN是由母婴ABO血型不合导致的新生儿溶血病，常发生于母亲为O型血，而新生儿为A型或B型血的情况，且由抗-A引起的HDN较抗-B引起的更为常见，但抗-B型的病情比抗-A型的更为严重[6]。但这也不是绝对的，Deng等[7]（2008年）报道了1例母亲为O型，所生的子女为CisAB型的特殊ABO-HDN，患儿血清中不仅含有IgG类抗-A抗体，也含有IgG类抗-B抗体，该患儿严重贫血，且胆红素血症水平非常高；Wang等[8]（2005年）发现1例母亲为A型所生子女为B型的新生儿溶血病，母亲的血液进中IgG类抗-B抗体的效价>1∶1024。ABO-HDN的溶血一般相对温和、进展较缓慢，同时，由于新生儿红细胞抗原水平较低，因此ABO-HDN很少导致严重的溶血、水肿、核黄疸以及死亡的发生。ABO-HDN的发生机制主要是同种被动免疫。当胎儿从父亲继承了母亲所没有的红细胞抗原作为异体抗原经胎母输血到达母体血液，或母体曾因输血带入本身所没有的异体抗原，这些刺激均会导致母体产生相应的抗体。初次接触异体抗原，主要形成少量的IgM类抗体，产生免疫记忆细胞；当再次遇到相同抗原时，母体免疫记忆细胞迅速被调到，产生大量IgG类抗体，并穿越胎盘屏障进入胎儿体内，与胎儿红细胞上的血型抗原发生特异性结合而导致胎儿溶血的发生[9]。IgG亚型与HDN的严重程度存在相关关系。IgG是母体中唯一一种能够越过胎盘屏障进入胎儿体内并对胎儿红细胞造成破坏的免疫球蛋白。IgG抗体效价与HDN的严重程度存在显著相关关系，是当前进行产前诊断的重要标准，此外HDN的严重程度还受IgG亚型的影响。Lambin等[10]（2002年）研究发现，母体血清中IgG2和IgG4类抗体只有1%，HDN的严重程度是由剩余99%的IgG1和IgG3类抗体决定的。同时，有的体外实验研究显示IgG3在促使单核细胞破IgG致敏的红细胞方面要比IgG1更加有效，但还有研究的报道结果与此并不一致。有研究认为严重的HDN主要是IgG1抗体引起的，而另一些学者认为严重的HDN与IgG1和IgG3有相关关系[11]。总之IgG1和IgG3引起HDN的发病机制及其严重程度还不十分清楚，还需进一步研究。单核吞噬细胞系统的吞噬作用与致敏红细胞表面的受体存在相关关系。致敏红细胞表面表达的IgGFc（FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγRⅢ三类）受体对IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亲和力不同，可介导单核吞噬细胞系统的吞噬作用或抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用使致敏的红细胞遭到破坏。

Rh-HDN是由母婴Rh血型不合引起的，它是国外引起HDN最主要的原因。存在于胎儿红细胞膜上的RhD抗原，其数量随着妊娠时间的延长而不断变化。一般在妊娠的第30～40天形成D抗原。在妊娠早期，其发生率约为3%，中期约为43%，后期约为64%[12]。通常Rh-HDN很少发生于第1胎，而多发生于第2胎，但如果RhD阴性的母亲妊娠前有RhD阳性血液经历，从而获得了初次免疫，当妊娠的第1胎为RhD阳性胎儿时也会引起Rh-HDN的发生，且此时的溶血程度通常更为严重。除RhD外，Rh血型系统的C、c、E、e等抗原均可引起Rh-HDN，但程度不如RhD严重[13]。Rh-HDN的发病机制与ABO-HDN相似，也是同种被动免疫导致的。如果RhD阴性的孕妇第一次妊娠的胎儿是RhD阳性时，胎儿RhD阳性红细胞穿越胎盘到达母体，刺激母体产生抗-D抗体和免疫记忆细胞。此次主要产生的抗体是IgM，由于其不能通过胎盘，故通常情况下第一次妊娠的RhD阳性胎儿不发病。然而，孕妇第2次妊娠RhD阳性胎儿时，胎儿红细胞表面的D抗原可以激活母亲血液中的免疫记忆细胞，并迅速产生IgG抗体，IgG抗体可穿越胎盘，从而引起第2次妊娠RhD阳性胎儿新生儿溶血病的发生[14]。许多研究显示，RhD阴性的孕妇，随怀孕次数的增多其产生抗体的效价就越高，胎儿患病的机会越多，HDN的病情也越严重[15-16]。由于Rh血型系统具有C、c、E、e等多种抗原，他们对应产生的Rh血型抗体的效价也不尽相同，因此他们所致的HDN的严重程度也有明显的差异。其中，以RhD抗体致HDN最為严重，可在产后短时间内导致严重的新生儿溶血反应的发生，如治疗不及时，会引发核黄疸甚至死亡[17]。由抗-E和抗-C等引起的新生儿溶血病是由胎儿血液中的RhE或RhC抗原刺激母体产生相应的抗-E或抗-C抗体而发生Rh血型系统的溶血反应，他们分别被称为RhE和RhC溶血病。抗-D引起Rh-HDN最为常见，由其他Rh血型抗体引起的较为少见。林甲进等[18]（2007年）研究发现，20例Rh血型系统的溶血病，由抗-c引起者仅1例，占5%。杨彩云等[19]（2012年）研究了29例新生儿溶血病患者的情况，发现Rh-HDN患儿母亲23例为RhD阴性，6例为RhD阳性，其中由抗-C引起的溶血病有2例。

本研究通过测定疑似新生儿溶血病患儿的血型、新生儿溶血病溶血三项（新生儿直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、释放试验）及HDN阳性率与疑似患儿样本采集时间的关系对疑似新生儿溶血病患儿的血型分布进行了研究。研究发现，在研究纳入的633例疑似新生儿溶血病样本中，有ABO-HDN 438例（69.19%），Rh-HDN 17例（2.69%）；其中，直抗人球蛋白试验阳性者91例，阳性率为14.38%；游离抗体试验阳性者285，阳性率为45.02%；释放试验阳性者455例，阳性率为71.88%，本研溶血三项的阳性率均高于夏世勤等[20]（2014年）的报道，这可能是由于选择的研究对象的差异导致，但均为释放试验的阳性率最高，游离抗体试验次之，直抗人球蛋白试验最低。本研究中ABO HDN 438例，占总阳性标本的96.26%，这与吴远军等[21]报道的95.63%和孙六娜[22]报道的95.33%非常相似。Rh HDN 17例，占总阳性标本的3.74%，这与林栋等[23]的研究结果一致。疑似患儿出生1 d采集血液样品的检测阳性率与出生1 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；疑似患儿出生2 d内采集血液样品的检测阳性率与出生2 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；疑似患儿出生3 d内采集血液样品的检测阳性率与出生3 d以上采集血液样品阳性率相比，差异无统计学意义（P>0.05）；而疑似患儿出生4 d内采集血液样品的检测阳性率与出生4 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.05）；疑似患儿出生5 d内采集血液样品的检测阳性率与出生5 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.05）；疑似患儿出生6 d内采集血液样品的检测阳性率与出生6 d以上采集血液样品阳性率相比，差异有统计学意义（P<0.01）。

新生儿溶血病以ABO血型系统为主，占总阳性标本的96.26%，Rh血型系统的HDN占总阳性标本的3.74%。在Rh血型系统的HDN中，以抗-D溶血为主，占Rh血型系统的HDN的76.47%，抗-E、抗-Ec和抗-C分别占11.76%、5.88%和5.88%。

参考文献

[1]武延隽，王爱兰，牛秀兰.感染免疫和优生优育[M].北京：人民军医出版社，2004：8.

[2] Gcoff Daniels.人类血型学[M].2版.北京：科学出版社，2007.

[3] Urbhaak S J，Greiss M A.RhD haemolytic disease of the fetus and the newborn[J].Blood Reviews，2000，14（1）：44-61.

[4]余忠清，胡丽华，刘峰.孕妇及胎儿Rh（D/E）免疫性溶血病的诊断与血液治疗[J].中国免疫学杂志，2007，23（2）：164-166.

[5]胡丽华，余忠清，曹奎杰.黄疸患儿ABO、Rh新生儿溶血病发病率的调查[J].中国输血杂志，2002，13（2）：120-121.

[6] Roberts I A.The changing face of haemolytic disease of the newborn[J].Early Human Development，2008，84（8）：515-523.

[7] Deng Z H，Seltsam A，Ye Y W，et al.Haemolytic disease of fetus and newborn caused by ABO antibodies in a cisAB offspring[J].Transfus Apher Sci，2008，39（2）：123-128.

[8] Wang M，Hays T，Ambruso D R，et al.Hemolytic disease of the newborn caused by a high titer anti-group B IgG from a group A mother[J].Pediatr Blood Cancer，2005，45（6）：861-862.

[9] Payam Khaja Pasha R，Shokri F.Immunologic basis and immunoprophylaxis of RhD induced hemolytic disease of the newborn（HDN）[J].Iran J Immunol，2008，5（4）：189-200.

[10] Lambin P，Debbia M，Puillandre P，et al.IgG1 and IgG3 anti-D in maternal serum and on the RBC of infants suffering from HDN：relationship with the severity of the disease[J].Transfution，2002，42（12）：1537-1546.

[11] Wu Q，Zhang Y，Liu M，et al.Correlation of FcyRⅡa（CD32） polymorphism and IgG antibody subclasses in hemolytic disease of the newborn[J].Neonatology，2009，96（1）：1-5.

[12] Urbaniak S J，Greiss M A.RhD haemolytic disease of the fetus and the newborn[J].Blood Rev，2000，14（1）：44-61.

[13] Onesimo R，Rizzo D，Ruggiero A，et al.Intravenous immunoglobulin therapy for anti-E hemolytic disease in the newborn[J].J Matern Fetal Neonatal Med，2010，23（9）：1059-1061.

[14] Moise K J Jr.Management of rhesus alloimmunization in pregnacy[J].Obstet Gynecol，2002，100（4）：600-611.

[15]朱传福，王攻，李京.Rh（D）阴性孕产妇IgG抗体检测分析[J].中国输血杂志，2006，19（2）：128-129.

[16] Ranasinghe E，Goodyear E，Burgess G.Anti-Ce complicating consecutive pregnacies with increasing severity of haemoltic disease of the newborn[J].Transfus Med，2003，13（1）：53-55.

[17]王梁平，彭道波，赵晖.Rh新生儿溶血病临床调查[J].临床血液学杂志，2009，22（1）：96-97.

[18]林甲进，朱碎永，张瑛.Rh新生儿溶血病的血清抗体分析[J].中国实验诊断学，2007，11（12）：1634-1635.

[19]杨彩云，林影，钟雁，等.新生儿Rh溶血病29例临床分析[J].中国新生儿学杂志，2012，27（3）：189-191.

[20]夏世勤，周晓璐，王竹英，等.156例新生儿溶血病患儿血清学检测结果及相关因素分析[J].国际检验医学杂质，2014，35（1）：22-24.

[21]吴远军，吴勇，卢庆辉，等.母婴血型不合HDN患儿致敏红细胞的抗体特异性[J].细胞与分子免疫学杂志，2008，24（7）：727-728.

[22]孙六娜.108例新生儿溶血病患儿血清学检测结果分析[J].检验医学与临床，2012，9（21）：2718-2719.

[23]林栋，胡应明，何子毅，等.596例新生儿溶血病血型血清学检测结果分析[J].中国民族民间医药，2014，7（14）：38-39.

（收稿日期：2017-04-01） （本文編辑：程旭然）