宫血宁胶囊引起大鼠子宫平滑肌收缩及其初步影响机制研究

傅 涛，王丽梅，赵振虎，善亚军，柳晓兰，从玉文



宫血宁胶囊引起大鼠子宫平滑肌收缩及其初步影响机制研究

傅 涛1，王丽梅2，赵振虎2，善亚军2，柳晓兰2，从玉文2

目的 初步了解宫血宁缩宫胶囊作用的影响机制，为合理应用宫血宁胶囊治疗妇科出血症提供理论指导。方法 Wistar大鼠随机分为宫血宁对照组和宫血宁加相应对比药物组，共9组，每组10只。应用离体子宫张力测定法，测定各组大鼠离体子宫平滑肌收缩活性。结果 0.001 μg/ml肾上腺素可完全抑制50 μg/ml宫血宁引起的大鼠子宫平滑肌收缩，而肾上腺素β1受体拮抗药阿替洛尔和美托洛尔可完全逆转肾上腺素的抑制作用。肾上腺素α受体拮抗药酚妥拉明虽能抑制α受体激动剂甲氧明引起的大鼠子宫平滑肌的收缩，但不能逆转肾上腺素对宫血宁引起大鼠子宫平滑肌收缩的抑制作用。结论 宫血宁胶囊引起的大鼠子宫平滑肌收缩的可能影响机制是通过抑制肾上腺素β受体激活发挥作用。

宫血宁胶囊；子宫平滑肌收缩；肾上腺素；肾上腺素受体

宫血宁胶囊是由滇重楼总甾体皂苷组成的单方制剂，为国家中药保护品种，具有缩宫止血、消炎镇痛等功效, 尤其对子宫功能性出血、大小产后出血、月经过多等症有显著疗效，被国内妇科专家推荐为治疗流产后止血的首选中成药制剂[1, 2]。肾上腺素受体又可分为α和β肾上腺素能受体(α-AR和β-AR)，在子宫发育不同时期及怀孕过程中，肾上腺素受体表达及功能也发生相应的变化[3]。肾上腺素通过激活兴奋性α-AR或抑制性β-AR调节子宫平滑肌的收缩活性[4]。

笔者前期研究发现，宫血宁在体内和体外均能引起子宫平滑肌节律收缩，平滑肌收缩依赖于细胞外钙内流和细胞内钙释放，并受到PLC(磷脂酶C)/IP3(1,4,5-三磷酸肌醇)、PLA2(磷脂酶A2)/AA(花生四烯酸)等多条信号转导通路的调控[5-9]。本研究观察了宫血宁引起大鼠子宫平滑肌收缩的机制，以及与肾上腺素受体激活/抑制的关系，旨在指导临床上合理应用宫血宁胶囊治疗不同类型的妇科出血。

1 材料与方法

1.1 实验试剂与设备 宫血宁胶囊(云南白药制药股份有限公司)，肾上腺素(北京永康制药厂)，Methoxamine-α受体激动剂(SIGMA公司)，高特灵(英国雅培制药有限分司)，阿替洛尔(北京益民制药厂)，美托洛尔(广州市医药工业研究所)，酚妥拉明(上海医科大学红旗制药厂)。CS502-3C数字超级恒温器(购自重庆四达实验仪器有限公司，温度波动度≤±0.5 ℃)；GTS生物信号传感器(北京微信斯达科技发展有限责任公司)；JZ101型肌肉张力换能器(高碑店市新航机电设备有限公司)。

1.2 实验动物模型及分组 Wistar大鼠，雌性，体重230～270 g，由军事医学科学院实验动物中心提供(医动字D01-3039)，适应性饲养2周。随机分为宫血宁对照组和宫血宁加相应对比药物组，共9组，每组10只。实验中使用到的药品试剂浓度分别为：宫血宁对照组(50 μg/ml)、肾上腺素(0.001 μg/ml)、阿替洛尔(4 μg/ml)、美托洛尔(4 μg/ml)、甲氧明(20 μg/ml)、高特灵(2 μg/ml，5 μg/ml，10 μg/ml)、酚妥拉明(4 μg/ml)。采用累计加药法，宫血宁及其他药物依次由低浓度加到高浓度，药物终浓度是指药物溶于麦氏管中12 ml台氏液后的浓度[5, 6]。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 离体子宫肌条制备 Wistar雌性大鼠在实验前2 d给予己烯雌酚悬浊液腹腔内注射0.1 mg/kg一次，造成人工动情期。用颈椎脱臼法处死大鼠，剖腹取出子宫，立即置于盛有台氏液的玻璃平皿中。小心剥离附于子宫壁上的结缔组织和脂肪组织。将一侧子宫角的两端分别用线结扎，转移通入有氧气、盛有12 ml台氏液并已被预温至37 ℃的营养管中，下端固定，上端与张力传感器的挂钩相连。静息20～30 min，换液2～3次。

1.3.2 大鼠离体子宫平滑肌收缩活性测定方法 前期研究发现，宫血宁(25～100 μg/ml)均能引起离体子宫平滑肌节律收缩，且随着给药时间的延长，子宫收缩的张力和频率均有降低，在给药后40 min内，子宫收缩张力可降到初始效应的95%，频率则降到初始效应的90%，据此，观察药物对宫血宁缩宫作用的影响均在宫血宁给药后40 min内完成[5, 6]。采用GTS生物信号传感器生物机能实验系统，利用肌肉张力换能器测定平滑肌收缩情况。在实验过程中台氏液的工作温度始终保持在(37±0.5) ℃。营养管中持续通入氧气，每秒1～2个气泡。给予子宫负荷1 g，待子宫稳定后，开始给药并观察10 min内的波谱变化，由计算机记录并处理数据。

2 结 果

2.1 肾上腺素β1受体拮抗药对宫血宁引起的子宫平滑肌收缩的影响 如表1所示，宫血宁50 μg/ml可引起离体子宫的节律收缩，加入肾上腺素0.001 μg/ml可完全抑制宫血宁引起的子宫平滑肌收缩；加入4 μg/ml的阿替洛尔和美托洛尔后，子宫收缩的张力和频率基本恢复到初始状态，说明宫血宁引起的子宫平滑肌收缩可能与抑制肾上腺素β1受体信号传导正相关。

2.2 肾上腺素α受体激动药/拮抗药对宫血宁引起的子宫平滑肌收缩的影响 甲氧明20 μg/ml可引起大鼠离体子宫节律性收缩，加入高特灵2 μg/ml即能完全拮抗甲氧明的作用，表明激活肾上腺素α受体可引起大鼠离体子宫的节律收缩。宫血宁50 μg/ml可引起离体大鼠子宫的节律收缩，加入高特灵至5 μg/ml和10 μg/ml，宫血宁收缩的张力和频率均没有明显降低，说明宫血宁不是通过激活肾上腺素α受体起作用。肾上腺素0.001 μg/ml可完全抑制宫血宁引起的子宫收缩，而酚妥拉明4 μg/ml不能逆转肾上腺素的抑制作用，说明肾上腺素抑制宫血宁引起的子宫平滑肌收缩与肾上腺素α受体激活无关(表1)。

表1 肾上腺素β1拮抗药和α受体拮抗药对宫血宁引起的大鼠子宫平滑肌收缩的影响 (n=10；

注：与宫血宁对照组比较，①P<0.05；与甲氧明对照组比较，②P<0.05

3 讨 论

本研究发现，肾上腺素本身不能引起子宫节律收缩，但可抑制宫血宁引起的子宫收缩，加入一定浓度的β受体拮抗药可基本消除肾上腺素对子宫收缩的抑制作用，而加入α受体拮抗药对子宫收缩没有影响，说明宫血宁引起的子宫收缩可能与抑制肾上腺素β受体信号通路有关。

肾上腺素受体(adrenergic receptor，AR) 为G蛋白偶联受体，根据其对拟肾上腺素类药物敏感性的不同及阻断药的不同，可分为α-AR和β-AR两种，其中α-AR分为α1和α2两种亚型，β-AR可分为β1、β2和β3三种亚型。肾上腺素受体在子宫发育不同时期及妊娠不同孕期，其表达及功能也发生相应的变化[3, 4,11]。妊娠期孕酮占优势，去甲肾上腺素刺激β-AR和α2-AR，激活腺苷酸环化酶，通过抑制细胞内钙升高的通路，引起子宫平滑肌舒张；而在分娩期，雌二醇升高，β-AR脱敏，去甲肾上腺素作用于α2-AR 和α1-AR，抑制腺苷酸环化酶，激活Gq/PLCγ通路，引起细胞内钙升高和子宫平滑肌收缩[3]。配基结合实验显示，人子宫平滑肌β2-AR占82%，β1-AR占18%，妊娠末期β3-AR表达增加[12]。三种亚型β-AR均能激活腺苷酸环化酶，升高细胞内cAMP浓度，引起子宫平滑肌舒张[4]。本研究发现，β1-AR选择性拮抗药阿替洛尔和美托洛尔均能完全逆转肾上腺素对宫血宁引起子宫平滑肌收缩的抑制作用，说明肾上腺素通过激活β1受体抑制宫血宁引起的子宫平滑肌收缩。下一步研究需评价β2-AR和β3-AR在肾上腺素抑制宫血宁引起子宫平滑肌收缩中的作用。

肾上腺素是肾上腺髓质分泌的主要激素，当人经历某些刺激时，如兴奋、恐惧、紧张、运动等，体内肾上腺素分泌增加[13]。因此，在宫血宁服药期间，尽量减少这些刺激，以免影响药物疗效。同时，当宫血宁与肾上腺素类或多巴胺类药物合用时，应考虑药物之间的相互影响。本研究的成果对于宫血宁胶囊在妇科出血症状中的合理应用提供了参考价值。

[1] 范光升,庄留琪.宫血宁胶囊减少药物流产后阴道出血的有效性和安全性研究[J].中国妇幼保健, 2010, 25(35): 5225-5226.

[2] 张胜利, 吴尚纯. 宫血宁治疗置宫内节育器后异常出血疗效的Meta分析 [J]. 中国计划生育学杂志, 2010, 18(8): 458-459.

[3] Dupuis M, Lévy A, Mhaouty-Kodja S. Functional coupling of rat myometrial alpha 1-adrenergic receptors to Gh alpha/tissue transglutaminase 2 during pregnancy [J]. J Biol Chem, 2004, 279(18): 19257-19263.

[4] Tanaka Y, Horinouchi T, Koike K. New insights into beta-adrenoceptors in smooth muscle: distribution of receptor subtypes and molecular mechanisms triggering muscle relaxation [J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2005,32(7):503-14.

[5] 赵振虎,李建勇,善亚军,等.宫血宁对大鼠离体子宫的节律收缩作用 [J]. 解放军药学学报,2004,20(2):93-95.

[6] 赵振虎,李建勇,苑晓玲, 等. 皂苷提取物宫血宁缩宫作用与细胞外钙内流关系的研究[J].中国药物与临床, 2005, 5(6): 415-417.

[7] 苏 佳,刘泽源,赵振虎,等.PLA2 /AA信号途径与重楼皂苷诱导大鼠子宫平滑肌收缩活动的关系研究[J]. 军事医学科学院院刊, 2008, 32(3): 264-268.

[8] Guo L, Su J, Deng B W,etal. Active pharmaceutical ingredients and mechanisms underlying phasic myometrial contractions stimulated with the saponin extract from Paris polyphylla Sm. var. yunnanensis used for abnormal uterine bleeding [J]. Hum Reprod,2008,23(4):964-971.

[9] Wang L, Jia C, Yu Z,etal. Pennogenin tetraglycoside induces rat myometrial contraction and MLC20 phosphorylation via PLC-IP(3) and RhoA/Rho kinase signaling pathways [J]. PLoS One, 2012, 7(12):e51536.

[10] Martínez M I, EstaL, Morales-Olivas F J,etal. Effect of histamine and histamine analogues on human isolated myometrial strips [J]. Br J Pharmacol, 1992 , 107(2): 528-531.

[11] Darios E S, Seitz B, Watts S W.Smooth muscle pharmacology in the isolated virgin and pregnant rat uterus and cervix [J]. J Pharmacol Exp Ther,2012,341(3):587-596.

[12] Liu Y L, Nwosu U C, Rice P J. Relaxation of isolated human myometrial muscle by beta2-adrenergic receptors but not beta1-adrenergic receptors [J]. Am J Obstet Gynecol, 1998, 179(4): 895-898.

[13] Jovanovic P, Stefanovic B, Spasojevic N,etal. Effects of oxytocin on adreno-medullary catecholamine synthesis, uptake and storage in rats exposed to chronic isolation stress [J]. Endocr Res, 2016, 41(2): 124-131.

(2017-02-13收稿 2017-03-21修回)

(责任编辑 尤伟杰)

Inhibitory effect of Gongxuening on myometrial contractions and mechanisms

FU Tao1, WANG Limei2, ZHAO Zhenhu2, SHAN Yajun2, LIU Xiaolan2, and CONG Yuwen2.
1.Department of Cardiology, the Affiliated Hospital of Institute of Aviation Medicine of Air Force, Beijing 100089, China; 2. Institute of Radiation Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China

Objective To investigate the mechanism underlying myometrial contraction stimulated by Gongxuening, and to provide reference for rational use of Gongxuening in the treatment of abnormal uterine bleeding.Methods The contraction of the uterus in vitro induced by Gongxuening in rats was observed using isolated uterine tension measurement, and the influence of such potential factors as epinephrine and its receptor modulators on the contraction was studied.Results It was found that epinephrine at the dose of 0.001μg/ml completely inhibited rat myometrial contractions induced by 50 μg/ml Gongxuening, while β1adrenergic receptor (β1-AR) antagonists atenolol and metoprolol both completely reversed the inhibition by epinephrine. α-AR antagonist phentolamine could not reverse the inhibition by epinephrine during rat myometrial contractions induced by Gongxuening, although it completely inhibited myometrial contractions induced by α-AR agonist methoamine.Conclusions The possible mechanism of rat myometrial contractions induced by Gongxuening may be through inhibition of epinephrine β- AR activation.

Gongxuening; myometrial contractions; epinephrine; adrenergic receptor

国家自然科学基金-云南联合基金重点资助项目(U1032601)

傅 涛，本科学历，副主任医师。

1.100089 北京， 空军航空医学研究所附属医院心内科； 2.100850 北京,军事医学科学院放射与辐射医学研究所

从玉文，E-mail：congyw@nic.bmi.com

R711.52